华中地区汉族人群SREBF1基因多态性与帕金森病的相关性分析

韩超，余勤薇，孙雅迪，吴佳薇，李雲娜，黄金莎

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是第二大神经退行性疾病，以强直、震颤、运动迟缓和步态、姿态异常为主要临床表现[1]。PD的病因尚未完全明确，基因和环境因素的交互作用共同导致PD发病的假说已被广泛接受。其中基因的遗传变异被认为是PD易患性的重要因素之一[2,3]。近来一项欧洲全基因组关联研究（Genome-Wide Association Studies，GWAS）证实固醇调控元件结合转录因子（SREBF1）基因内含子上的位点rs11868035可增加PD患病率[4]。但目前SREBF1与中国PD人群患病率之间的关系尚不确定。本研究以华中地区汉族人群为研究对象，探讨SREBF1基因rs11868035位点与PD患病风险相关性，为揭示该基因与PD的关联提供进一步证据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年9月至2017年12月在协和医院就诊的华中地区PD患者471例纳入PD组，其中男275例，女196例；选择同期在协和医院体检的健康人536例纳入对照组，其中男300例，女236例。入组患者均为汉族人群。PD诊断依据英国脑库的PD诊断标准[5]。所有入组患者均自愿参加并签署知情同意书。本研究方案经华中科技大学同济医学院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 基因多态性检测 使用DNA提取试剂盒（北京百泰克公司）提取入组受试者外周血基因组DNA，提取方法参考试剂盒说明书。rs11868035位点正向引物序列为：ACGTTGGATGTGGAAGTCAGTCCATCCTCC，反向引物序列为ACGTTGGATGTCAACCCTTAGGGCCT CCAT。通过PCR扩增，PCR产物纯化，单碱基延伸反应，再经ABI 3730 DNA分析仪测序，数据分析使用Gene Mapper（4.1版）。

1.2.2 组间数据比较 首先比较PD组和对照组rs11868035位点等位基因和基因型频率，然后进一步对2组进行亚组等位基因和基因型频率数据比较：①发病年龄≤50岁的患者归于早发性帕金森病（early-onset Parkinson’s disease，EOPD）亚组，与对照组中年龄≤50岁的亚组人群进行比较。②年龄＞50岁的患者归于晚发性帕金森病（late-onset Parkinson’s disease，LOPD）亚组，与对照组中年龄＞50岁的亚组人群比较。③男性PD患者纳入男性PD亚组，与对照组男性亚组人群比较。④女性PD患者纳入女性PD亚组，与对照组女性亚组人群比较。

1.2.3 文献检索 行文献检索及Meta分析，进一步探索SREBF1基因rs11868035位点变异与中国人群PD易患性的关联。使用Review Manager 5.4软件，纳入Pubmed、Cochrane Central Register of Controlled Trials、EMBASE、Chinese National Knowledge Infrastruction Database数据库中有关“SNP rs11868035和PD”的相关原始资料。检索词由主体词+自由词组成，中文检索词包括：SREBF1、rs11868035、帕金森病；英文检索词为SREBF1、rs11868035、Parkinson’s disease。检索时限为建库至2020年10月，进行后续分析。

1.3 统计学处理

采用SPSS 20.0、Review Manager 5.4软件处理数据。等位基因和基因型频率以百分比表示，Hardy-Weinberg平衡验证基因型分布的一致性。Logistic回归分析比值比（OR）和95%置信区间（CI），并比较基因型和等位基因频率；Meta分析使用固定或随机效应模型计算总OR值和95%CI，Z检验确定总OR值有无统计学意义，I2统计量反应数据来源异质性；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 rs11868035基因多态性与PD发病关系

PD组和对照组的基因型和等位基因频率分布见表1-5。PD组和对照组rs11868035位点分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

表1 PD和对照组rs11868035位点基因型和等位基因频率分布[例(%)]

2组基因遗传学分析结果示rs11868035位点等位基因A/G在2组间频率分布差异无统计学意义［Avs.G,P=0.128,OR=1.259,95%CI(0.715-1.172)］。其中，G是频率较小的基因，显性模型[AG+GG/AA,P=0.335,OR=0.872,95%CI(0.660-1.152)]及校正年龄、性别等因素后[P=0.449,OR=0.897,95%CI(0.676-1.189)]，隐性模型［GG/AG+AA,P=0.612,OR=1.236,95%CI(0.544-2.810)］及校正年龄、性别等因素后[P=0.481,OR=1.349,95%CI(0.586-3.108)]在2组间差异均无统计学意义。

表2 EOPD及对照亚组rs11868035位点基因型和等位基因频率分布[例(%)]

表3 LOPD及对照亚组rs11868035位点基因型和等位基因频率分布[例(%)]

2.2 Meta分析结果

为进一步评估SREBF1基因位点rs11868035与PD相关性，共纳入包括本研究在内的4项研究（表6）进行Meta分析。经卡方检验，存在异质性（I2=91%，P＜0.01），后续采用随机效应模型分析。等位基因模型中，以G基因为暴露因素，A基因为非暴露因素。结果显示，具有G等位基因的人群发病风险无明显升高（OR=1.24，95%CI0.84-1.83）。因而我们推测等位基因模型中SNP rs11868035与PD发病风险无明显相关性（P=0.28），见表6，图1。

表4 男性PD及对照亚组rs11868035位点基因型和等位基因频率分布[例(%)]

表5 女性PD及对照亚组rs11868035位点基因型和等位基因频率分布[例(%)]

表6 rs11868035位点基因型和等位基因频率分布文献分析[例(%)]

图1 rs11868035位点与PD发病关系等位基因模型森林图

3 讨论

SREBF1基因参与体内脂质代谢的调节，具有调控脂肪生成[6]及脂肪细胞分化[7]的能力。最新研究发现SREBF1是调控中脑黑质多巴胺神经元神经再生的关键调节因子[8]，敲减SREBF1基因表达可引起PD相关基因Parkin易位及中脑黑质多巴胺神经元发生线粒体自噬改变[9]。以上提示SREBF1基因在分子机制上参与PD的发病。

rs11868035位点位于SREBF1基因的内含子上。GWAS研究提示rs11868035增加PD发病概率，最近一项中国东北地区人群的临床研究亦显示rs11868035与PD发病风险呈正相关，并且相关人群PD运动症状及认知功能障碍损害更为严重[10]。一项国外研究指出SREBF1基因与PD患者步态异常发生率呈正相关性[11]。但也有研究认为，SREBF1基因rs11868035位点表达在PD组与正常对照组无显著差别[12,13]，与本研究结论一致。

鉴于已有的研究结果示rs11868035与PD的患病风险关系结论不一致，本研究进一步对既往研究进行汇总并进行Meta分析，结果示rs11868035位点与PD易患性无明显相关性，与此前大样本GWAS研究结论不一致。究其原因，可能与以下因素相关。①不同地区人群种族、遗传结构等不同，SREBF1基因多态性存在差异。②PD的发病同时受到基因环境交互作用影响，不同地域环境因素差异也可能是重要原因之一。③不同研究中样本量大小及统计分析方式亦存在差异。

综上所述，本研究结合病例及Meta分析，发现SREBF1基因rs11868035位点与华中地区汉族人群PD的易患性无明显相关性。但由于本研究纳入的样本量有限，统计效能有所下降。为进一步确定SREBF1基因rs11868035位点是否与中国人群PD发病相关，研究者需要纳入更大样本进一步分析其与PD发病相关性。