MicroRNA-342 和FOXP1 mRNA 在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

谭国胜， 林方增， 陈斌， 蔡鸿杰， 罗灿峤， 戴海涛

（中山大学附属第一医院 1 放射介入科， 2 肝外科， 3 病理科， 广东 广州510080）

MicroRNAs （miRNAs） 属于非编码小RNA， 参与调控肿瘤细胞的凋亡、 增殖、 迁移等［1］。 miRNAs 的表达失调或异常可促 进 原 发 性 肝 细 胞 癌 （HCC） 的 发 生［2］。 MicroRNA－342（miR－342） 与HCC 发生及发展相关这一现象近年来不断有所报道。 转录因子FOXP1 （叉头框蛋白P1） 存在于包括HCC 的多种肿瘤中［3］， 且与肿瘤生物学行为相关。 本研究拟通过检测HCC 标本中miR－342 及FOXP1 mRNA 的表达含量， 分析肿瘤组织及瘤旁组织中的表达差异及其相关性， 初步探讨miR－342及FOXP1 在HCC 发生、 发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料及组织标本收集我院经外科手术后病理学确诊的58 例HCC 患者的肿瘤组织和癌旁组织标本。 本研究通过我院临床科研伦理委员会批准。 患者平均年龄 （55 ± 7.5） 岁，中国肝癌分期Ⅰ～ Ⅲ期， 术前均无接受放化疗及靶向治疗等抗肿瘤治疗。 肿瘤组织取材方法： 距肉眼可见的肿瘤边缘0.5 cm以上的瘤体组织内随机取样， 标本大小约1.0 cm × 1.0 cm × 1.0 cm。 癌旁组织取材方法： 距离肿瘤边缘≥1.0 cm 切取的肝脏组织， 取样标本大小同上。

1.2 检测miR－342表达水平TRIzol 法分别提取肿瘤组织和癌旁组织细胞的总RNA， 用逆转录试剂盒将RNA 反转录成cDNA。PCR 定量检测采用Hairpin-itTMmiRNAs qPCR Quantitation kit 试剂盒。 合成用于特异扩增的MicroRNA 引物， PCR 检测miR－342 含量。 以U6 作为内参， PCR 操作和反应条件参照文献［4］和试剂盒说明书， 2－△△Ct法计算miR－342 的相对表达量。

1.3 检测FOXP1 mRNA 表达水平肿瘤组织和癌旁组织总RNA的提取和反转录的操作方法同上。 应用SYBR Green PCR Master Mix 试剂盒， 以相应引物行qPCR 检测两组标本细胞中FOXP1 的mRNA 表达水平。 PCR 操作和反应条件参照试剂盒说明书。 以GAPDH 为内参， 2－△△Ct法计算FOXP1 mRNA 的相对表达量。

1.4 统计学分析应用SPSS 20.0 统计软件处理数据。 计量资料以±s表示， 比较采用t检验； 相关分析采用Pearson 相关分析法；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1miR－342、FOXP1 mRNA 在肿瘤组织及癌旁组织的表达水平肿瘤组织中， miR－342 的表达水平为0.48 ± 0.16， 明显低于癌旁组织的0.99 ± 0.12 （P＜0.05）； FOXP1 mRNA 的表达水 平 为0.82 ± 0.17， 明 显 高 于 癌 旁 组 织 的0.45 ± 0.08 （P＜0.05）。 见图1。

图1 肿瘤组织与癌旁组织miR-342 及FOXP1 mRNA 表达水平比较

2.2miR－342 与FOXP1 mRNA 表达水平的相关性经Pearson相关分析， 肿瘤组织中miR－342 与FOXP1 mRNA 表达水平呈负相关 （r＝－0.77，P＜0.05）， 而癌旁组织miR－342 与FOXP1 mRNA 表达水平无相关性 （r＝－0.16，P＝0.22）。 见图2。

图2 肿瘤组织中miR-342 与FOXP1 mRNA 表达水平的相关性

3 讨论

研究［4］表明， miR－342 在多种肿瘤中呈异常表达， 如在结肠癌、 肺癌及鼻咽癌等恶性肿瘤中， miR－342 的表达较正常组织均呈下调改变， 而在多发性骨髓瘤中则呈高表达。 本研究结果显示， 肿瘤组织中miR－342 的表达水平明显低于癌旁肝组织， 表明miR－342 在HCC 细胞中呈下调表达， 与Cui 等［5］的研究结果基本一致， 提示miR－342 有可能在HCC 中发挥抑癌作用。 除了miR－342， 目前还发现其他一些miRNAs 在HCC 中也呈表达下降改变， 如miR－214、 miR－145 等； 但亦有部分miRNAs 在HCC 中呈上调表达。 随着研究不断深入， 包括miR－342 在内的多种miRNAs 将有助于从基因水平更充分了解HCC 发生的病因及机制， 并有望成为HCC 的肿瘤诊断标记和治疗的新靶点。

FOXP1 作为转录因子， 通过调节不同靶基因的表达而影响肿瘤的生物学行为。 本研究发现肿瘤组织中FOXP1 mRNA 表达水平明显高于癌旁组织， 与Zhang 等［6］的研究结果相似，提示FOXP1 在肝癌细胞中合成的活跃程度明显高于正常肝细胞， FOXP1 转录因子在HCC 中呈高含量状态。 FOXP1 mRNA在HCC 中过度表达， 使肿瘤内的FOXP1 含量较正常肝组织明显增加， 提示FOXP1 在HCC 的发生发展过程中起促癌作用。肿瘤组织中miR－342 与FOXP1 mRNA 的表达含量呈负相关，而在癌旁组织两者含量则无相关性。 由此推测在HCC 的发生和发展中， miR－342 可能通过某种机制或通路调控FOXP1 的合成， 从而影响HCC 的生物学行为。 Cui 等［5］的研究则提示miR－342 在HCC 中可调节E2F1 因子的mRNA 转录。 目前本研究结果显示miR－342 与FOXP1 表达含量的相关性仅为统计学上的关系， 而两者之间是否存在相互作用或调节机制， 有待进一步研究探讨。

综 上 所 述， 在HCC 中， miR－342 表 达 下 降， 而FOXP1 mRNA 表达升高； miR－342 对HCC 的发展可能起到抑癌作用。