防疫藏药九味麝香丸配方分解与生物碱含量分析

赛悟杰 ，米玛卓嘎，朗 嘉

(1.西藏藏医药大学，西藏 拉萨 850000；2.西藏自治区藏医院，西藏 拉萨 850000)

藏医药防治疫病有多种方式方法，如口服药、挥发性香囊、藏香熏法等，而最常用的药物为九味黑药丸.九味黑药丸既可以做香囊挂在脖子，用其挥发物来防治疫病传染，也可口服治疗疫病，改善多种疫病的相关症状[1-2].本研究在防疫藏药九味黑药丸配方考证和药性分解基础上，将贡珠云丹嘉措《临床札记·札记精粹》中记载的九味黑药丸[3]配方稍作改变，以减毒提效.在原配方[3]中增加了诃子、细叶草乌叶及结血蒿膏.新配方组方为牛黄、阿魏、穆库尔没药、藏菖蒲、藏青果、京墨、细叶草乌(榜那)、麝香、硫磺、诃子、细叶草乌叶、结血蒿膏等.此组方经过西藏自治区藏医院专家论证后命名为九味麝香丸，同时对九味麝香丸配方中生物碱含量进行了测定.

1 九味黑药丸配方比较

在藏医药学10余部文献中发现17种九味黑药丸配方的不同记载，但各配方药物的组成和剂量有不同点也有相同处，相同点是组成药物均含有加工炮制的细叶草乌、藏菖蒲、麝香、穆库尔没药等4种(见表1).

表1 藏医文献医籍记载的九味黑药丸

2 九味黑药丸配方组成及功效分析

2.1 九味黑药丸配方组成及功效分析

藏医药学治疗疫病的主要方法为灭菌抗炎、清热、补养[4].诸多藏医学著作记载疫病病因是病菌，性质属热性.藏医学中阐述的疫病病情[5]也跟新冠肺炎疾病的症状[6]大致相同，其症状有身体虚弱、乏力、发烧、咳嗽、上腹部疼痛、下泄等，使体内的五原紊乱进而导致脏器衰弱，因此在藏医学中利用灭菌抗炎、清热、补养三种方法同时进行来预防和治疗突发的流行性疾病，但最主要的方法是灭菌抗炎，其次为清热，最后为补养.

九味黑药丸配方组成的主次药是根据藏医学治疗疫病方法进行分类的，其中把有消炎灭菌功效的药归为主药，清热降温药归为次药，补养调理药归为其他药.因此，九味黑药丸[3]配方中的牛黄、穆库尔没药、藏菖蒲、京墨、细叶草乌、麝香、硫磺等可归为主药，诃子(藏青果)为次药，阿魏为其他药.像这样多种成分的药物同时治疗疾病来改善症状，增加体能的诊疗方法也是藏医药特色治疗方法，这种方法更适合治疗疫病.本配方中就发炎的治疗药物有牛黄、穆库尔没药、藏菖蒲、京墨、细叶草乌、麝香等；灭菌的有阿魏、麝香、细叶草乌；改善发热症状的有牛黄、穆库尔没药、京墨、细叶草乌、麝香等；补养的有诃子(藏青果)、藏菖蒲、阿魏；消肿的有诃子(藏青果)、京墨、细叶草乌、麝香；治疗脓肿黄水的有藏菖蒲、细叶草乌、硫磺；治疗肺部病变的有诃子(藏青果)、牛黄；治疗咽喉炎症的有穆库尔没药、细叶草乌、藏菖蒲；机体消炎的有穆库尔没药、藏菖蒲、细叶草乌、硫磺等(见表2).

分析九味黑药丸[3]制剂性味，五原结果中味苦7分、甘5分、辛5分、涩2分，稍酸1分.以味的大小来分析五原中水性12分、占30%，风性14分、占35%，土性8分、占20%，火性6分、占15%.消化后味(药物服用消化后的味)[7]苦8分、甘2分，水性10分占50%、风性8分占40%、土性2分占10%.以此来分析，该药主味为苦，五原为水，风性作用相对较大，性为凉.

2.2 九味麝香丸配方功效分析

九味黑药丸[3]中增加诃子、细叶草乌叶、结血蒿膏制成九味麝香丸，其中诃子为金光诃子，味涩、苦、甘、稍酸，消化后味苦，性能为凉热均匀，效能为凉、轻，主要调节新陈代谢、补养和治疗营养不良的疾病[8].据藏医药学记载，草乌含毒[2]，故需加诃子降低草乌的毒性来补养及调节代谢.草乌叶味甘、稍苦，消化后味甘，性能为凉热均匀，效能为热，主要用于止疼、抗炎[9].藏药学记载草乌叶(榜那叶)对治疗疫病更有效.结血蒿膏是常用治疗疫病的药物[10]，其味苦而辛，消化后味苦，药性为凉，效能为轻而粗，主要功效是杀菌、抗炎、治疗身体发炎及伤口脓肿，具有增强灭菌抗炎的功效.由此，该配方中增加诃子、细叶草乌叶、结血蒿膏，不仅可减轻毒性，还可增强灭菌抗炎功效.

表2 《临床札记·札记精粹》中九味黑药丸配方组成药药性分析

分析九味麝香丸制剂性味，五原结果中味苦10分、甘7分、辛6分、涩3分、稍酸2分.以味的大小来分析五原中水性17分、占30.4%，风性19分、占34%，土性12分、占21.4%，火性8分、占14.3%.消化后味苦10分、甘3分，水性13分、占50%，风性10分、占38.5%，土性3分、占11.5%，性为凉.

2.3 九味黑药丸和九味麝香丸的五原与性味比较

对九味黑药丸与九味麝香丸的五原、性味数据进行(x2)检验，结果水性和风性有所区别，而性味差异比较明显，味苦、甘、辛，消化后味苦最为明显(见图1),但两组数据通过R系统统计无统计学意义(P>0.05).

图1 九味黑药丸和九味麝香丸的五原与性味比较

3 九味麝香丸双酯型生物碱含量测定

3.1 材料与仪器

Agilent1290型超高效液相色谱仪，Agilent6460型三重四极杆质谱仪，MassHunter Qualitative Analysis B.03.00定性分析软件，Mass Hunter Quantitative Analysis B.03.00定量分析软件(美国Agilent公司)；ST16R型台式冷冻离心机(Thermo Scientific公司)；SECURA225D-1CN电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；Milli-Q Integral 3型超纯水机(美国Millipore公司).

九味麝香丸阴性样品(缺榜那、榜那叶)、榜那、榜那叶由西藏自治区藏医院制剂中心提供.氢溴酸高乌甲素(批号：100289-200902，含量以95.7%计)，乌头双酯型生物碱对照提取物(批号112029-201601、新乌头碱含量31.7%、次乌头碱含量30.0%、乌头碱含量31.8%)(均购自中国食品药品检定研究院).乙腈、甲醇，色谱纯(美国Fisher公司)；甲酸，色谱纯(成都市科隆化学品有限公司)；醋酸铵，色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)；其余试剂均为分析纯.

3.2 方法与测定结果

3.2.1 双酯型生物碱含量测定方法

参照罗春梅、张意涵等建立的LC-MS检测附子生物碱方法进行测定[11-12].

3.2.1.1 色谱条件

Agilent SB-C18(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)色谱柱,柱温35 ℃；流动相为2 mmol/L醋酸铵溶液(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸)，梯度洗脱：0～1.5 min，15%～20%乙腈；1.5～5 min，20%～70%乙腈；5～5.1 min，70%～100%乙腈；5.1～6.5 min，100%乙腈.体积流量0.4 mL/min，进样体积1 μL.

3.2.1.2 质谱条件

采用电喷雾离子源(ESI)，正离子模式检测，毛细管电压4 kV，干燥气温度350 ℃，干燥气流速11 L/min，雾化气压45 Pa.扫描方式为多反应监测模式(MRM)，3种生物碱及内标监测离子对及质谱分析参数(见表3).

表3 3种生物碱及内标检测离子质谱分析参数

3.2.1.3 对照品储备液及内标溶液的制备

精密称取乌头双酯型生物碱对照品10.80 mg，置10 mL量瓶中，加0.05 mol·L-1盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀.取上述对照品溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得对照品储备液(每1 mL含新乌头碱6.865 μg、次乌头碱6.48 μg、乌头碱6.87 μg).

精密称取氢溴酸高乌甲素对照品7.33 mg，折合氢溴酸高乌甲素7.23 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀.取上述溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得5.536 μg/mL的内标溶液.

3.2.1.4 供试品溶液的制备

取样品粉末(过三号筛)约1 g，精密称定并加入0.05 mol·L-1盐酸溶液25 mL，摇匀，超声处理30 min，于12 000 r·min-1离心6 min.精密吸取上清液0.4 mL至10 mL量瓶中，加1 mL内标溶液，再加甲醇定容至刻度，摇匀，于12 000 r·min-1离心6 min，取上清液待测.

3.3 测定结果

3.3.1 线性关系

取对照品储备液，按比例1∶2.5∶2∶2.5∶2∶2∶5∶10∶2逐级稀释，配制成一系列不同质量浓度的对照品溶液.取上述对照品溶液各1.0 mL置10 mL容量瓶中，各加入内标溶液1 mL，甲醇稀释至刻度，即得一系列不同浓度的混合对照品溶液.进样测定，以对照品进样浓度为横坐标(X，ng·mL-1，对照品峰面积与内标峰面积之比为纵坐标(Y)，用加权(1/x2)最小二乘法进行回归分析，得到相应的线性回归方程，结果见表4.

表4 3种生物碱的线性方程及定量分析

3.3.2 双酯型生物碱测定结果

按供试品溶液制备方法计算3种双酯型生物碱在九味麝香丸中的定量下限，结果见表5.

表5 九味麝香丸双酯型生物碱定量下限

九味麝香丸、阴性、榜那及榜那叶双酯型生物碱含量测定结果见表6.

表6 九味麝香丸双酯型生物碱测定结果(μg/g)

4 结果分析

藏医学书籍记载有很多不同配方的九味黑药丸，此药丸可挂在脖子防疫，也可口服治疗疫病，因配方不同具有灭菌、消炎、退热、咽喉清热、消肿，吸附肺部黏液，补养等作用.九味黑药丸配方中增加金光诃子、细叶草乌叶、结血蒿膏制成的九味麝香丸的水性和风性与前者有所不同，性味差异比较明显.味苦、甘、辛，消化后味苦最为明显.九味麝香丸的双酯型生物碱乌头碱和次乌头碱显阴性，新乌头碱接近于定量下限，因此在临床应用中相对比较安全.本研究报道了九味麝香丸0.20 g/kg、0.10 g/kg组对二甲苯可致小鼠耳肿胀度降低，肿胀抑制率分别为32%和20%，提示其有抑制急性炎症作用.0.20 g/kg组对小鼠棉球肉芽干重降低，对亚急性炎症也有一定的作用.0.20 g/kg、0.10 g/kg可增强DNFB所致小鼠迟发型超敏反应，0.20 g/kg组小鼠耳肿胀度和肿胀率均增高，0.10 g/kg组肿胀率增高，说明九味麝香丸在上述剂量中具有增强免疫反应作用[13].

5 结论

九味黑药丸配方中增加金光诃子、细叶草乌叶、结血蒿膏制成的九味麝香丸在临床应用中相对比较安全，并具有抗炎和提高免疫的增强药效.