血清LncRNA MIR155HG对冠心病患者PCI后冠状动脉再狭窄的预测价值

张浩，徐寅，郭明凯，马良

冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是冠状动脉（冠脉）血管粥样硬化病变导致血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血缺氧、甚至坏死而引起的心脏病[1]。目前，经皮冠状动脉介入术（PCI）是临床治疗冠心病的重要手段，可及时挽救濒临死亡的心肌，提高患者术后生活质量[2]。但术后再狭窄发生率达10%～20%，严重影响患者预后[3]。PCI后冠脉造影检查或血管内超声检查是确诊冠脉再狭窄的“金标准”，但此时确诊再狭窄已延误治疗的最佳时机，也可能因二次手术造成严重疾病。因此寻找灵敏度高、特异度好的标志物，用于预测早期PCI后冠脉扩张部再狭窄，对降低再狭窄发生率及提高患者预后有重要意义。长链非编码RNA（LncRNA）是一种长度超过200核苷酸的非编码RNA，能够在多重水平上调控基因表达，广泛参与机体几乎所有的生理和病理过程[4]。研究发现，血清中长链非编码RNA MIR155宿主基因（LncRNA MIR155HG）表达水平与慢性心力衰竭有一定相关性，可在一定程度上反映心力衰竭严重程度[5]。目前鲜有关于LncRNA MIR155HG与冠心病患者PCI后冠脉再狭窄的报道，本研究旨在通过检测血清中LncRNA MIR155HG在冠心病患者PCI手术前后的变化规律，分析其与冠心病患者PCI手术后冠脉再狭窄的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取2015年4月～2017年4月于黄河三门峡医院心血管内科接受治疗的155例冠心病PCI患者，根据PCI后6个月患者血管内超声结果提示是否存在再狭窄将患者分为再狭窄组65例，其中男性35例，女性30例，年龄54～79岁，平均年龄（63.24±10.12）岁，病变部位在前降支20例，右冠31例，回旋支14例。未狭窄组90例，其中男性49例，女性41例，年龄51～78岁，平均年龄（64.25±10.25）岁，病变部位在前降支33例，右冠40例，回旋支17例。另选取105例同期健康体检者为对照组，其中男性57例，女性48例，年龄51～77岁，平均年龄（61.23±11.35）。纳入标准：①临床症状、超声心动图结合实验室检查等确诊为冠心病，并符合冠心病诊断标准[6]；②PCI后再狭窄的诊断标准[7]：经血管内超声检查提示患者原扩张部位支架内以及节段内的血管腔直径缩小＞50%；③所有患者及家属均知情同意，并签署知情同意书。排除标准：①有系统性免疫缺陷症的患者、家族遗传病史；②合并各种急、慢性感染病者；③水电解质紊乱、出血、严重糖尿病并发症者；④近期有脑血管事件或重大外伤。

1.2 主要试剂和仪器低温高速离心机、Nano Drop 2000（美国Thermo Scientific公司），荧光实时定量PCR仪（美国Applied biosygtems公司），Trizol试剂（美国Invirotrogen公司），逆转录试剂盒（北京天根生物科技公司），SYBR Premix Ex Taq TM试剂盒（大连TaKaRa公司），-80℃超低温冰箱（美国Thermo公司），Milli-Q超净水净化系统（美国Millpore公司），引物由上海生工生物工程有限公司设计并合成。

1.3 研究方法

1.3.1 样本采集所有受试者均于PCI后次日清晨空腹抽取外周静脉血5 ml，静置30 min，室温3000 rpm/min，离心15 min，吸取上清液分别装入EP管中，置于-80℃冰箱中保存备用。

1.3.2 研究对象临床资料的收集收集受试者年龄、吸烟史、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、体质指数（BMI）、空腹血糖（FBG）、左室射血分数（LVEF）、左室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末直径（LVESD）等临床检测数据。

1.3.3 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测三组受试者血清中LncRNA MIR155HG表达按照Trizol法提取受试者血清样本中总RNA，分光光度计测总RNA纯度及浓度，根据逆转录试剂盒说明将RNA反转录为cDNA。参照SYBR Premix Ex Taq TM试剂盒说明书进行qRT-PCR反应，以GAPDH基因为内参，LncRNA MIR155HG、GAPDH引物序列（表1）。反应条件为：95℃，10 min；40个PCR循环（95℃，10 s；60℃，60 s，72℃，15 s）。采用2-ΔΔCt方法计算受试者血清中LncRNA MIR155HG相对表达量。

1.3.4 Gensini评分标准术后6个月采用Gensini积分法评估患者冠脉硬化狭窄程度，狭窄严重程度评分标准：＜25%记1分；26%～50%记2分；51%～75%记4分；76%～90%记8分；91%～99%记16分；完全闭合（100%）记32分。再根据不同冠脉分支确定相应系数，以每一冠脉狭窄基本评分乘以该病变部位的系数，即为该病变血管的评分，各病变血管得分总和即为该患者冠脉病变狭窄程度的总评分。

1.4 统计学分析采用统计学软件SPSS 22.0进行数据分析。计量资料以平均数±标准差（±s）描述，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验；计数资料以[n（%）]描述，行卡方检验。采用Pearson法分析冠心病患者PCI术后再狭窄组血清LncRNA MIR155HG表达水平与Gensini评分的关系；受试者工作特征曲线（ROC）曲线评估血清中LncRNA MIR155HG表达水平对冠脉再狭窄的诊断价值。当P＜0.05时，为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受试者一般资料比较三组受试者相比性别、年龄、吸烟史、FBG无显著差异（P＞0.05）；SBP、DBP、BMI、LVEF、LVEDD、LVESD有显著差异（P＜0.05）。与对照组相比，再狭窄组和未狭窄组患者SBP、DBP、BMI、LVEF、LVEDD、LVESD有显著差异（P＜0.05）；与未狭窄组相比，再狭窄组患者SBP、DBP、BMI、LVEF、LVEDD、LVESD也有显著差异（P＜0.05）（表2）。

2.2 三组受试者血清中LncRNA MIR155HG表达水平比较再狭窄组患者血清中LncRNA MIR155HG表达水平显著高于未狭窄组和对照组（P＜0.05）；未狭窄组患者血清中LncRNA MIR155HG表达水平显著高于对照组（P＜0.05）（表3）。

2.3 再狭窄组患者血清LncRNA MIR155HG表达水平与Gensini评分的关系以Gensini评分为因变量，LncRNA MIR155HG表达水平为自变量，进行相关性分析，结果显示血清LncRNA MIR155HG表达水平与Gensini评分呈正相关，具有统计学意义（r=0.542，P＜0.05）（图1）。

2.4 血清中LncRNA MIR155HG表达水平对诊断冠状动脉再狭窄的ROC曲线分析ROC曲线显示，LncRNA MIR155HG预测冠心病患者PCI术后冠状动脉再狭窄的ROC曲线下面积为0.881（95%CI：0.804～0.959），截断值为6.550，敏感度为80.0%，特异性为87.5%（图2）。

3 讨论

冠心病是一种常见且死亡率很高的疾病，近年来伴随社会的发展，人们生活节奏的加快和压力的增加，冠心病发病率逐年增高，并呈现年轻化的趋势，严重威胁人们的健康和生活质量[8]。PCI是目前临床治疗冠心病的重要手段，能够有效减少不稳定型心绞痛患者病死率，提高非致死性心肌梗死、难治性心绞痛患者预后[9]。再狭窄是指PCI术后6个月行冠脉造影，冠脉血管直径缩小超过50%，其形成机制主要是血管内膜过度增殖[10]。

LncRNA是一类位于细胞核内或胞浆内的功能性RNA分子，普遍在真核细胞内转录，据推测，人类基因组中存在超过30 000个LncRNA，尽管它们本身不能编码蛋白质，但可调节基因在转录及转录后水平的表达。其还参与许多细胞功能，如染色质重塑、RNA衰变、表观遗传调控和染色质修饰、肿瘤的形成、侵袭和转移等[11]。研究发现，LncRNA Heat2在心力衰竭患者的血液中升高，并控制细胞的功能[12]。MIR155HG是人染色体9p21上的一个重要的LncRNA，位于INK4基因座，长度为1500个核苷酸，因其为微小RNA-155的宿主基因而得名。研究发现，MIR155HG在多种肿瘤中高表达，通过转录因子转录激活得以表达上调，继而抑制癌基因的表达[13]。Yan等[14]发现，LncRNA MIR155HG在胰腺癌患者组织和细胞中表达增加，与患者不良预后呈正相关，可作为胰腺癌的新型诊断和治疗靶标。

最近研究表明，LncRNA 的异常表达与心血管疾病的发生密切相关。本研究发现，三组受试者相比性别、年龄、吸烟史、FBG无显著差异；SBP、DBP、BMI、LVEF、LVEDD、LVESD有显著差异。与对照组相比，再狭窄组和未狭窄组患者SBP、DBP、BMI、LVEF、LVEDD、LVESD有显著差异；与未狭窄组相比，再狭窄组患者SBP、DBP、BMI、LVEF、LVEDD、LVESD也有显著差异。提示冠心病患者PCI后未狭窄组心脏功能有所改善，明显好于再狭窄组患者。再狭窄组患者血清中LncRNA MIR155HG表达水平显著高于未狭窄组和对照组；未狭窄组患者血清中LncRNA MIR155HG表达水平显著高于对照组。表明LncRNA MIR155HG在冠心病PCI后再狭窄患者体内表达水平增高，猜测其高表达可能阻碍血管损伤的修复过程，不利于冠心病病情的改善。本研究应用Gensini评分对冠心病PCI患者术后6个月的冠脉再狭窄进行评估分析，并用Pearson法分析LncRNA MIR155HG与Gensini评分的相关性，结果显示血清LncRNA MIR155HG表达水平与Gensini评分呈正相关。表明LncRNA MIR155HG水平越高，患者冠脉再狭窄程度也越高。ROC曲线分析结果显示，LncRNA MIR155HG预测冠心病患者PCI后冠脉再狭窄的ROC曲线下面积为0.881（95%CI：0.804～0.959），截断值为6.550，敏感度为80.0%，特异性为87.5%。表明其对冠心病患者PCI后冠脉再狭窄具有一定诊断价值。

表1 qRT-PCR引物序列

表2 三组受试者一般资料比较（±s）

表2 三组受试者一般资料比较（±s）

注：SBP：收缩压； DBP：舒张压；BMI：体质指数； FBG：空腹血糖； LVEF：左室射血分数； LVEDD：左室舒张末期内径；LVESD：左心室收缩末直径；与对照组相比，aP＜0.05；与未狭窄组相比，bP＜0.05

项目 再狭窄组（n=65例） 未狭窄组（n=90） 对照组（n=105） F值 P值性别（男/女） 35/30 49/41 57/48 0.006 0.997年龄（岁） 63.24±10.12 64.25±10.25 61.23±11.35 2.019 0.135吸烟史（n，%） 29（44.62） 42（46.67） 50（47.62） 0.146 0.929 SBP（mmHg） 122.56±10.25ab 135.22±14.23a 140.12±16.62 30.214 0.000 DBP（mmHg） 76.36±6.48ab 84.26±7.23a 90.35±8.65 67.048 0.000 BMI（kg/m2） 25.14±3.62ab 23.64±3.56a 21.53±3.24 23.299 0.000 FBG（mmol/L） 5.21±0.86 5.36±0.87 5.16±0.92 1.284 0.279 LVEF（%） 32.36±4.36ab 54.35±7.62a 64.26±7.33 441.800 0.000 LVEDD（mm） 64.26±5.67ab 48.56±5.51a 42.23±3.51 419.948 0.000 LVESD（mm） 53.75±10.28ab 38.36±6.28a 28.56±4.38 266.837 0.000

表3 三组受试者血清中LncRNA MIR155HG表达水平比较（±s）

表3 三组受试者血清中LncRNA MIR155HG表达水平比较（±s）

注： LncRNA MIR155HG：长链非编码RNA MIR155宿主基因；与对照组相比，aP＜0.05；与未狭窄组相比，bP＜0.05

组别 n LncRNA MIR155HG再狭窄组 65 8.63±2.36ab未狭窄组 90 4.67±1.46a对照组 105 2.19±0.75 F值 - 353.848 P值 - 0.000

图1 再狭窄组患者血清LncRNA MIR155HG表达水平与Gensini评分的关系

图2 血清中LncRNA MIR155HG表达水平对诊断冠状动脉再狭窄的ROC曲线分析

综上所述，与未狭窄组和对照组相比，再狭窄组患者血清中LncRNA MIR155HG表达水平明显升高，与Gensini评分呈正相关，LncRNA MIR155HG检测对冠心病患者PCI后冠脉再狭窄具有一定诊断价值。但由于本研究样本量较少，研究方法较为单一，具体作用机制还需进一步进行实验验证。