蠕形螨和角膜上皮树突状细胞与睑缘炎相关性研究

崔兵杰，邹媛媛，张敬一，张慧芹，韩风梅，梁沛

蠕形螨是人类最常见的寄生虫，可见于眼睑、纤毛、睑板腺、面部及外耳道，其身体透明，形状细长，分为头颈部和尾部，身体前部有八条短腿[1]。蠕形螨主要感染途径是接触传播，人类对其普遍易感[2]。由于眼睑解剖学特征，常清洁不到位，这为蠕形螨的传播和繁衍提供了良好的环境。已有研究[3]报道了蠕形螨与睑缘炎之间存在重要关系。同时，睑缘炎会影响到泪膜的功能，与眼表炎症、干眼和免疫细胞相关，角膜上皮树突状细胞为抗原提呈细胞，其与干眼和眼表炎症的发生密切相关[4]。活化的角膜上皮树突状细胞表现在体积增大和树突增多[5]。因此，本研究目的是定量检测睑缘炎患者睫毛毛囊内的蠕形螨和角膜上皮树突状细胞，为睑缘炎的诊断和治疗提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2020 年3 月—2020 年12 月就诊于沧州市中心医院眼科门诊的50 例(50 只眼)睑缘炎患者，设为试验组，年龄与性别相匹配的健康志愿者50例(50 只眼)为对照组。试验组：男性20 例，女性30例，年龄25～76 岁，平均年龄（51.86±12.28）岁。对照组：男性28例，女性22例，年龄21～71岁，平均年龄（48.62±13.16）岁。2 组的年龄及性别差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究已经沧州市中心医院伦理委员会审核并批准[批准号：2021-213-02（z）]。

1.2 诊断标准及排除标准

睑缘炎诊断标准[6]：（1）有以下1 种或几种眼表不适的表现，有眼红、眼痒、异物感、眼睑部有烧灼感等；（2）睑缘充血、肥厚、睑缘皮肤潮红，有鳞屑或痂皮、糜烂等改变。

排除标准：（1）Stevens-Johnson 综合征、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病；（2）化学、热或辐射损伤；（3）圆锥角膜、感染性角膜炎史；（4）眼部手术史；（5）过去3个月佩戴隐形眼镜或药物使用会改变眼表的患者。

1.3 研究方法

由同一位有经验的技师对所有患者进行活体共聚焦显微镜（in vivo confocal microscopy，IVCM）检查，IVCM（德国海德堡公司，HRT-3）由Rostock 角膜模块组件和海德堡视网膜激光断层扫描系统Ⅲ代(HRT-Ⅲ)组成。检测放大倍数为800 倍，激光波长670 nm，接触式技术中扫描范围400 µm×400 µm，轴向分辨率为1µm。

操作步骤：（1）向受检者的结膜囊内滴入盐酸奥布卡因1滴行表面麻醉。（2）调好仪器、设好参数，受检者注视固视灯，选取角膜中央区，预设置物镜接触与角膜的焦平面深度为0 µm，深度约为50～70 µm 处，能清晰显示角膜上皮树突状细胞，无褶皱，并且对比度良好。（3）选择有价值的3 张图像并存盘，使用软件自带的细胞计数工具对角膜上皮树突状细胞进行计数，得出其密度，取平均值，并观察其形态。（4）让无菌接触帽接触受检者下睑睫毛根部，检查者用棉签轻按压受试者下眼睑来改变睫毛的方向，依次扫描颞侧、中央和鼻侧各3 根睫毛根部，共计9根睫毛，调整焦距以评估整个毛囊和睫毛根部，保存图片。统计每个毛囊内的蠕形螨数量，并合计总量，总量计为眼睑毛囊蠕形螨数量（图1）。

图1 IVCM观察睫毛毛囊内蠕形螨感染情况

由另一位医师对所有图片进行分析。观察并记录患者的睫毛根部毛囊内的蠕形螨数量和角膜上皮树突状细胞密度（图2）。

图2 IVCM观察角膜上皮树突状细胞

1.4 统计学方法

使用SPSS23.0 软件对数据进行分析。各测试数据以（）表示。2 组蠕形螨数量、角膜上皮树突状细胞密度的比较以及年龄的匹配均采用独立样本t检验，蠕形螨阳性率的比较和性别的匹配采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组蠕形螨感染率

试验组蠕形螨感染（46/50）,阳性率为92%，对照组蠕形螨感染(34/50)，阳性率为68%。2组差异有统计学意义(χ2=9.000，P=0.003)。试验组平均每个眼睑感染蠕形螨数量(7.28±3.86)只，显著高于对照组(4.02±3.79)只，差异有统计学意义(t=4.260，P=0.000)。试验组平均每个毛囊感染蠕形螨数量(0.81±0.43)只，也显著高于对照组(0.45±0.42)只，差异有统计学意义(t=4.260，P=0.000)。

2.2 角膜上皮树突状细胞密度分析

试验组角膜上皮树突状细胞密度（53.44±11.55）个/mm2显著高于对照组（20.28±6.96），差异有统计学意义(t=17.388，P=0.000)。

3 讨论

蠕形螨有许多种，然而寄生在人体的蠕形螨只有毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨[7]。毛囊蠕形螨生活在睫毛的毛囊中，长时间会导致睫毛毛囊根部增生和过度角质化，睫毛根部出现袖套状分泌物，造成睫毛倒睫和脱落等病变；皮脂蠕形螨则寄居在睑板腺和睫毛皮脂腺，长时间寄居会使睑板腺口堵塞，导致泪液脂质层缺少，破坏泪膜结构，引起干眼症[3,8]。近年来，睑缘炎患者蠕形螨的诊治越来越得到重视。最近，WANG 等[9]发表了一篇关于IVCM 的研究，IVCM 对蠕形螨感染的诊断准确率高达100%，而拔取睫毛在显微镜下观察技术是有创的、不能重复进行。IVCM 与拔取睫毛在显微镜下观察技术相比有很多优点，它具有非侵入性，无需拔取睫毛，减少患者检查痛苦，能够对多个毛囊进行蠕形螨的检测和计数，而且检出率高，即使患者存在睫毛缺失，也能对残存的毛囊进行检查，由于它的可重复性好，能定期复查，所以可在最大程度上确保消除蠕形螨。目前IVCM 已成为诊断睑缘蠕形螨感染的可靠工具。

蠕形螨被认为是一种条件性致病螨，其致病性与宿主的体质、卫生状况以及螨种、感染度及微生物的协同作用等多方面因素有关[10]。正常人群的一般感染率20%～80%，老年人中蠕形螨的感染更加普遍，据相关文献报道，在60 岁人群中蠕形螨的感染率为84%，70 岁以上人群蠕形螨的检出率甚至可达100%[10-11]。本研究中，试验组蠕形螨感染率为92%，对照组蠕形螨感染率为68%，试验组和对照组蠕形螨感染率差异存在统计学意义。试验组平均每个眼睑感染蠕形螨数量显著高于对照组，差异有统计学意义。本研究与RANDON 等[12]和KABATAS等[13]的研究结果相一致。本研究与BHANDARI等[14]的试验组蠕形螨感染率相一致，但与对照组感染率差距较大，可能与研究样本量大小有关。活体共聚焦显微镜检查对蠕形螨感染阳性检出率显著高于睫毛采样直接光镜检查，这也是本次试验蠕形螨检出率高的一个原因。感染蠕形螨的毛囊可见扩张，有程度不一样的纤维化和破坏，可产生炎症反应，睫毛毛囊根部袖套状分泌物。另外，试验组眼睑感染蠕形螨数量显著高于对照组，提示睫毛毛囊蠕形螨感染是睑缘炎的一个重要危险因素。

睑缘炎是眼睑的亚急性或慢性炎症反应，病因复杂，如治疗不及时，会引发更严重并发症[15]。睑缘炎长期不治愈，会使患者睑缘变的钝圆，皮肤黏膜交界线向内偏移，反复刺激眼表组织，最终使角膜损伤[16]。角膜上皮树突状细胞是角膜重要的抗原提呈细胞，在免疫反应中起关键作用，活化后可以在短时间内释放大量细胞因子，活化的树突状细胞能够摄取和加工抗原，将加工后的抗原复合物提呈给T 细胞，其抗原提呈能力是B 淋巴细胞及巨噬细胞的10～100 倍，从而强烈激活T 细胞，进而引起机体初始以及获得性免疫反应，相反未成熟的树突状细胞使T 细胞处于安静状态，诱导免疫耐受[17]。IVCM广泛应用于角膜疾病的诊治，它可以进行高分辨率活体角膜观察，同时可快速、可靠地显现和评估角膜全层显微结构，能实时检测角膜上皮树突状细胞的图像。CRUZAT 等[18-19]发现，感染性角膜炎的患眼角膜中央区角膜上皮树突状细胞密度明显增高，形态发生变化，而且对侧健眼的角膜中央区树突细胞密度也增加。本研究结果基本与上面一致，发现试验组角膜上皮树突状细胞比对照组的数量多，胞体较大、树突增多，从一定程度上可以反映睑缘炎所造成的眼表炎症。分析可能原因：（1）睑缘蠕形螨感染与睑板腺功能障碍和角膜炎的发生有相关[20]，睑缘炎患者蠕形螨感染率高，感染数量多，引起睑板腺功能障碍[21]，从而脂质分泌减少，使泪膜稳定性下降，形成蒸发过强型干眼，造成眼表炎症，在细胞水平主要表现在角膜树突状细胞的活化和密度增加[22]；（2）蠕形螨长时间在毛囊内会导致毛囊扩张、阻塞，其代谢产物可引起宿主产生迟发型超敏反应，严重时会引起蠕形螨相关的角结膜炎[23]，使角膜上皮树突状细胞密度增多。所以临床上在治疗睑缘炎的同时，也要关注睑缘炎有可能会引起的干眼或眼表炎症。

综上所述，IVCM 可以有效的对睑缘炎患者睫毛毛囊内的蠕形螨和角膜上皮树突状细胞进行无创、定量检测，为睑缘炎的诊断和治疗提供依据。