2021年新疆塔城地区部分规模猪场猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测与分析

刘鸽

（新疆维吾尔自治区畜牧总站，新疆乌鲁木齐 830000）

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS），又名“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）引起的一种高度接触性传染病[1-5]。PRRS具有传染性强、传播速度快、危害范围广的特点，常引发生产母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病（高死亡率）、公猪生殖机能下降[6-9]。PRRS被世界动物卫生组织（OIE）列为B类传染病，我国将之列为二类动物传染病。PRRS被我国列为强制免疫的猪病之一，疫苗免疫是当前行之有效的方法，应加强其科学免疫工作[10-12]。为更好了解2021年新疆塔城地区部分规模猪场PRRS免疫抗体水平，分析免疫效果，及时发现问题，淘汰病猪和做好PRRS的补免工作，从新疆塔城地区的4县3市的14个规模猪场采集血样1 125份，使用ELISA抗体检测试剂盒检测样品的抗体水平，分析试验结果。

1 试验材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源

从新疆塔城地区的4县3市（额敏县、托里县、裕民县、和布克赛尔蒙古自治县、塔城市、乌苏市、沙湾市）的14个规模猪场采集血样1 125份，采集样品范围涉及猪群中的仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪、育肥猪。

1.1.2 试验仪器及耗材

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物股份有限公司生产）、自动酶标仪、5 mL兽用采血器、微量移液器（多量程移液枪）、移液枪头（5 μL、200 μL、1 mL）、恒温培养箱（购自光明医疗仪器厂）、平板震荡仪等。

1.2 试验方法

1.2.1 采样方法及血清分离

使用5 mL兽用采血器从待采样猪的前腔静脉采集血液4 mL（采集血样过少不利于血清分离），在室内倾斜放置一段时间（40 min左右），便于析出血清，使用采样袋收集较好，放于采样箱中带回实验室分离血清。在离心机中，使用4 000 r/min的转速工作10 min。离心机停止工作后，使用量程为1 mL的移液枪从离心后的兽用采血器吸取1 mL血清（血清应清亮，避免吸入红细胞）到1.5 mL EP管中，做好标记。根据时间安排，可立即进行抗体检测，也可以将分离并标记好的血清放于-20℃冰箱中，尽快检测。

1.2.2 抗体检测方法

提前将试剂盒中需要储存于冰箱中（4℃保存）的试剂放置于实验台上，静止2 h左右，待试剂恢复至室温。根据使用说明，对浓缩洗涤液进行20倍稀释，备用。在血清稀释板上，分别将阴、阳对照血清作1∶4稀释，将待检血清作1∶40稀释。洗涤抗原包被板，分别取稀释后的阴、阳对照血清和待检血清100 μL于抗原包被板微孔中（待检样做到一样一孔，阴、阳对照血清各设两孔）。使用平板震荡仪轻摇20 s，在37℃恒温箱中温育30 min后，用稀释好的洗涤液洗涤5次。在每个微孔中各加100 μL羊抗猪酶标二抗，经37℃温育30 min，再洗涤5次。在每个抗原包被板微孔中加底物A 1滴（大约50 μL）、底物B 1滴，室温避光显色10 min。最后，各微孔中各加50μL终止液，尽快测定OD630nm值。

1.2.3 试验结果判定标准

在酶标仪上读取各孔的OD630nm值。试验成立须满足：2个阳性对照孔OD630nm值均≥0.7，2个阴性对照孔OD630nm值均＜0.3。

KQ值＝（样品OD630nm值/阳性对照平均值）×100%

若KQ≥20，判为PRRSV免疫抗体阳性；若KQ＜20，判为阴性。

1.2.4 统计分析

使用Excel软件和SPSS软件分析试验数据，计算本试验猪场的PRRSV免疫抗体阳性率、KQ平均值、变异系数。

2 试验结果

2.1 试验猪场的PRRSV免疫抗体阳性率、KQ平均值、变异系数

新疆塔城地区14个规模猪场用大写英文字母A～N编号，A、B在额敏县，C、D在托里县，E、F在裕民县，G、H在和布克赛尔蒙古自治县，I、J在塔城市，K、L在乌苏市，M、N在沙湾市。统计分析，1 125个样品中阳性样本数量为1 089，阳性率为96.8%（1 089/1 125×100%），KQ平均值为85.09，变异系数平均值为0.27。统计试验结果见表1。

表1 各猪场的PRRSV免疫抗体阳性率、KQ平均值、变异系数

2.2 塔城地区试验猪场不同猪群的PRRSV免疫抗体水平

检测塔城地区试验猪场不同猪群的PRRSV免疫抗体水平，仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪、育肥猪的免疫抗体阳性率分别为99.06%、99.53%、98.88%、100%、67.06%，试验统计结果见表2。

表2 不同猪群的PRRSV免疫抗体水平

2.3 试验猪场0～30 d仔猪PRRSV免疫抗体阳性率

试验共采集0～30 d的仔猪血液样品 212份，PRRSV免疫抗体检测呈阳性的有210份，占99.06%，试验统计结果见表3。

表3 0～30 d仔猪PRRSV免疫抗体阳性率

3 讨论

3.1 塔城地区试验猪群的PRRSV免疫抗体整体水平较高

对采集的样品进行PRRSV免疫抗体检测发现，采集的1 125个样品中抗体阳性样本数量为1 089，阳性率为96.80%，抗体阳性率高于农业农村部制定的70%的合格标准[13,14]；KQ平均值为85.09，变异系数平均值为0.27。分析表明，2个猪场的的PRRSV免疫抗体阳性率为100%，占检测猪场数量的14.28%，猪场分别在额敏县和裕民县境内；PRRSV免疫抗体阳性率最低为90.36%，在托里县境内；抗体阳性率超过95%的猪场12个，占试验猪场数量的85.71%；超过97%的猪场9个，占试验猪场数量的64.28%；14个猪场中KQ平均值最大为96.70，最小为68.45；14个猪场中变异系数（CV）均小于0.4，最大为0.36，最小为0.16，符合农业农村部制定的离散度低于0.40的标准[15]。综合分析表明，新疆塔城地区猪群的PRRSV免疫抗体整体水平较高，抗体阳性率均高于90%，阳性率高于95%的占85.71%，数据变异系数较小，稳定性较高；虽然整体免疫效果较好，但也存在免疫效果较差的个体，可能存在免疫失败的风险，需对免疫效果较差的个体进行补免，积极开展补救措施[16]。

3.2 试验猪场的不同猪群间PRRSV免疫抗体水平存在差异

研究发现，试验猪场的不同猪群间PRRSV免疫抗体水平存在差异：育肥猪抗体阳性率最低，仅为67.06%，已低于70%，原因可能为生猪生产企业对育肥猪的免疫工作不重视，认为育肥猪出栏快，影响不大；种公猪的抗体阳性率最高，为100%，这可能与企业高度重视种公猪的饲养管理有直接关系；后备母猪次之，阳性率为99.53%；仔猪抗体阳性率为99.06%，高于经产母猪98.88%的抗体阳性率。分析不同生长阶段仔猪的抗体阳性率发现：仔猪整体抗体阳性率较高，免疫效果较好，但抗体阳性率随生长日龄增大而降低；分析原因，可能与母源抗体在仔猪体内随时间延长而减少有关，侧面说明母源抗体帮助仔猪抵抗疾病是非常重要的，要加强母猪泌乳阶段的饲养管理[17]。而分析经产母猪抗体阳性率低于除育肥猪之外的其他猪群的原因，可能由于采样采集了部分即将淘汰的经产母猪，对这部分即将淘汰的经产母猪，生猪养殖企业放松了管理和疫苗免疫[18]。在同一个养殖场内，对任何猪群放松管理和疫苗免疫都是危险的行为，任何猪群因为免疫效果差，可能会殃及整个养殖场，严重威胁整个猪场的健康发展，所以，应高度重视猪场内任何猪群的免疫工作[19]。

3.3 增强猪场疾病预防工作，及时有效进行免疫接种

猪繁殖与呼吸综合征病毒传播速度快、危害大，应引起生猪生产企业的高度重视[20]。在做好饲养管理的前提下，免疫接种是最为有效的预防动物疾病的措施之一，各猪场应根据生产实际，制定科学合理的免疫程序，严格按照免疫程序开展猪群免疫工作，减少免疫失败的现象发生，实施好免疫接种后的饲养管理措施；及时淘汰体弱、生产力低下、已感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪只。同时，应慎重选择疫苗，优选免疫效果较好的疫苗[21,22]。