microRNA-106b-5p在胃癌中的表达及与病理分级和预后的相关性研究

辛瑞娟,李智勇,曹贞子,姚 丽,游颜杰,白飞虎

胃癌的发生发展是一个以癌基因和抑癌基因的遗传和表观遗传学改变为特征的复杂的多步骤过程[1]，但是确切的分子机制仍在研究中。microRNA(微RNA或miRNA)是一种小型非编码RNA，近年大量的研究表明miRNA在肿瘤的发生、发展中起到重要作用，主要作用机制是通过影响其下游的靶基因，调控细胞增殖、分化、凋亡等功能[2]。miR-106b 定位于人染色体7q22 Mcm7基因内含子13上，是miR-106b～25基因簇家族成员之一，包括miR-106b、miR-25及miR-93 三种基因[3]，其中miR-106b在不同恶性肿瘤中具有不同的作用，例如在肾癌[4]、肝癌[5]及结直肠癌[6]中均为高表达，起到癌基因的作用；而在胶质细胞癌[7]中为低表达，在肿瘤发生、发展中起抑制作用。那么在胃癌中又是如何表达的呢，本研究主要对miR-106b在胃癌组织中的表达与胃癌病理分期及预后之间的关系进行了初步的探讨。

1 资料与方法

1.1 组织标本:25例胃癌患者及其对应的癌旁组织均来自2017年1月-2017年12月宁夏回族自治区人民医院胃肠外科手术标本，均行病理检查证实为胃腺癌。所有胃癌标本及相应癌旁组织均在离体后10分钟内收集，存放在RNAlater(Thermo Fisher Scientific,Inc 美国)内，先4 ℃冰箱过夜，后-80 ℃冰箱冻存。该实验通过了宁夏回族自治区人民医院伦理委员会的批准，所有的组织标本全部征得了患者知情同意。

1.2 纳入及排除标准：纳入标准。①符合《胃癌诊断标准》[8]中有关诊断标准，且愿意配合研究；均首次诊断为胃癌，胃部无既往手术史或放化疗史，并经术后病理学诊断确诊；②临床资料齐全者；③生存期限>3个月。排除标准。①中途退出研究者；②精神异常者；③合并其他恶性肿瘤患者；④合并先天免疫功能缺陷或其他遗传性疾病，严重肝肾功能障碍，严重慢性或急性感染性疾病患者。

1.3 TNM分期：根据美国癌症联合委员会(AJCC)肿瘤淋巴结转移(TNM)标准(第八版)分期[9]。

1.4 预后情况:所有患者术后接受随访，随访截至2020年6月。以手术日开始末次随访时间计算生存时间，研究结束、失访及其他原因死亡作为终点事件。

1.5 统计学方法:采用SPSS 19.0统计软件,以胃癌组织miR-106b相对表达量的均值为临界值，miR-106b的表达量采用中位数(M)和四分位数间距(Q)表示，与临床病理特征之间的关系采用Mann-Whitney秩和检验。Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rankχ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-106b在胃癌组织及癌旁组织中的表达:miR-106b在胃腺癌组织中的表达水平为(0.9259，1.4216)，在癌旁组织中的表达为(0.2155，0.3568)，胃癌组织中miR-106b的表达水平显著高于癌旁组织(Z=-3.463，P<0.05)。

2.2 胃癌组织中miR-106b的表达水平与胃癌的临床病理指标的关系:统计结果显示，miR-106b表达水平在临床TNM分期Ⅲ/Ⅳ期高于Ⅰ/Ⅱ期(P<0.05)，淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)；miR-106b表达与患者性别、年龄、分化程度无关(P>0.05),见表1。

表1 胃癌组织中miR-106b的表达水平与胃癌的临床病理指标

2.3 miR-106b表达对胃癌患者预后的影响:应用Kaplan Meier法计算胃癌患者的生存率。患者肿瘤组织中miR-106b表达不同，造成患者生存时间不同。生存曲线显示高表达组的生存时间较低表达组有降低的趋势，但是差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

恶性肿瘤之所以存在治疗上的困难和预后不良的问题，究其原因主要在于其易侵袭性和转移能力强，这也是胃癌导致死亡的主要原因。如果存在一种方式可以阻止胃癌的侵袭与转移，那么对于胃癌的治疗与预后将具有重大意义。MicroRNA的发现为肿瘤的研究打开了新的视野，目前大量研究证实，MicroRNA可以作为新的基因调控形式，参与调控肿瘤的发生、发展[10]。

项目组前期通过microRNA array在胃癌细胞中筛选出了153个表达异常的miRNA，包括74个表达上调的miRNA和79个表达下调的miRNA,其中miR-106b就在其中，且表现出明显的差异性表达[11]，通过查阅文献我们发现它在多种恶性肿瘤中也有异常表达。miR-106b在非小细胞肺癌中高表达[12]，且miRNA-106b表达与肿瘤淋巴结转移分期、不良预后密切相关；在乳腺癌中[13]，miR-106b的表达量明显高于邻近正常组织，在乳腺癌细胞中也证实了其表达量明显高于乳腺正常细胞，且研究发现它可以靶向FUT6促进人类乳腺癌细胞迁移、侵袭和增殖；在肝癌中[14]，下调miR-106b的表达后可以明显抑制肝癌细胞的生长，增加肝癌细胞的凋亡，且其作用机制可能与靶向Zbtb7a有因果关系；而在胃癌相关成纤维细胞[15]和食管癌[16]中miR-106b可以通过靶向PTEN促进细胞迁移和侵袭。由此可见，miR-106b在肿瘤中的表达和作用机制是不同的，具体的分子机制还有待进一步研究。

本项目研究选择了25对胃癌组织及癌旁组织进行了初步验证，结果表明miR-106b在胃癌组织中高表达，它的表达水平与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期有关，即TNM分期越高及有淋巴结转移的患者，miR-106b的表达越高，差异有统计学意义，这一结果与Zhang[17]等的研究结果是一致的。生存分析结果显示肿瘤组织中miR-106b表达水平较低患者的生存时间较表达水平较高患者的生存时间有升高的趋势，但是差异无统计学意义，分析原因主要是胃癌术后的生存期较其他肿瘤相对较高，本文随访时间较短，因此导致生存时间在统计上的偏差，如果进一步延长随访时间，可能结果会更有意义。由此我们推测，miR-106b可能参与了胃癌的转移过程，对于胃癌患者的预后有一定的参考意义。

本项目也存在一定的不足，首先在实验设计上，样本量较少，还需进一步收集大样本进一步验证。其次如果能收集转移的淋巴结组织进行研究会更有意义，主要原因是淋巴结清扫较多，数量较大，一一验证存在一定的困难。最后是随访时间的局限，后续会跟进随访，争取做到5年甚至10年的生存期研究。