临床待输血患者RhE抗原和不规则抗体的检测及其临床意义

吕彬

（大连市血液中心 辽宁大连 116000）

1 前言

人体的红细胞血型在民族、地域等方面的分布方面具有显著差异，研究、分析不同人群的血型分布，对于科学地解释某类疾病高发的原因具有重要意义，有助于对疾病的治疗和预防。当前人类的血型系统已达36个，而Rh系统是其中最为复杂的一种，其含有54种Rh血型抗原，其中，D抗原、C抗原、E抗原、c抗原、e抗原与临床输血之间有密切联系，抗原阴性的患者而言，一旦接受抗原阳性人员的血液后，会出现一种超出ABO系统之外的抗体，即红细胞不规则抗体，一旦这种抗原抗体不匹配，会导致患者出现溶血性输血反应[1]。另外，由于Rh系统存在着遗传多态性，故不同种族和地域的人群，其Rh血型抗原的分布频率也不同，所产生的不规则抗体也存在较大差异，因此为患者输血前，必须进行相关检测。鉴于此，本文对RhE抗原和不规则抗体的检测的有效性进行研究，以期为相关人员提供参考。

2 资料与方法

2.1 一般资料

选取2019年2月—2020年2月，本血液中心督导的多家用血医院患者血液标本共200例，采用微柱凝胶法对所有患者的RhE抗原进行检测。其中，男性患者132例，女性患者68例；患者的年龄范围为22～68岁，年龄均值为（44.6±3.5）岁；具有临床免疫史患者103例，无临床免疫史患者97例。本研究已获我中心伦理委员会授权，所有患者的性别、年龄和免疫史等病历资料无特异性差异（P＞0.05）。

入组标准：经血常规、肝肾功能等检测，均无明显异常者；患者及其家属均自愿参与研究，并签署知情同意书。排除标准：并发重度认知障碍、慢性疼痛病史、严重的精神疾病者；入组前已存在高血压的患者；对此次研究涉及药物过敏者；有长期服用镇痛药物史者；并发肾、心、肝等功能严重异常者；并发恶性肿瘤者；尚处于妊娠期与哺乳期中的女性患者。

2.2 仪器与方法

FYQ免疫微柱孵育器；TD-A型血型血清学离心机；血型检测卡；抗人球蛋白检测卡；血型反定型试剂盒；不规则抗体试剂；低离子强度盐溶液；红细胞血型抗体鉴定细胞。所有试剂均需要在有效期内使用。

对标本ABO、RhD、RhE血型进行检测：对患者的静脉血液进行采集，将血样添加至含EDTA抗凝剂的试管；将采集得到的标本配制成0.8%的红细胞生理盐水悬液；参照ABODE血型检测卡（即微柱凝胶）的说明书进行操作；应用专用型离心机，以900 r/min离心2 min，再以1 500 r/min离心3 min，肉眼判定其结果。

若红细胞与抗体间相结合在微柱凝胶中生成的特异性抗原抗体复合物，其浮于凝胶的表面或是其中即为阳性反应，由此说明了，在受检者的红细胞表面具有相应的抗原；对于受检者的红细胞没有与抗体间相结合，不具有特异性抗原抗体复合物生成，游离的红细胞逐步沉至微柱凝胶的底部即为阴性反应，由此说明了，在受检者的红细胞表面不具有相应的抗原。

对标本进行不规则抗体筛查：采集患者的静脉血，并将其置于不具有抗凝剂的试管中；37℃条件下静置2 h，以2 000 r/min离心10 min，获得上清液；用低离子强度盐溶液（LISS），将1～3号的O型筛选出红细胞，并配制成0.8%的悬液；对抗人球蛋白检测卡（即不规则抗体筛检）的微管进行标记，参照试剂卡相关的说明书进行操作；将试剂卡置于37℃条件下，进行15 min的孵育；立即应用专用型离心机，以900 r/min离心2 min，再以1 500 r/min离心3 min，肉眼判定其结果，结果判定方法同上。若1～3号管都呈现出阴性，表明在受检者的血清中不具有该标准O型筛选红细胞抗原特异性的免疫球蛋白G（IgG）类不完全抗体；若1～3号管，具有1管或超出1管呈现出阳性，表明在受检者的血清中具有该标准O型筛选红细胞抗原特异性的IgG类不完全抗体。

对不规则抗体进行鉴定：在检出不规则抗体呈现出阳性的标本后，需要应用1～10号谱细胞进行微柱凝胶法抗体特异性鉴定。应用微柱凝胶抗球蛋白技术，将其依次与由10人份的O型红细胞所构成的谱红细胞与自身红细胞（均为0.8%的低离子悬液）间进行反应。与谱红细胞中的1份或多份进行凝集，与自身红细胞中的不凝集即为抗体阳性，并参照与谱红细胞的反应格局，判定抗体的特异性。对于与自身红细胞凝集的，需要应用巯基试剂（2-ME）以排除自身的冷凝集素。

2.3 观察指标

RhE抗原检测结果：观察所有患者的RhE抗原检测情况，判断其阴性率和阳性率；不规则抗体筛查结果：观察所有患者的不规则抗体筛查情况，观察其具体的抗体类型。

2.4 统计学处理

采用SPSS22.0软件对所有数据进行分析，计数数据表示为“[例（%）]”表示，以χ2对数据差异实施检验；计量数据表示为（±s），对数据差异实施t检验，P＜0.05，表明数据具有统计意义。

3 结果

3.1 RhE抗原检测结果

RhE抗原检测的结果表明，RhE抗原的阳性率为51.0%、RhE抗原的阴性率为49.0%，数据对比不存在特异性差异（P>0.05），详见表1。

表1 RhE抗原检测结果（%，n）

3.2 不规则抗体筛查结果

不规则抗体筛查的结果表明，不规则抗体共8例，占比4.0%。其中，抗-E体占3.5%，其余抗体占0.5%，数据对比存在明显差异（P<0.05），详见表2。

表2 不规则抗体筛查结果（%，n）

4 讨论

红细胞血型不规则抗体一般都是由人类红细胞作为抗原对刺激同族免疫而产生作用的[2]，一旦输入血型不合的血液，就会进一步对机体造成刺激而出现抗体，特别是对于存在输血史的患者而言，能够对之前无法检出的抗体来进行激活。近年来的研究表明[3]，红细胞异源免疫是临床输血患者的一种常见并发症，是临床上红细胞不规则抗体所导致的一种溶血性输血反应，同时也是输血死亡的一大重要因素[4]。在非传染输血性反应中，迟发型的血清反应是3种溶血性输血反应中最为重要的一种。在红细胞规则抗体中，Rh系统抗体是由免疫系统刺激产生的，其中抗-E抗体是近年来最为常见的一种抗体。

我国临床输血技术规范只要求对患者的ABO血型和RhD抗原进行检测，而对于RhE抗原并没有特殊性的要求[5]。由于我国人群的RhE阴性率比较高，且明显高于RhD阴性率，若在输血前没有做好相应的预防措施，易出现同种免疫，一旦产生不规则抗体，会导致临床上难以配血，甚至造成十分严重的后果[6]。对具有输血史、妊娠史的患者而言，需要对其就同种抗体进行筛查、鉴定，在具备相应条件后，才能够对该类患者应用RhE等Rh系统进行抗原同型输注，以减少机体生成Rh系统同种抗体的机率[7]。

产生不规则抗体的原因多是输血、妊娠所生成的红细胞同种免疫[8]。由于妊娠会生成免疫应答，故女性生成不规则抗体、发生溶血反应的机率相较于男性更高[9]。在临床中，需要尤其关注待输血的女性患者，对非RhD抗原引发的同种免疫反应，需要给予更多的关注。在法国，需要对献血者、受血者均进行ABO、Rh、Kell系统表现型常规鉴定，并规定对年龄低于50周岁的女性输血患者需要实现Rh、Kell系统间的相匹配（其中，包括RhC、RhE、Rhc、Rhe、K抗原），以防止生成不规则抗体[10]。近几年，红细胞同种异源免疫问题已在发达国家获得较高的关注，部分研究人员提出，在进行输血以前表现型的扩展性匹配（EM），即把仅ABO、RhD同型匹配扩展至RhC、RhE、Rhc、Rhe、K、Fya、Jka、S等相关抗原的匹配，可以避免不规则抗体的生成及其负面作用，但是，该类十分精准地匹配需要以较大规模的血清学筛查基因分型为前提，使找出最为合适供血者的工作更加复杂，故现阶段，该类表现型匹配在国外只被应用于特定的患者群体，例如，镰状细胞性贫血患者、β-地中海贫血的患者等[11]。

在我国，给予不规则抗-E抗体具有的多发性，与白种人群预防抗-D抗体间相似，应做到在输血前对患者、献血者进行RhE抗原检测，以对两者的RhE抗原进行更为准确地分型，并促进ABO、RhD、RhE之间的匹配性输血得以实现[12]。唯有如此，才能够在源头上降低不规则抗-E抗体的总阳性率，以防生成抗-E抗体对患者再次输血造成困难，保障临床输血的安全性[13]。

本文采用微柱凝胶法对RhE抗原进行检测，并予以不规则抗体检测，结果显示，，RhE抗原的阳性率为51.0%（102/200），RhE抗原的阴性率为49.0%（98/200）；不规则抗体共8例，占比4.0%，中抗-E体7例，占比3.5%，其余抗体1例，占比0.5%，数据对比存在明显差异（P<0.05）。

综上所述，在临床待输血患者中，最常出现的不规则抗体为抗-E体，而对其予以RhE抗原检测，并做好血型同型匹配输血，能够有效避免患者出现抗-E体，有助于保证临床输血的安全性。