HPLC法测定感冒疏风片中芍药苷的含量

康绍建 罗 茜

1.云南省食品药品审核查验中心，云南 昆明 650011；2.昆明医科大学，云南 昆明 650500

感冒疏风片是由麻黄绒、苦杏仁、桂枝、防风、白芍、紫苏叶、甘草、桔梗、独活、大枣、生姜、炒谷芽等12种中药组成的复方制剂，具有辛温解表、宣肺和中的功效,用于治疗风寒感冒，发热咳嗽，头痛怕冷，鼻流清涕，骨节酸痛，四肢疲倦的症状。现行质量标准(卫生部药品标准中药成方制剂,第 11 册)只有片剂项下的常规检查项, 无含量测定项目,不能全面有效控制该药品的内在质量和疗效[1-2]。白芍为本方中的君药，白芍的活性成分为白芍总苷，其芍药苷是白芍总苷的重要有效成分[3]。芍药苷paeoniflorin是白芍的主要有效成分，属于一种天然水溶性单萜类糖苷[4]，具有抗炎镇痛、抑菌、解热、抗抑郁、神经保护、抗肿瘤、调节免疫、肝保护、心脏保护等药理作用。通过对感冒疏风片中芍药苷含量测定方法的研究，为全面评价感冒疏风片的质量提供简便快速、准确可靠的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 The Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪；PM4-1300TL超声仪；UV-2550紫外可见分光光度计；Sartorius CPA225D电子分析天平(十万分之一)；Sartorius BS224S电子分析天平(万分之一)。

1.2 试药 感冒疏风片(批号490251、490005、490041、480862)由昆明中药厂有限公司提供；(批号190116)由云南腾药制药有限公司提供；芍药苷对照品(110736-201842)(含量以97.4%计)由中国药品生物制品检定研究院提供。实验用的乙腈为色谱纯、由美国默克公司生产；水为娃哈哈纯净水；乙醇，磷酸等其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88)；流速为 1.0 mL·min-1,检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计应不低于2000。

2.2 对照品溶液制备 精密称取芍药苷对照品10.11 mg (含量以97.4%计)，加入甲醇CH3OH定容至100 mL,制得每1 mL含0.09847 mg的芍药苷对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取感冒疏风片20片，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再次称定重量，用稀乙醇补足减失的失重，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.4 阴性样品溶液制备 根据处方制备缺白芍的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液，即得。

2.5 专属性试验 依据2.1项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液各10 μL，测定。结果表明，在与对照品溶液色谱图相应保留时间处，供试品溶液有芍药苷特征吸收峰，而阴性对照液无相应吸收峰，表明专属性良好。如图 1～3所示。

图1 芍药苷对照品HPLC图

图2 感冒疏风片样品HPLC图

图3 阴性样品HPLC图

2.6 线性关系的考察 精密吸取芍药苷对照品溶液(0.09847 mg/mL)2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、30 μL、40 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标(X)，以测得峰面积为纵坐标(Y)，线性回归，即得回归方程为：Y=142786127X-6127091，R2=1.00。线性范围：0.19694～3.9388μg，结果表明线性关系良好。

2.7 精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液(0.09847 mg/mL)10 μL，连续进样6次，测定芍药苷峰面积，结果峰面积RSD为0.3%，说明仪器精密度良好。

2.8 重复性考察 取同一批号(批号:490251)样品6份,按上述“2.3”项下供试品溶液制备方法, 平行处理并测定, 结果6次测得芍药苷平均含量为6.8336 mg/g，RSD为0.49% ，表明重复性良好。

2.9 稳定性考察 按上述“2.3”项下方法制备供试品溶液，室温条件下每2 h进样1次，以峰面积计算， RSD(n=7)为1.40%。结果表明室温条件下，供试品溶液中芍药苷在12 h内基本稳定。

2.10 准确度考察 精密称取6份已知含量(6.8336 mg/g)供试品(批号490251)各约 0.5 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入芍药苷对照品溶液(浓度0.6654 mg/mL)5 mL, 按上述“2.3”项下方法制备所需溶液，照含量测定方法项下操作，测定供试品溶液中芍药苷的含量，计算芍药苷的平均回收率(n=6)为97.64%；RSD为0.91%；结果表明方法准确度良好。见表1。

表1 准确度试验结果

2.11 样品测定 按上述色谱条件，依法测定5批样品中芍药苷的含量，结果见表2。

表2 5批样品含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相的选择 感冒疏风片处方中所含成分复杂，为了将芍药苷与其他成分较好的分离，参考文献，采用2种不同流动相：①乙腈-水和②乙腈-0.1%磷酸溶液，试验结果表明：流动相①分离效果不好；流动相②样品能获得较好的分离，且得到对称性较好的芍药苷峰；对流动相②比例进行调整发现乙腈：0.1%磷酸溶液(12∶88)条件下，分离效果最佳。

3.2 提取条件的选择 采用稀乙醇，甲醇，50%甲醇为提取溶剂，试验结果表明，当提取溶剂为稀乙醇时，提取效果最好，故选用稀乙醇。实验通过对稀乙醇超声提取30 min、加热回流提取 30 min、索氏提取2 h及3 h比较，其中索氏提取 2 h 含量最低，索氏提取3 h含量接近超声提取30 min和加热回流提取30 min；超声提取效果较好且简便快捷，故选用超声提取30 min。