小儿牛黄清心散对幼年大鼠的毒性作用

范治云， 李志坤， 赵 岩， 孙昌华， 祝清芬

(山东省食品药品检验研究院，国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室，山东 济南 250101)

药品上市后再评价是对药品上市前研究的必要补充及上市后研究的全面总结，是药品评价过程的重要阶段。由于历史原因，大部分中成药在临床广泛使用的同时，其安全性缺乏科学的临床证据。尤其是近年来，中药安全事件屡见报端，人们从“中药安全无毒”的片面认识走入了“中药谋财害命”的另一个片面认识，其安全性问题成为医药界乃至社会各界所关注的热点[1-2]。小儿牛黄清心散主要由天麻、雄黄等14味中药配伍而成，为临床较为常用的儿科药物[3-5]，其用药安全性问题更为引起重视，但其安全性研究国内外未见报道[6-7]。为此，本文依据长期毒性实验方法和技术要求，并根据小儿牛黄清心散儿童用药的特点，选用幼年大鼠，对其进行了为期14 d的毒性试验。

1 材料

1.1 动物 SD大鼠，4～5周龄，体质量54～63 g，雌雄各半，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，实验动物生产许可证号SCXK(鲁)2014-0007，温度20～26 ℃，相对湿度40%～70%，实验动物使用许可证号SYXK(鲁)2013-0012。

1.2 药物 小儿牛黄清心散(山东方健制药有限公司，批号20160914，0.3 g/袋)。实验时用蒸馏水配制成所需浓度。

1.3 仪器 ADVIA 2120i全血细胞分析仪(德国西门子公司)；CA-530全自动血凝分析仪(日本希森美康公司)；7180全自动生化分析仪、DCS-600EXV骨密度仪(日本日立公司)；DP72病理图文处理系统、BX51生物显微镜(日本奥林巴斯公司)。

2 方法

参考文献[8-10]报道。

2.1 分组与给药 取上述大鼠120只，按体质量随机分成4组，每组30只，雌雄各半。检疫7 d后，每笼3只，雌雄分养，并开始给药，小儿牛黄清心散低、中、高剂量分别用蒸馏水配成62.5、125、250 mg/mL的混悬液，给药容量15.0 mL/kg，每日上下午各灌胃给药1次，剂量分别达1.875、3.75、7.5 g/kg，对照组同法给等体积蒸馏水。给药后予常规颗粒饲料喂饲，连续给药14 d。每周测体质量2次，摄食量2次，并根据体质量变化调整药量。每日观察动物的外观、行为体征、活动、精神状态、进食、体质量变化及粪便等情况。在给药14 d和恢复期(停药14 d)后，各剂量组分别抽取2/3和1/3的大鼠，麻醉采血后处死。收集全血，检测血常规、血凝、血生化指标。同时剖取取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、子宫、卵巢、睾丸、附睾等重要脏器组织，肉眼观察组织脏器的变化、称重，计算各脏器指数(单位g/100 g体质量)，并作病理学组织检查。另取一侧股骨作骨密度检查。

3 结果

3.1 一般观察 在给药期间，各剂量组大鼠的外观体征、行为活动等均无明显异常；给药当天下午，药物组粪便呈土黄色软便，恢复期停药第2天，逐渐恢复正常；中、高剂量组大鼠日摄食量降低，体质量增长缓慢；恢复期体质量、日摄食量等均恢复正常。见表1～2。

表1 大鼠给药前、给药期间和恢复期体质量

表2 大鼠给药期间及恢复期日摄食量统计结果(g/只,

3.2 对大鼠血常规、血凝学的影响 给药结束，其血常规指标无显著变化(P>0.05)。 高剂量纤维蛋白原(Fbg)指标高于对照组，恢复期恢复正常。血凝学检查结果见表3～4。

表3 给药结束血凝学检查结果(±s, n=10)

表4 恢复期观察结束血凝学检查结果

3.3 对大鼠血生化的影响 低剂量组血生化指标无显著变化(P>0.05)。中剂量大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、甘油三酯(TG)指标增高；高剂量组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、甘油三酯(TG)指标增高；停药14 d后，除AST外，其他各项指标基本恢复正常。见表5～8。

表5 雄性动物给药结束血清生化指标检测结果

表6 雌性动物给药结束血清生化指标检测结果

表7 雄性动物恢复期结束血清生化指标检测结果

表8 雌性动物恢复期结束血清生化指标检测结果

3.4 对大鼠脏器系数、骨密度及脏器病理组织学的影响 给药结束、恢复期结束各组动物组织脏器肉眼观察其位置，形态，色泽，硬度等均无明显异常情况，各组主要脏器系数及骨密度与对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。组织病理学检查，本品各剂量组灌胃给药14 d后恢复14 d，未见明显药物相关性组织病理学改变。

4 讨论

小儿牛黄清心散由天麻、胆南星、黄连、赤芍、大黄、全蝎、水牛角浓缩粉、僵蚕(麸炒)、体外培育牛黄、琥珀、雄黄、冰片、朱砂等组成， 其中黄连、大黄、牛黄、雄黄等多种成分为黄色，因此大鼠各剂量组连续灌胃给予小儿牛黄清心散后粪便呈黄色为样品本身颜色所致，无毒理学意义，且停药后各剂量组大鼠粪便相继恢复正常。与对照组比较，高剂量组大鼠摄食量显著降低，体质量呈现显著抑制作用，这可能与本品含具有泻下利便作用的大黄等成分有关。

中剂量组大鼠血清ALT、TBIL、TG指标显著升高；高剂量组大鼠血清ALT、AST、TBIL、TG及血凝Fbg指标显著升高；停药14 d后，除高剂量组AST指标外，其他各项指标基本恢复正常。给药结束和恢复期结束，肉眼观察和组织病理学检查各组动物脏器组织均未发现有明显药物相关性病理学改变[11-12]，提示中、高剂量的小儿牛黄清心散可能对幼年大鼠的肝、肾功能造成损害[13]，但未造成器质性损害，且这种损害经过一段时间可基本恢复正常。

综上所述， 小儿牛黄清心散高剂量(7.5 g/kg)、中剂量(3.75 g/kg)、低剂量(1.875 g/kg)(分别相当于14 kg儿童一日最大用量的87.5、43.8、21.9倍)对幼年大鼠重复给药14 d，恢复14 d，小儿牛黄清心散的毒性靶器官可能为肝、肾，1.875 g/kg为幼年大鼠无毒性反应剂量。本研究为小儿牛黄清心散临床用药安全提供了参考，并为更长期的毒性试验研究提供了数据支持。