复褥方对大鼠皮肤刺激性和压疮创面局部病理改变的观察

王窕 俸一然 刘晗 晏文娟 陆蕾

摘要：目的 对复褥方进行大鼠皮肤刺激性试验并对大鼠压疮创面的局部病理改变进行观察，评估其安全性。方法 （1）将大鼠随机分为完整皮肤组和破损皮肤组，分别进行一次和多次给药的皮肤刺激性实验，观察去除药物后大鼠的皮膚反应情况。（2）将大鼠随机分为4组，即正常组（A组）、模型组（B组）、紫莲膏组（C组）、复褥方组（D组），除正常组外，其余3组制作大鼠压疮模型。造模成功后，在常规处理的基础上，C组创面再涂紫莲膏，D组创面再涂复褥方。每天2次，连续10 d。分别在给药后第0、3、7、10 d后测量创面面积。末次给药后处死大鼠，取创面组织进行HE染色。结果 （1）复褥方一次给药对完整皮肤组无刺激，均未出现红斑、水肿等现象，对破损皮肤组去药1 h后有轻微刺激，表现为皮肤的轻微水肿，可自行消退，未再出现损伤现象。复褥方多次给药对完整皮肤组、破损皮肤组均无刺激等现象。（2）与B组相比较，C组、D组创面面积均显著缩小（P<0.01）;C组与D组比较，D组缩小面积优于C组（P<0.05）;C组和D组HE染色结果显示炎性浸润程度明显减轻，新生肉芽组织明显增多;C组与D组比较，D组炎性浸润明显减轻，新生肉芽组织明显增多。结论 （1）复褥方单次使用对大鼠完整皮肤无刺激，对破损皮肤有轻微刺激，24h可自行消退;多次使用对大鼠完整皮肤、破损皮肤均无刺激，有较好的安全性。（2）复褥方具有促进大鼠压疮创面愈合和抗炎的作用，这可能是复褥方治疗大鼠压疮的机制之一。

关键词：复褥方;大鼠;皮肤刺激性;压疮创面;病理改变

中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2022）04-0054-06

Observation on Local Pathological Changes of Skin Irritation and Pressure Ulcer Woundsin Rats by Compound Decubitus Prescription

WANG Tiao， FENG Yi-ran， LIN Han， YAN Wen-juan， LU Lei

（The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Kunming 650032， China）

【Abstract】Objective： To make a skin irritation test of Compound Decubitus Prescription in rats and observe the local pathological changes of the pressure ulcer wounds in rats， and to evaluate its safety and efficacy. Methods： （1） The rats were randomly divided into an intact skin group and a damaged skin group. Skin irritation experiments were carried out for one and multiple administration respectively， and the skin reaction of the rats after removing the drug was observed. （2） The rats were randomly divided into 4 groups， namely， normal group （group A）， model group （group B）， purple lotus paste group （group C）， and Compound Decubitus Prescription group （group D）. The other three groups were used to make pressure ulcer models in rats. After successful modeling and on the basis of routine treatment， the wounds of group C were re-applied with purple lotus paste， and the wounds of group D were re-applied with Compound Decubitus Prescription， twice a day for 10 consecutive days. The wound area was measured at the 0， 3rd， 7th and 10th days after administration respectively. The rats were sacrificed after the last administration and their wound tissue was collected for HE staining. Results： （1） The Compound Decubitus Prescription group did not irritate the intact skin at one-time administration and no erythema and edema occurred. In the damaged skin group， there was slight irritation one hour after the drug was removed. No further damage occurred. The repeated administration of Compound Decubitus Prescription did not cause irritation to the intact skin group and the damaged skin group. （2） Compared with that of group B， the wound area of group C and group D was significantly reduced （P<0.01）; compared between group C and group D， the reduced area of group D was better than that of group C （P<0.05）. The results of HE staining in group C and group D showed that the degree of inflammatory infiltration was significantly reduced， and the new granulation tissue was significantly increased; compared with that in group C， the inflammatory infiltration in group D was significantly reduced， and the new granulation tissue was significantly increased. Conclusion： （1） The one-time use of Compound Decubitus Prescription has no irritation to the intact skin of rats， but has a slight irritation to the damaged skin， and it can subside on its own within 24 hours. The repeated use has no irritation to the intact skin and damaged skin of rats， with good effect and safety. （2） Compound Decubitus Prescription has the effect of promoting wound healing and anti-inflammatory effect of pressure ulcers in rats， which may be one of the mechanisms of Compound Decubitus Prescription in treating pressure ulcers in rats.

【Key words】Compound Decubitus Prescription; Rats; Skin Irritation; Pressure Ulcer Wounds; Pathological Changes

科室自研制劑复褥方由黄连、紫草、黄柏、生地、当归、血竭、青黛等药物组成[1-7]，用于临床压疮的治疗效果良好[8]。为进一步临床推广使用，笔者设计了复褥方对大鼠皮肤刺激性及压疮创面的实验研究，观察其局部给药后对皮肤的刺激性及压疮创面局部的病理改变，为临床用药提供实验数据和理论依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 药品 复褥方，由昆明医科大学第一附属医院制剂室提供。

1.2 动物及试剂 SD清洁级大鼠，72只，体重320～350 g，平均体重（300±20）g，雌雄各半，由昆明医科大学动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK（滇）k2015-0002。主要实验试剂Sigma H3136的苏木素、Sigma 230251的伊红。

1.3 实验方法

1.3.1 皮肤刺激性试验 健康SD清洁级大鼠32只，常规饲养1周后，随机分为4组，即完整皮肤组与破损皮肤组各2组，每组8只。给药24h前，将大鼠背部脊柱两侧皮毛用脱毛剂脱毛，面积每侧约5 cm×5 cm，去毛部位无皮肤损伤[9]。破损皮肤组的制作：大鼠脱毛区消毒，并用手术刀作#字状划破皮肤，刺伤表皮，不伤真皮，以渗血为度[10]。

1.3.1.1 一次性给药实验[11-12] 各取一组完整皮肤与破损皮肤组大鼠，将复褥方0.5 mL涂于每只大鼠左侧脱毛区，覆盖1层蜡纸和2层消毒纱布，用无刺激性纱布、胶布固定，右侧脱毛区为对照区域。4h后用棉签蘸生理盐水轻柔洗净药物，观察去除药物后1、24、48、72 h大鼠皮肤刺激情况，参考相关文献[13]，使用表1计算半定量评分，表2评估皮肤刺激程度。

1.3.1.2 多次给药实验[14] 给药步骤与一次给药相同，更改频率为每天给药2次，连续7 d。同样观察及评估去除药物后1、24、48、72 h大鼠皮肤刺激情况。

1.3.1.3 评分标准 根据中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则[15]，以红斑、水肿等为评价指标，如表1。刺激性分值=（红斑反应总分+水肿反应总分）/每组动物数。根据刺激性分值判断皮肤刺激性强度，如表2。

1.3.2 压疮创面病理改变

1.3.2.1 分组和动物造模 健康SD清洁级大鼠40只，常规饲养1周后，随机分为4组，即正常组、模型组、紫莲膏组、复褥方组，每组10只。除正常组外，其余3组参照Peirce[16]、Wasserman等[17]体内埋置铁片加外用磁铁加压的造模方法制作大鼠压疮模型，以局部皮肤外观和病理出现压疮病变为压疮模型复制成功。压疮面积为约2 cm×2 cm。

1.3.2.2 治疗方法 模型组、紫莲膏组、复褥方组采用2%碘酒及75%乙醇消毒压疮创面周围皮肤，生理盐水冲洗创面，干纱布块擦干创面后，紫莲膏组创面上涂灭菌的紫莲膏0.5 mL，复褥方组创面上涂灭菌的复褥方0.5 mL。每天2次，连续10 d。分别在给药后第0、3、7、10 d后测量创面面积。末次给药后处死大鼠，取创面组织进行HE染色观察压疮创面肉芽组织生长及愈合情况。

1.3.2.3 观察指标 大鼠创面组织HE染色后病理切片镜下观察：

（1）创面修复面积。（2）成纤维细胞、白细胞、淋巴细胞浸润情况。（3）血管微结构：血管内膜增生、血管充血、血管周围水肿。

1.4 统计学方法 采用spss19.0统计软件进行分析处理。数据以均数±标准差（x±s）表示;多个样本均数之间比较采用单因素方差分析，不同时间点的比较采用重复测量方差分析，相关样本先后比较采用t检验。认为P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 皮肤刺激实验

2.1.1 复褥方一次性给药的刺激性实验结果 实验结果如表3、图1-2所示，复褥方一次性给药对完整皮肤无红斑、水肿等刺激表现，对去药1 h后的破损皮肤表现为轻微刺激，部分皮肤可见轻微水肿，24 h自行消退。

2.1.2 复褥方多次给药对大鼠皮肤的刺激性实验结果 实验结果如表4、图3-4所示，复褥方多次给药对完整皮肤、破损皮肤均无红斑、水肿等刺激。

2.2 压疮创面病理改变

2.2.1 复褥方对大鼠压疮创面面积的影响 实验结果如表5、图5所示，复褥方组在给药后第3 d开始压疮创面面积显著减少（P<0.01）;紫莲膏组在第7 d开始创面面积显著减少（P<0.05）。10 d后，复褥方组创面皮肤完整，皮肤颜色与实验前比较无显著差别，紫莲膏组创面仍有少量皮损，但与模型组相比创面明显减小。

2.2.2 复褥方对大鼠压疮创面组织病理变化的影响 HE染色结果见表6～8及图6，正常组表皮结构完整，真皮层内可见正常附属器，结缔组织间可见少量炎细胞浸润。模型组镜下显示创面皮肤全层（表皮及真皮）坏死伴钙化，未见肉芽组织。复褥方组镜下显示出现大量新生肉芽组织，炎性浸润程度明显减轻;紫莲膏组镜下显示亦出现新生肉芽组织，炎性浸润亦减轻，但与复褥方组相比，肉芽组织减少，炎细胞浸润加重。

3 讨论

压疮又称压力性溃疡，由于身体局部长期受压，组织持续性缺氧缺血，营养缺乏，皮肤失去正常功能，最终导致组织破损和坏死等一系列病变[18]。它在临床上较为常见，常迁延难愈，不仅给患者造成痛苦，也会增加感染的风险，并给护理工作带来了困难。

在复褥方的方药组成中黄连、黄柏具有清热燥湿、泻火解毒功效[19-20]。紫草具有为清热凉血、解毒透疹之功效[21]。当归生肌敛疮、排脓解毒[22]，青黛清热泻火、凉血解毒[23]，血竭活血化瘀、敛疮生肌[24]。生地清营凉血[25]，诸药合用，共奏清热凉血，化瘀生新的功效，临床上用于压疮等的治疗，可促进皮肤创面愈合，在我院临床推广使用后反馈良好[8]。

皮肤刺激性是外用制剂最常见的不良反应，是皮肤接触某些特定制剂后产生的局部可逆性损伤，皮肤刺激性试验是外用人类健康相关制剂评价的项目之一[26]。

本研究通过皮肤刺激性试验评价复褥方外用的安全性，通过复制大鼠压疮模型评价复褥方对大鼠压疮创面的修复效果，评价指标主要为创面修复的面积和病理学变化。实验结果表明，复褥方单次使用可能对皮肤有轻微刺激，但24h可自行消退，而复褥方的长期使用对皮肤无刺激。对于大鼠压疮创面，复褥方组压疮创面面积显著减少，炎性浸润程度明显减轻，新生肉芽组织明显增多。因此复褥方制剂皮肤给药具有较好的安全性，同时具有促进大鼠压疮创面愈合及抗炎的作用，这可能是复褥方治疗大鼠压疮的机制之一，具体的机制需在今后的研究中进行进一步的观察及评价。

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（收稿日期：2021-10-14）