非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR和KRAS基因突变及临床意义

李寅

摘  要：目的  探讨非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者肿瘤组织中表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor，EGFR）和鼠类肉瘤病毒致癌基因（KRAS）基因突变及临床意义。方法  收集2019年1月～2021年8月南阳医专第一附属医院病理科因活检穿刺、手术切除和会诊的NSCLC标本128份。用荧光PCR检测肿瘤组织中EGFR、KRAS基因突变情况，并分析EGFR、KRAS现状以及与临床病理特征的关系。结果  128例NSCLC患者中检出KRAS基因突变3例（占2.34%），其中G12A突变、外显子3Q61H和2 G12C突变各1例;检出EGFR基因突变43例（占33.59%），其中外显子19突变占比最高（13例，占30.23%），其次为外显子18突变（12例，占27.91%）和外显子 20突变（7例，占16.28%）。不同临床病理特征患者NKRAS基因突变发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。EGFR基因突变中，腺癌基因突变率较非腺癌高，女性基因突变率较男性高，差异有统计学意义（P<0.05）;其余病理特征与EGFR基因突变无关，差异无统计学意义（P>0.05）。结论  NSCLC患者肿瘤组织中KRAS基因突变率较低，EGFR基因突变率较高且与患者病理类型、性别无关。

关键词：非小细胞肺癌;鼠Kirsten肉瘤病毒致癌基因;表皮生长因子受体;基因突变

中图分类号：R36    文献标识码：A    文章编号：1009-8011（2022）-3-0121-03

非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌常见类型之一，早期缺乏特异性症状，约60%患者确诊时病情已进展为晚期，尽管放、化疗等综合治疗手段明显改进，但5年生存率仍不足20%[1-2]。近年来，分子靶向药逐渐应用于临床，患者生存时间可获得一定的延长。表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor，EGFR）上外显子18、19位点突变会对其三磷酸结构造成不良影响，致使EGFR受体结合能力进一步提高，提高免疫靶向治疗效果，而20位点的突变可造成ATP结合酶活性改变，影响癌细胞摄取分子靶向药物的能力，相应提高癌细胞抵抗EGFR络氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）的能力[3]。鼠类肉瘤病毒致癌基因（KRAS）突变可对下游GTP酶结合能力造成一定影響，干扰肿瘤信号通路激活，上皮细胞增殖能力明显提高，影响免疫靶向疗效[4]。本研究分析NSCLC患者肿瘤组织中KRAS、EGFR基因突变及临床意义，为临床靶向治疗提供参考。报告如下。

1  资料与方法

1.1 一般资料

收集2019年1月～2021年8月南阳医专第一附属医院病理科因活检穿刺、手术切除和会诊的NSCLC标本128份。其中，男性78例，女性50例;年龄28～79岁，平均年龄（58.65±2.14）岁;非腺癌31例，腺癌97例;有吸烟史67例，无吸烟史61例。

1.2 方法

上皮细胞以组织研磨法获取，加入的细胞裂解液TRIZOL（生产企业：上海联迈生物工程有限公司，批号：20181221），用LD5-2A型台式低速离心机（生产企业：北京医用离心机厂）以10 000 r/min转速离心5 min获取上清液。在1 mL TRIZOL试剂裂解样品内加入0.2 mL三氯甲烷，用无酶的RNA冲洗液在4 ℃环境下洗涤，以10 000 r/min转速离心5 min，获取RNA。将逆转录酶加入后，孵育60 min，温度为37 ℃，生成cDNA。上述操作完成后，实施PCR产物扩增，设置反应：2 min 93 ℃、1 min 93 ℃、2 min 55 ℃，RT-PCR循环共40个。在相应的位点用mtltipical检测试剂盒实施单碱基的序列检测，购买于南京博奥生物检测公司。用 ABI1310实施PCR跑胶电泳，用GENEMAPPER软件实施对比分析，两者均购自美国Life Technologies公司。

1.3 观察指标

①统计NSCLC患者肿瘤组织中KRAS、EGFR基因突变现状。②分析NSCLC患者的EGFR、KRAS基因突变与其大体类型、性别、肿瘤直径、分化程度、病理类型、淋巴结转移、TNM分期、吸烟史及年龄等临床病理特征间的关系。

1.4  统计学分析

采用SPSS 21.0统计学软件分析数据，计量资料用（x±s）表示，用t检验;计数资料以[n（%）]表示，用χ2检验，检验水准为α=0.05。

2  结果

2.1  EGFR、KRAS基因突变情况

128例NSCLC患者中检出3例（占2.34%）KRAS基因突变，其中G12A突变、外显子3Q61H和2G12C突变各1例;检出EGFR基因突变43例（占33.59%），其中外显子19突变占比最高（13例，占30.23%），其次为外显子18突变（12例，占27.91%）和外显子 20突变（7例，占16.28%）。见表1。

2.2  NSCLC患者各临床病理特征与EGFR、KRAS基因突变关系分析

不同临床病理特征患者NKRAS基因突变发生率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。EGFR基因突变中，腺癌基因突变率较非腺癌高，女性基因突变率较男性高，差异有统计学意义（P<0.05）;其余病理特征与EGFR基因突变无关，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3  讨论

NSCLC发病率会受到多种病理因素影响，促使肺泡上皮细胞异常分裂而明显升高，此类患者预后较差，5年生存率低[5]。目前，靶向性药物逐渐被应用于NSCLC的治疗中，其与靶向性受体相结合而拮抗肿瘤细胞的扩增或增殖，使癌细胞DNA复制速度下降，提高整体治疗效果[6]。但EGFR-TKIs治疗后仍有部分患者会出现耐药的情况，而EGFR外显子基因突变直接影响其免疫靶向治疗效果[7]。

EGFR属于跨膜蛋白，当其结合配体后会引起重要的构象变化，受体内的二聚环结构显露，引起自身磷酸化而对下游信号转导，影响癌细胞增殖、转移等病理过程[8]。EGFR突变点多位于细胞内核转录区域的外显子上，多位于18～24外显子间，故EGFR的激活与耐药突变也集中于该区域内。本研究检出43例EGFR基因突变，其中外显子19突变占比最高，其次为外显子18、20突变，提示对于此类患者使用免疫靶向治疗敏感性较高;EGFR基因突变中，腺癌基因突变率较非腺癌高，女性基因突变率较男性高，提示女性、腺癌会影响EGFR基因，可能与女性体内性激素、腺体内细胞EGFR基因保守程度低有关，具体机制不十分清楚，仍需深入研究。

KRAS基因突变以位移突变和点突变有关，相应突变位点改变会干扰GTP酶的结合，激活癌细胞内信号通路，降低靶向性药物治疗抵抗性[9]。本研究中，128例NSCLC患者中检出KRAS基因突变3例，其中G12A突变、外显子3Q61H和2G12C突变各1例，提示上述突变点可能会影响NSCLC病情。KRAS基因突变会影响肿瘤细胞核转录基因活性，致使其自我扩增干细胞特性改变，改变患者临床结局。G12A或G12C改变可激活肿瘤细胞内GTP依赖性蛋白激酶，进一步提升三磷酸腺苷激活程度，增加癌細胞增殖与扩散风险，影响患者临床结局。本研究结果显示，KRAS基因突变与NSCLC患者各临床病理特征无关，提示KRAS基因突变与患者临床特征并无关系。

综上所述，NSCLC患者肿瘤组织中KRAS基因突变率较低，EGFR基因突变率较高，且与患者病理类型、性别无关。

参考文献

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[2]胥京京，冯靖，曹洁.利用NSCLC患者ROSE细胞学制片进行EGFR、KRAS、PIK3CA基因检测可行性的研究[J].天津医药，2018，46（3）：268-272.

[3]王宇，于丽艳，方楠，等.中国人群非小细胞肺癌的基因突变情况及其靶向药物的应用[J].中华医学遗传学杂志，2019，36（5）：424-428.

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[5]王也，杨磊，于芳，等.非小细胞肺癌罕见驱动基因突变特点及其与临床病理特征的相关性[J].中日友好医院学报，2020，34（4）：209-213，192.

[6]眭玉霞，邓晓宇，伍铮，等.非小细胞肺癌驱动基因突变与临床病理特征的关系[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（9）：1023-1028.

[7]成瑶.NSCLC患者EGFR、ALK基因突变状态、病理特征及与病情转归的关系分析[J].临床研究，2021，29（5）：16-18.

[8]黄晖，李丽华，万敏娜，等.非小细胞肺癌化疗敏感性与EML4-ALK，EGFR，KRAS，c-MET基因状态的关系[J].中国现代医学杂志，2019，29（5）：59-64.

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