外周血CXCR3、CCR4基因表达与自身免疫性肝病的关系及对免疫应答水平的影响

牛 敏，李 英,杨 格,严紫怡,杨西超

自身免疫性肝病(ALDS)是一种临床常见的慢性进行性肝脏炎症性疾病，其病因及发病机制尚未完全阐明，主要症状表现为乏力、不适、黄疸、食欲不振等，且多见于中老年女性[1-2]。ALDS患者通常无临床症状，在进行体检时因肝功能异常就诊，且大部分患者在就诊时病情已进展至肝硬化，严重者甚至出现肝衰竭[3]。临床认为，ALDS的发生可能与某些诱导因子、自身抗体、免疫调节或遗传因素之间繁杂的相互作用有关[4-5]。CXC亚族趋化因子受体3(CXCR3)、CC趋化因子受体4(CCR4)均属于趋化性细胞因子亚家族受体，其中CXCR3主要表达于活化的Th1细胞，CCR4主要表达于Th2细胞[6]。CXCR3、CCR4与各自相应配体结合后主要参与效应T细胞的产生、迁移、活化过程，且具备诱导Th1、Th2细胞免疫的作用[7]。目前，已有研究指出，ALDS患者体内存在T细胞亚群、自身抗体、免疫球蛋白水平异常[8]。本文旨在探究外周血CXCR3、CCR4基因表达与ALDS的关系及对免疫应答水平的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 将2019年6月—2021年1月我院收治的ALDS 46例纳入研究组，其中男15例，女31例，年龄(56.48±9.45)岁。纳入标准：符合ALDS诊断标准[9]；于我院接受ALDS治疗者；年龄>18岁者；本研究符合《赫尔辛基宣言》，患者签署知情同意书。排除标准：药物性肝损伤、酒精性、遗传性肝病等；临床资料缺失者；存在肝脏手术史者；合并心、肾、肺等重要脏器疾病者；合并恶性肿瘤者；合并精神障碍者；合并病毒性肝炎者。选择同期我院收治的病毒性肝炎30例为对照组，男16例，女14例，年龄(53.97±11.31)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2检测方法 抽取受试者清晨空腹静脉血2 ml，置入抗凝管中，抗凝后加入淋巴细胞分离液，密度梯度离心后收集中间悬浮的细胞，分别孵育CCR4、CXCR3的荧光抗体20 min，加入破膜剂后继续孵育5 min，用流式细胞仪检测Th17细胞表面趋化因子受体CCR4、CXCR3荧光强度。抽取受试者清晨空腹静脉血2 ml，离心后取血清，使用全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、白蛋白(Alb)、总胆红素(TBIL)水平，使用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-2(IL-2)、IL-17、IL-22水平。

1.3观察指标 比较2组外周血CXCR3、CCR4基因表达水平、肝功能指标(ALT、Alb、TBIL)、免疫应答指标(IL-2、IL-17、IL-22)水平，评估外周血CXCR3、CCR4基因表达、肝功能指标对ALDS的诊断效能，分析外周血CXCR3、CCR4基因表达与免疫应答指标的相关性。

2 结果

2.1外周血CXCR3、CCR4基因表达水平 研究组外周血CXCR3、CCR4基因表达水平均高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 2组外周血CXCR3、CCR4基因表达水平比较

2.2肝功能指标 研究组ALT、Alb、TBIL水平均高于对照组(P<0.05，P<0.01)。见表2。

表2 2组肝功能指标水平比较

2.3免疫应答指标 研究组IL-2、IL-17、IL-22水平均高于对照组(P<0.01)。见表3。

表3 2组免疫应答指标水平比较

2.4ROC曲线分析 外周血CXCR3、CCR4基因表达、肝功能指标诊断ALDS的效能均较高(P<0.05)。见图1和表4。

图1 外周血CXCR3、CCR4基因表达、肝功能指标对ALDS诊断效能的ROC曲线

表4 外周血CXCR3、CCR4基因表达、肝功能指标在ALDS中的诊断效能

2.5外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与免疫应答指标的相关性分析 外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与IL-2、IL-17、IL-22水平均呈正相关性(P<0.05)。见表5。

表5 研究组外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与免疫应答指标的相关性分析

3 讨论

ALDS属于自身免疫性疾病，以自身肝脏为靶器官，其涵盖自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎及此三类疾病中任意二者的重叠综合征[10]。由于ALDS患者亦存在肝功能异常的表现，故临床存在将ALDS误诊为病毒性肝炎的可能[11]。目前，临床研究认为ALDS的发病可导致自身机体T细胞亚群数目发生改变，而体液免疫水平受T细胞亚群影响而发生改变[12]。

近年来研究发现，趋化因子及其受体在免疫相关性疾病中参与细胞免疫过程，各类趋化因子及其受体分布于机体的不同组织中，其表达可调控不同的免疫细胞进行定向迁移[13]。CXCR3与其配体结合后主要参与效应T细胞的产生、迁移及活化,可诱导淋巴细胞定向迁移至特定感染部位，引起淋巴浸润，并产生局部免疫应答[14]；CCR4在过敏性皮炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病中均呈高表达状态，提示CCR4与自身免疫性疾病相关[15]。本研究结果显示，研究组外周血CXCR3、CCR4基因表达水平高于对照组，提示CXCR3、CCR4高表达与ALDS存在一定联系。有研究认为，自身免疫性疾病患者的外周血CXCR3、CCR4基因表达水平均较高[16]，本研究结果与文献报道一致。本研究结果显示，ALDS患者肝功能指标水平均高于病毒性肝炎患者，提示ALDS对肝功能影响更大。傅晓晴等[17]认为，ALDS患者肝功能与病毒性肝炎患者比较存在显著差异，ALT、TBIL可用于辅助诊断，但由于病毒感染亦可引起肝外自身免疫现象，诊断时应联合多项检查进行确诊。本研究ROC曲线分析显示，外周血CXCR3、CCR4基因表达、ALT、Alb、TBIL对ALDS诊断效能较高，临床可进行相关检查作为辅助诊断措施。

本研究结果显示，研究组IL-2、IL-17和IL-22水平均高于对照组，提示ALDS对人体免疫水平造成影响较病毒性肝炎更大。IL-2属于Th1分泌的细胞因子，可促进T细胞的增殖和Th0向Th1亚群的分化，可同时刺激NK细胞增殖并增强其溶细胞能力、B细胞的生长和抗体合成[18]；IL-17、IL-22是由Th17细胞分泌的细胞因子，具有增强促炎因子表达、活化细胞凋亡程序的作用[19]。有学者认为，肝脏相关疾病患者的IL-17表达水平显著上升，提示Th17细胞可能参与ALDS发病过程，并起负性调节作用[20]。孙立华等[21]研究认为，肝病患者外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与病情密切相关。本研究结果显示，外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与IL-2、IL-17、IL-22水平均呈正相关性，说明ALDS患者机体免疫应答水平受外周血CXCR3、CCR4基因表达水平的影响，其原因可能与Th1细胞受CXCR3调节，故IL-2水平与CXCR3相关性较高；而Th17细胞表面CXCR3、CCR4基因高表达后，可调节IL-17、IL-22分泌水平有关[22]。

综上所述，ALDS患者与病毒性肝炎患者的外周血CXCR3、CCR4基因表达水平、ALT、Alb、TBIL、IL-2、IL-17、IL-22水平差异显著，外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与ALDS存在一定联系，临床可选择相关检查作为辅助诊断依据。ALDS患者外周血CXCR3、CCR4基因表达水平与IL-2、IL-17、IL-22水平均呈正相关性，说明机体免疫应答水平受外周血CXCR3、CCR4基因表达水平的影响。