非小细胞肺癌患者治疗前后外周血淋巴细胞绝对计数的表达差异及与CEA、SCC的相关性

李艳, 范耀华, 戴桂萍, 朱玉璋

嘉兴市第二医院肿瘤内科(浙江嘉兴 314000)

肺癌是临床中常见呼吸系统恶性肿瘤，其发病率及病死率均极高，在其众多病理类型中，非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占到所有肺癌的80%～85%[1]。大部分NSCLC被确诊时，已经是中晚期，临床对于其主要治疗方法为化疗。机体肿瘤的发生发展过程中，免疫功能是其重要影响因素之一[2]，当免疫功能出现紊乱或是免疫监测功能降低时，机体肿瘤的发生风险将会大大增加，而机体免疫功能的直接体现为外周血T淋巴细胞及NK细胞的数量[3]。不同淋巴细胞亚群间的平衡是维持正常免疫功能的重要一环[4]。癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)以及鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC)常用于肺癌治疗疗效的评估和预后的判断[5]。本研究旨在探讨中晚期NSCLC患者化疗前后淋巴细胞绝对计数的差异，并进一步分析外周血淋巴细胞绝对计数的变化及与CEA、SCC的相关性,为临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择嘉兴市第二医院2017年1月至2020年3月收治的行化疗的中晚期NSCLC患者82例作为病例组，其中男55例，女27例，年龄40～77岁，平均(52.34±9.88) 岁。病理类型：鳞癌35例，腺癌47例。所有患者依据随机数字表法分为吉西他滨组(n=41)和培美曲塞组(n=41)。同时选择同期进行健康体检的60例正常人作为对照组。3组研究对象一般基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。纳入标准：(1)年龄18～80岁；(2)体力状况ECOG评分≤2分；(3)病理诊断均为NSCLC；(4)入院前无手术、放疗、化疗、免疫治疗史；(5)均能够耐受化疗；(6)至少存在1个可测量评估的肺内病灶，评估标准为recist1.1标准[6]。排除标准：(1)妊娠期或哺乳期；(2)合并3级高血压；(3)严重肺内感染或者全身感染；(4)合并严重肝肾、血液疾病或精神障碍者；(5)合并自身免疫性疾病或使用免疫调节药物治疗者。本研究患者知情同意，并经我院伦理委员会审核通过(伦理审批号：202104035041)。

表1 病例组与对照组一般情况比较 例

1.2 方法 吉西他滨组采用注射用盐酸吉西他滨(远大医药黄石飞云制药有限公司，国药准字 H20133194，0.2 g)联合顺铂注射液(江苏豪森药业股份有限公司，国药准字H20040812，2 mL∶10 mg)治疗，治疗方法如下：第1天和第8天静脉滴注吉西他滨，用量为1.25 g/m2；第1～3天静脉滴注顺铂，用量为25 mg/m2，每3 周为1 个周期；培美曲塞组采用培美曲塞(齐鲁制药有限公司，国药准字H20060672，0.2 g)联合顺铂治疗，治疗方法如下：化疗第1天静脉滴注培美曲塞，用量为0.5 g/m2；化疗第1～3 天静脉滴注顺铂，25 mg/m2，每3 周为1 个周期。

分别于化疗前2 d及化疗2周期后20 d抽取病例组外周静脉血，采用流式细胞技术检测 CD3+(%)、CD4+(%)、CD8+(%)、NK(%)、CD4+/CD8+细胞比值。应用Sysmex XE-5000血细胞分析仪检测外周血中的淋巴细胞计数。 CD3+(%)、CD4+(%)、CD8+(%)、NK(%)百分比乘以淋巴细胞计数即为CD3+、CD4+、CD8+、NK淋巴细胞的绝对值。对照组也采用相同方法完成上述检测。采用用电化学方法检测病例组化疗前2 d及化疗2周期后20 d的CEA、SCC的水平。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件，其中计数资料采用率(%)表示，采用2检验。计量资料以表示，采用t检验。血浆CEA、SCC和淋巴细胞亚群水平变化趋势的相关性采用Pearson相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病例组和对照组各淋巴细胞亚群绝对计数比较 病例组化疗前和化疗后的CD3+、CD4+淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+均明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。CD8+淋巴细胞绝对计数及NK细胞绝对计数略高于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。病例组化疗后的CD3+、CD4+淋巴细胞的绝对计数及CD4+/CD8+较化疗前有显著升高(P<0.05)。CD8+淋巴细胞绝对计数和NK细胞绝对计数差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 病例组与对照组外周血各淋巴细胞绝对计数比较

2.2 不同化疗方案间的淋巴细胞亚群绝对计数的比较 培美曲塞组的CD3+、CD4+、CD8+、NK淋巴细胞的绝对计数及CD4+/CD8+与吉西他滨组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 培美曲塞组与吉西他滨组外周血各淋巴细胞绝对值比较

2.3 病例组各淋巴细胞绝对计数与CEA、SCC的相关性 CD3+、CD4+淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+与CEA、SCC呈负相关性(P<0.05)，CD8+、NK淋巴细胞绝对计数与CEA、SCC无显著相关性(P>0.05)，见表4。

表4 病例组各淋巴细胞绝对计数与CEA、SCC的相关性分析

3 讨论

已有诸多研究报道显示[7-8]，机体肿瘤的发生发展与免疫情况之间存在密切的相关性。细胞免疫是人体免疫功能的主要构成部分，其同机体内的NK细胞和B细胞参与的体液免疫共同组成了机体的免疫功能主体。在细胞免疫当中，T淋巴细胞是其中重要的细胞类型之一，不仅参与细胞免疫过程，还会对免疫应答起到一定的调节作用[9]。在T淋巴细胞中，根据其是否表达CD4及CD8分为两个细胞亚群。两个细胞亚群中，CD4+T淋巴细胞的主要功能在于协助细胞和体液免疫，同时能够分泌诸多辅助因子参与到抗肿瘤的过程当中。CD8+T淋巴细胞的主要功能在于其为细胞毒效应细胞，能够对某些细胞和异物进行特异性的杀伤[10]。两种T淋巴细胞亚群的比值在正常情况下保持一个动态平衡的状态，共同维持机体免疫功能的正常和稳定。NK细胞是机体内一种特殊的免疫细胞，能够对于受感染的细胞或是肿瘤细胞进行直接性的杀伤，故而NK细胞数目的变化将会直接影响到机体对于肿瘤细胞的清除和杀伤功能，当NK细胞数目和活性降低时，机体抗肿瘤能力将会大大降低[11-12]。

近年来，我国肺癌的发病率逐年上升，具有较高的病死率，已有研究表明，机体的免疫功能状态是影响肺癌发展、预后的重要因素。本研究表明，NSCLC患者中的CD3+、CD4+淋巴细胞的绝对计数及CD4+/CD8+均低于健康对照组，差异有统计学意义，CD8+淋巴细胞绝对计数和NK细胞绝对计数无明显差异。化疗后，NSCLC患者的CD3+、CD4+淋巴细胞的绝对计数及CD4+/CD8+均较化疗前明显升高，差异有统计学意义。而CD8+、NK淋巴细胞绝对值的差异无统计意义，这说明化疗可改善NSCLC患者的免疫状态，改善患者的免疫功能。对培美曲塞组和吉西他滨组化疗后数据进行比较，两组淋巴细胞的绝对计数无明显差异，表明培美曲塞和吉西他滨治疗中晚期NSCLC，均可调节免疫应答，对免疫功能的影响相当。吉西他滨的作用在于其能够抑制细胞分裂的过程，进而起到抗肿瘤的作用，当与铂类药物联合使用时可以直接作用于肿瘤细胞的DNA合成期，起到抑制作用，但吉西他滨存在一定的骨髓抑制作用，会对预后造成一定的影响，在实际工作中应时刻监测[13]。培美曲塞的作用在于其能够抑制机体内二氢叶酸还原酶以及胸苷酸合成酶等的活性，进而降低机体内嘌呤和嘧啶的合成总量，最终起到抑制肿瘤细胞遗传物质合成的作用。铂类化疗药物可以抑制肿瘤细胞DNA的复制，并且可以对肿瘤细胞细胞膜结构进行破坏，有效抑制肿瘤细胞的生长和增殖。上述药物在作用肿瘤细胞发挥抑制作用的同时，还会对机体免疫系统产生一定的刺激作用，使得免疫系统功能增强，但具体作用机制仍需进一步研究[14-15]。

血清CEA是一种存在于正常胚胎组织和异常肿瘤组织中的癌胚抗原，它的增高与NSCLC患者肿瘤发生、病情发展和预后评估都有着密切的关系[16]。已有多项研究表明CEA能够用于化疗疗效的评估，治疗后血清CEA水平对NSCLC患者的预后评估有着重要的价值[17]。SCC为一种相对分子质量比较大的糖蛋白，参与癌细胞的转移、侵袭和浸润，当患者的组织开始恶性病变时，该水平会显著上升。SCC在肺癌患者的诊断和临床治疗的观察中的价值得到临床的公认[18]。本研究发现CD3+、CD4+淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+与CEA、SCC呈现出负相关性，说明淋巴细胞亚群作为观察肿瘤患者的近期化疗疗效的一项指标具有一定的临床价值。

综上所述，本研究提示，NSCLC患者存在着免疫功能抑制，化疗可改善患者的免疫功能，有利于预后，培美曲塞和吉西他滨治疗NSCLC患者均可调节免疫应答。联合监测CEA、SCC及免疫细胞的变化，对评估化疗的近期疗效提供了一定的参考意义。本次研究仍存在一定局限性，首先本次研究仅为单中心、小样本量研究，导致结果存在一定偏倚，其次本次研究未能够对淋巴细胞计数与患者远期生存率进行相关性研究，下一步仍需大样本量、多中心、长时间的临床研究。

利益相关声明：所有作者均声明不存在任何利益冲突。

作者贡献说明：李艳：试验设计、研究实施、论文撰写；戴桂萍、朱玉璋：资料收集；范耀华：论文修订和审校。