早期胃癌及癌前病变组织中LC3、Ki-67、SOX9的表达及临床意义*

张兴旺,马艳梅,朱 静

陕西省榆林市第一医院病理科(榆林719000)

胃癌为我国高发疾病，调查显示，我国每年约有35万人因胃癌死亡，严重威胁患者的生命健康[1]。研究发现，胃癌患者的预后与病情进展密切相关，早期胃癌经及时诊治后，5年生存率可高于90%[2]。目前认为，胃癌的发生发展过程中涉及到多种癌基因的活化，了解早期胃癌的发生机制，对患者治疗方案的制定以及预后判断具有十分积极的意义[3]。LC3能够有效反映肿瘤组织中自噬的活性，有研究发现，其表达与胃癌的进展、浸润程度等密切相关[4]。Ki-67能够对肿瘤组织中细胞的增殖情况进行有效反映，在肿瘤恶性程度、复发等的判断中具有较高的应用价值。SOX9属于SOX家族的重要成员，在肿瘤干细胞增殖等方面具有重要的作用，研究发现，其与胃癌患者病情进展和预后密切相关[5]。本研究旨在明确LC3、Ki-67、SOX9在早期胃癌组织中的表达情况及与患者临床特征的关系，以了解LC3、Ki-67、SOX9在早期胃癌发生、发展中的作用，现报告如下。

资料与方法

1 一般资料 纳入2018年3月至2020年2月榆林市第一医院收治的早期胃癌患者124例作为胃癌组，男82例，女42例，年龄36～73岁，平均(56.59±8.77)岁。纳入同期收治的胃上皮内瘤变患者96例，其中低级别上皮内瘤变(LGIN)47例作为LGIN组，高级别上皮内瘤变(HGIN)49例作为HGIN组。LGIN组男30例，女17例，年龄34～70岁，平均(56.79±8.94)岁。HGIN组男33例，女16例，年龄38～75岁，平均(57.36±9.12)岁。同期收治的慢性胃炎患者40例作为胃炎组，男25例，女15例，年龄36～70岁，平均(56.42±8.61)岁。同期入院行胃镜检查的健康者40例作为对照组，男26例，女14例，年龄38～74岁，平均(57.12±9.03)岁。五组患者的年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医学伦理委员会审核后进行。病例纳入标准：均经术后病理或者胃镜检查后，首次明确诊断；病历资料完整；知情同意。排除标准：放化疗史；胃部手术史；合并其他恶性肿瘤；免疫相关性疾病；近期免疫抑制剂使用史；近期激素使用史。

2 检测方法 使用免疫组化法对五组胃黏膜组织中的LC3、Ki-67、SOX9表达情况进行检测。取胃黏膜石蜡标本，在进行脱蜡、抗原修复后，添加LC3、Ki-67、SOX9一抗，工作浓度为1∶50，随后置于4℃下过夜。洗涤封闭后，添加生物素化二抗，于37 ℃下进行孵育，持续30 min。使用DAB进行显色，随后进行复染、脱水、封片，置于显微镜下观察。所有试剂均购买自艾博抗(上海)贸易有限公司。阴性对照选择PBS代替一抗进行，阳性对照使用已知的LC3、Ki-67、SOX9阳性切片。切片中出现棕黄色颗粒代表检测阳性。

3 观察指标 ①LC3、Ki-67、SOX9的表达阳性率：对不同分组LC3、Ki-67、SOX9的表达阳性率进行比较；每个切片中随机选择10个视野进行分析，根据染色细胞占比和染色强度之积对阳性率进行判定，阴性为≤3分，阳性为>3分；其中染色强度分值范围0～3分，分别为未染色(0分)、浅黄(1分)、棕黄(2分)以及棕褐色(3分)；染色细胞占比评分分值范围0～3分，分别为全阴性或染色细胞占比低于5%(0分)；5%<染色细胞占比≤25%(1分)；25%<染色细胞占比≤50%(2分)；50%<染色细胞占比(3分)。②胃癌组不同临床特征患者LC3、Ki-67、SOX9的阳性率：临床特征包括年龄(≥60岁和<60岁)，性别(男和女)，肿瘤直径≥2 cm，分化程度(高分化和中低分化)，浸润范围(局限至黏膜和浸润至黏膜下层)，淋巴结转移(是和否)等。

4 统计学方法 采用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，不同分组LC3、Ki-67、SOX9的表达阳性率以及胃癌组不同临床特征患者LC3、Ki-67、SOX9的表达阳性率以[例(%)]表示，使用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 不同分组LC3、Ki-67、SOX9的表达阳性率比较 对照组、胃炎组、HGIN组、LGIN组、胃癌组的LC3表达阳性率逐渐增加，胃癌组LC3、Ki-67、SOX9的表达阳性率均明显高于对照组、胃炎组、HGIN组和LGIN组(P<0.05)，见表1。

表1 不同分组LC3、Ki-67、SOX9表达阳性率比较[例(%)]

2 胃癌组不同临床特征患者LC3的表达阳性率比较 胃癌组高分化患者LC3表达阳性率明显高于中低分化患者(P<0.05)。年龄、性别、肿瘤直径、浸润范围、淋巴结转移与LC3表达阳性率均无明显关系(P>0.05)。见表2。

表2 胃癌组不同临床特征患者LC3阳性表达率比较[例(%)]

3 胃癌组不同临床特征患者Ki-67的表达阳性率比较 年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、浸润范围、淋巴结转移与Ki-67表达阳性率均无明显关系(P>0.05)。见表3。

表3 胃癌组不同临床特征患者Ki-67表达阳性率比较[例(%)]

4 胃癌组不同临床特征患者SOX9的表达阳性率比较 胃癌组浸润至黏膜下层的SOX9表达阳性率明显高于局限至黏膜(P<0.05)。年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移与SOX9表达阳性率均无明显关系(P>0.05)。见表4。

表4 胃癌组不同临床特征患者SOX9表达阳性率比较[例(%)]

讨 论

胃癌的发展需要经过复杂的癌前病变过程，在这个过程中，肿瘤细胞性质的转变优先于形态学的变化。研究发现，在癌前病变向胃癌转变的过程中，肿瘤组织存在多种癌基因的活化[6]。其中自噬为肿瘤发生发展的重要生理过程，可通过对受损肿瘤细胞的降解，促进肿瘤组织的代谢平衡和生长。LC3为自噬的主要调控基因，研究发现，其表达水平可对肿瘤组织自噬的活性进行有效反映，并与肿瘤分期具有密切的关系[7]。Ki-67为机体中关键的核增殖基因，能够对细胞增殖动态进行有效反映。有研究发现，Ki-67可随胃部病变的进展，表达阳性率逐渐增强[8]。SOX9参与细胞生长、分化等多个生理过程，据报道，SOX9表达水平过高时，可通过参与Wnt/β-连环蛋白的激活，对肿瘤细胞的增殖进行有效调控[9]。通过了解癌前病变向早期胃癌的转化机制，对胃癌发病率的降低，以及患者预后的改善可能具有积极的意义。

本研究发现，LC3、Ki-67和SOX9的表达阳性率因胃部病变类型不同而表现出较大的差异，其中早期胃癌组织中LC3、Ki-67和SOX9的表达阳性率均明显高于其他分组。其中正常组织中，为了维持细胞功能的稳定，自噬水平往往较低，胃炎患者的病变组织中，由于细胞的萎缩以及数量的降低，使自噬泡等细胞器聚集于细胞膜下，使LC3多在细胞膜或膜下表达，表达水平较低[10]。在上皮内瘤变中，病变组织的增殖活动开始增强，自噬活性逐渐增加。随着病情的进展，当处于早期胃癌阶段时，由于细胞代谢及增殖的进一步旺盛，自噬活性明显增强，使LC3可在细胞质和细胞膜下进行表达，进而使早期胃癌患者肿瘤组织中的LC3水平明显高于其他病变组织[11]。对LC3与早期胃癌患者临床特征的关系进行分析发现，LC3表达阳性率与分化程度有关，这可能是由于随着肿瘤分化程度的下降，侵袭能力上升，使基因发生突变积累，导致多个抑癌基因失去表达能力，进而使肿瘤细胞的自噬水平下降，LC3表达阳性率下降等因素相关[12]。

Ki-67作为临床常用的肿瘤标志物，与肿瘤细胞增殖情况具有一定的相关性，本研究发现，随着癌前病变向胃癌的转变，Ki-67的表达阳性率提高，这可能与Ki-67能够提高细胞外调节蛋白激酶活性，提高其在肿瘤组织的表达水平，进而促进了胃癌的发生和发展等因素相关[13]。然而，本研究发现，Ki-67与早期胃癌患者年龄、性别、肿瘤浸润深度、分化程度等均无明显关系，提示Ki-67在早期胃癌患者预后判断中的应用价值可能有限，具体机制还需扩大样本进行更为深入的研究。

正常组织中，SOX9主要负责干细胞分化的调控，随着机体慢性损伤的加剧，干细胞活性增强，使SOX9表达阳性率上升。有研究发现，SOX9能够促进胃癌的发展，并在肿瘤细胞增殖中起到重要作用，具有一定的致瘤效果[14]。本研究发现，早期胃癌浸润深度与SOX9相关，这可能与SOX9能够通过提高CEACAM1的表达和抑制肿瘤细胞凋亡等机制，而使肿瘤细胞扩散和增殖能力增强等因素相关，这也提示SOX9与胃癌进展可能具有一定的相关性[15-16]。

综上所述，LC3、Ki-67和SOX9的阳性表达率均随着胃黏膜病变严重程度的增加而上升，提示三者均可能参与癌前病变向早期胃癌的转化过程中。关于LC3、Ki-67和SOX9与早期胃癌患者预后的相关性还需更为深入的研究。