冬虫夏草内生菌Fusarium solani化学成分研究

旷歧轩， 李青洲， 雷力荣， 郭大乐， 邓 赟

(成都中医药大学药学院，中药材标准化教育部重点实验室，西南特色中药资源国家重点实验室，四川 成都 611137)

冬虫夏草是麦角菌科真菌冬虫夏草Cordycepssinensis(Berk.) Sacc.寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体，可调节免疫、呼吸、生殖和心血管等系统功能[1-2]，其中成药制剂在临床广泛使用，用于治疗肺肾两虚、慢性支气管炎、高血脂症、肝硬化等[3]。内生菌与宿主互利共生，其次生代谢产物一般具有抗虫、杀菌、抗肿瘤等功效[4-5]，故研究冬虫夏草内生菌次生代谢产物的化学成分对发掘新型药用微生物资源、寻找替代品、保护种质资源具有重要的意义[6]。

镰刀菌Fusariumsp.分布广泛，其次生代谢产物抗菌作用、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长等[7-8]；F.solani对resibufogenin进行生物转化，得到3个低细胞毒性的转化产物[9]；海洋源真菌F.solani中分离得到具有抗炎活性的6个新的镰刀菌素衍生物fusarins G～L[10]；波纹拟南芥内生真菌F.solani中分离出具有细胞毒性的新的萘醌和氮杂蒽醌衍生物[11]；真菌F.solani中分离得到新的烯酸和双烯酸酯，是一类有效的抗茶树病原真菌化合物[12]。本实验研究Fusariumsp.次生代谢产物，丰富了冬虫夏草内生菌次生代谢产物的化学结构的多样性，也为冬虫夏草与镰刀菌属真菌的相互作用提供了化学视角的物质基础。

1 材料

ISQ EC单四极杆质谱仪(美国Thermo Fisher公司)；Ascend 700M核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)；中低压层析柱、NP7000液相色谱仪(江苏汉邦仪器有限公司)；GF254薄层硅胶板(青岛海洋化工厂)；立式高压蒸汽灭菌器(上海申安医疗有限公司)。乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇(成都科龙化工有限公司，批号2020042203、2020042002、2020051702)；超纯水为自制。

冬虫夏草于2018年4月采自甘肃省夏河县，经成都中医药大学蒋桂华教授鉴定为冬虫夏草Cordycepssinensis。从新鲜冬虫夏草中分离得到1株内生真菌，将其16S rRNA 基因序列提交到NCBI的GenBank基因库，经BLAST比对，故鉴定为Fusariumsolani，保存于成都中医药大学药学院生化制药实验室。

2 提取与分离

活化后的F.solani菌株经液体培养与提取[13-14]，得到总浸膏36.26 g，经D101大孔树脂吸附分离后，得到纯水部位18.68 g、30%甲醇部位6.84 g、60%甲醇部位5.22 g、甲醇部位5.78 g。60%甲醇部位经Sephadex LH-20分离，三氯甲烷-甲醇(50∶50)洗脱，通过TLC、HPLC分析合并得5个流分Fr.A～E。

Fr.A经C18键、反向硅胶中压低色谱柱层析，甲醇-水(10∶90～100∶0)洗脱，通过TLC、HPLC分析合并得到9个流分Fr.A1～A9，经制备型HPLC分离纯化(检测波长210、254 nm)，Fr.A2经甲醇-水(30∶70)制备得化合物4(3.5 mg)。

Fr.B经C18键、反向硅胶中压低色谱柱层析，由醇-水(5∶95～100∶0)洗脱，通过TLC、HPLC分析合并得到12个流分Fr.B1～B12，经制备型HPLC分离纯化(检测波长210、254 nm)，Fr.B1经甲醇-水(5∶95)制备得化合物25(1.0 mg)，Fr.B2经甲醇-水(11∶89，tR=26.32、28.24 min)制备得化合物20(0.7 mg)、21(0.8 mg)，Fr.B3经甲醇-水(29∶71，tR= 17.25、18.60 min)制备得化合物11(1.3 mg)、12(0.9 mg)，Fr.B4经甲醇-水(25∶75，tR=19.04、34.59 min)制备得化合物2(8.0 mg)、16(0.8 mg)，以及甲醇-水(32∶68，tR=17.99、22.64 min)制备得化合物9(2.6 mg)、3(1.3 mg)，Fr.B5经甲醇-水(40∶60)制备得化合物22(0.7 mg)；Fr.B6甲醇-水(35∶65)制备得化合物1(1.5 mg)。

Fr.C经C18键和反向硅胶中压低色谱柱层析，甲醇-水(20∶80～100∶0)洗脱，通过TLC、HPLC分析合并得到12个流分Fr.C1～C12，经制备型HPLC分离纯化(检测波长210、254 nm)，Fr.C2经甲醇-水(25∶75)制备得化合物13(1.6 mg)，Fr.C3经甲醇-水制备得化合物6(5.3 mg)、10(1.0 mg)，Fr.C4经甲醇-水(22∶78)制备得化合物5(0.7 mg)。

Fr.D经C18键和反向硅胶中压低色谱柱层析，甲醇-水(20∶80～100∶0)洗脱，通过TLC、HPLC分析合并得到8个流分Fr.D1～D8，经制备型HPLC分离纯化(检测波长210、254 nm)，Fr.D3经甲醇-水制备得化合物17(1.3 mg)，Fr.D4经甲醇-水(40∶60)制备得化合物18(0.6 mg)，Fr.D6经甲醇-水制备得化合物23(0.8 mg)、24(0.7 mg)。

Fr.E经C18键和反向硅胶中压低色谱柱层析，甲醇-水(20∶80～100∶0)洗脱，通过TLC、HPLC分析合并得到10个流分Fr.E1～E10，经制备型HPLC分离纯化(检测波长210、254 nm)，Fr.E4经甲醇-水(41∶59，tR=38.46 min)制备得化合物15(0.7 mg)，Fr.E5经甲醇-水(45∶55，tR=30.28、37.30 min)制备得化合物7(1.8 mg)、8(2.9 mg)，Fr.E5经甲醇-水(35∶65)制备得化合物14(1.6 mg)，Fr.E8经甲醇-水(70∶30)制备得化合物19(0.6 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色固体，ESI-MSm/z：227.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.52 (1H, dd,J=11.1, 6.5 Hz, H-6), 4.46 (1H, t,J=4.4 Hz, H-8), 4.17 (1H, dd,J=7.1, 4.6 Hz, H-3), 3.66 (1H, dd,J=12.8, 4.5 Hz, H-9a), 3.44 (1H, d,J=12.7, 1.5 Hz, H-9b), 2.28 (1H, dd,J=13.3, 6.5 Hz, H-7a), 2.08 (1H, ddd,J=13.2, 11.2, 4.3 Hz, H-7b), 1.93 (1H, m, H-10a), 1.89 (1H, m, H-11), 1.50 (1H, ddd,J=13.1, 7.7, 5.2 Hz, H-10b), 0.97 (3H, d,J=3.7 Hz, H-13), 0.95 (3H, d,J=3.5 Hz, H-12)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 173.1 (C-5), 169.0 (C-2), 69.1 (C-8), 58.7 (C-6), 55.2 (C-3), 54.6 (C-9), 39.4 (C-10), 38.2 (C-7), 25.8 (C-11), 23.3 (C-12), 22.2 (C-13)。与文献[15]报道基本一致，故鉴定为环-4-羟基-(L)-脯氨酸-(L)-亮氨酸。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z：211.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.26 (1H, dd,J=8.9, 6.9 Hz, H-9), 4.12 (1H, m, H-6), 3.51 (2H, m, H-3), 2.30 (1H, m, H-5a), 1.98～2.06 (2H, m, H-4a, 11), 1.86～1.96 (3H, m, H-4b, 5b, 10a), 1.52 (1H, m, H-10b), 0.96 (3H, d,J=4.3 Hz, H-12), 0.95 (3H, d,J=4.1 Hz, H-13)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 172.8 (C-1), 168.9 (C-7), 60.3 (C-6), 54.6 (C-9), 46.4 (C-3), 39.4 (C-10), 29.1 (C-5), 25.8 (C-11), 23.7 (C-4), 23.3 (C-12), 22.2 (C-13)。与文献[16]报道基本一致，故鉴定为环-(L)-脯氨酸-(D)-亮氨酸。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z：211.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.24 (1H, m, H-6), 3.68 (1H, dd,J=6.3, 0.9 Hz, H-9), 3.61 (1H, m, H-3a), 3.49 (1H, m, H-3b), 2.34 (1H, m, H-5b), 2.02 (1H, m, H-10), 1.90(1H, m, H-5a), 1.60 (1H, m, H-11b), 1.22 (1H, m, H-11a), 1.00 (3H, d,J=6.9 Hz, H-12), 0.95 (3H, t,J=7.4 Hz, H-13)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.5 (C-7), 167.9 (C-1), 63.5 (C-6), 59.7 (C-9), 46.8 (C-3), 40.9 (C-10), 30.3 (C-5), 26.1 (C-11), 22.9 (C-4), 15.7 (C-13), 11.6 (C-12)。与文献[17]报道基本一致，故鉴定为环-(D)-脯氨酸-(L)-异亮氨酸。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm/z：213.2[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 3.94 (1H, ddd,J=9.2, 4.5, 1.2 Hz, H-6), 3.77 (1H, dd,J=4.4, 1.2 Hz, H-3), 2.22 (1H, m, H-11), 1.87 (1H, m, H-7), 1.75 (1H, ddd,J=13.6, 9.1, 4.5 Hz, H-8a), 1.60 (1H, ddd,J=14.0, 9.2, 5.2 Hz, H-8b), 1.04 (3H, d,J=7.1 Hz, H-9), 0.94 - 0.99 (9H, m, H-10, H-12, H-13)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 169.9 (C-5), 168.2 (C-2), 60.1(C-3), 52.9 (C-6), 44.6 (C-7), 32.3 (C-11), 23.9 (C-8), 22.2 (C-13), 20.4 (C-12), 17.9 (C-10), 16.4 (C-9)。与文献[18]报道基本一致，故鉴定为环-(L)-异亮氨酸-(L)-缬氨酸。

化合物5：淡黄色固体，ESI-MSm/z：185.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 4.03 (1H， qd,J=7.1, 1.5 Hz, H-3), 3.90 (1H, dd,J=3.4, 1.5 Hz, H-6), 1.96 (1H, m, H-7), 1.52 (1H, m, H-9a), 1.44 (3H, d,J=7.1 Hz, H-10), 1.25 (1H, m, H-9b), 1.02 (3H, d,J=7.1 Hz, H-11), 0.95 (3H, t,J=7.4 Hz, H-8)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.2 (C-4), 169.2 (C-1), 60.9 (C-6), 51.6 (C-3), 40.3 (C-7), 25.6 (C-9), 20.9 (C-11), 15.6 (C-8), 12.2 (C-10)。与文献[19]报道基本一致，故鉴定为环-异亮氨酸-丙氨酸。

化合物6：白色固体，ESI-MSm/z：199.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 3.83 (2H, m, H-2, H-5), 2.29 (2H, m, H-7, H-7′), 1.06 (6H, d,J=7.1 Hz, H-8, H-8′), 0.95 (6H, d,J=6.9 Hz, H-9, H-9′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 170.2 (C-3, C-6), 61.2 (C-2, C-5), 33.2 (C-7, C-7′), 19.3 (C-8, C-8′), 17.8 (C-9, C-9′)。与文献[20]报道基本一致，故鉴定为3,6-二异丙基-2,5-二酮哌嗪。

化合物7：白色固体，ESI-MSm/z：227.2[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 8.15 (1H, d,J=2.7 Hz, 1-NH), 8.02 (1H, d,J=2.6 Hz, 4-NH), 3.76 (1H, ddd,J=8.6, 4.0, 1.3 Hz, H-6), 3.68 (1H, m,H-3), 1.83 (2H, m, H-8, 11), 1.62 (1H, ddd,J=13.5, 8.7, 4.7 Hz, H-7a), 1.45 (1H, m, H-7b), 1.42 (1H, m, H-12a) 1.17 (1H, m, H-12b), 0.91 (3H, d,J=7.0 Hz, H-13), 0.88 (3H, d,J=6.7 Hz, H-9), 0.86 (3H, d,J=6.5 Hz, H-10), 0.85 (3H, d,J=7.4 Hz, H-14)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ: 168.8 (C-5), 167.3 (C-2), 59.3 (C-3), 52.8 (C-6), 44.1 (C-7), 38.7 (C-11), 24.8 (C-12), 24.0 (C-8), 23.6 (C-9), 22.2 (C-10), 15.63 (C-13), 12.25 (C-14)。与文献[21]报道基本一致，故鉴定为环-(L)-亮氨酸-(L)-异亮氨酸。

化合物8：白色固体，ESI-MSm/z：261.2[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 8.11 (1H, d,J=2.0 Hz, 1-NH), 7.88 (1H, d,J=2.1 Hz, 4-NH), 7.24 (2H, m, H-9, 13), 7.19 (3H, m, H-10, 11, 12), 4.21 (1H, m, H-3), 3.58(1H, m, H-6), 3.16 (1H, dd,J=13.5, 4.1 Hz, H-7a), 2.85 (1H, dd,J=13.5, 5.1 Hz, H-7b), 1.40 (1H, m, H-14), 0.65 (2H, m, H-15), 0.55 (6H, m, H-16, 17)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ: 166.4 (C-5), 166.3 (C-2), 136.3 (C-8), 130.4 (C-9. C-13), 127.9 (C-10. C-12), 126.5 (C-11), 58.7 (C-6), 55.0 (C-3), 37.8 (C-7), 37.6 (C-14), 23.1 (C-15), 14.4 (C-16), 11.8 (C-17)。与文献[22]报道基本一致，故鉴定为环-(D)-苯丙氨酸-(L)-异亮氨酸。

化合物9：淡红色固体，ESI-MSm/z：241.1[M+Na]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ：7.27 (2H, m, H-2′, 6′), 7.22 (3H, m, H-4′, 3′, 5′), 4.31 (1H, m, H-2), 3.64 (1H, dd,J=4.6, 1.6 Hz, H-5), 3.23 (1H, dd,J=13.8,5,4 Hz, H-6a), 3.03 (1H, dd,J=13.8,4.7Hz, H-6b), 1.64 (1H, m, H-7), 0.79 (3H, d,J=7.0Hz, H-8), 0.43 (3H,J=6.8Hz, H-9)：13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 167.9 (C-4), 135.7 (C-1′), 130.1 (C-2′, 6′), 128.2 (C-3′,5′), 126.8 (C-4′), 59.8 (C-5), 55.9 (C-2), 38.7 (C-6), 31.9 (C-7), 17.7 (C-8), 15.7 (C-9)。与文献[23]报道基本一致，故鉴定为2-isopropyl-5-phe-nylmethyl-imidazolidinone-4-one。

化合物10：白色固体，ESI-MSm/z：245.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.33～7.28 (3H, m, H-3′, H-4′, H-5′), 7.18 (2H, m, H-2′, H-6′), 4.20 (1H, m, H-6), 3.54 (1H, m,H-3b), 3.19 (1H, dd,J=13.7, 4.7 Hz, H-10b), 2.99 (1H, m, H-10a), 2.61 (1H, dd,J=10.7, 6.4 Hz, H-3a), 2.03 (1H, m, H-5a), 1.91 (1H, m, H-5b), 1.64 (1H, m, H-4a), 1.33 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.3 (C-1), 167.4 (C-7), 136.7 (C-1′), 131.3 (C-3′, C-5′), 129.6 (C-2′, C-6′), 128.5 (C-4′), 59.8 (C-6), 59.1 (C-9), 46.1 (C-3), 40.9 (C-10), 29.8 (C-5)。与文献[24]报道基本一致，故鉴定为环-(L)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸。

化合物11：白色固体，ESI-MSm/z：261.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.29～7.20 (5H, m, H-1′, H-2′, H-3′, H-4′, H-5′, H-6′), 4.48 (1H, m, H-9), 4.36 (1H, ddd,J=11.8, 5.9, 1.9 Hz, H-6), 4.27 (1H, m, H-4), 3.70 (1H, dd,J=13.0, 5.1 Hz, H-3b), 3.28 (1H, m, H-3a), 3.17 (2H, m, H-10), 2.06 (1H, m, H-5a), 1.37 (1H, ddd,J=12.9, 11.7, 4.6 Hz, H-5b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.2 (C-7), 167.1 (C-1), 137.4 (C-1′), 131.0 (C-2′, C-6′), 129.5 (C-3′, C-5′), 128.1 (C-4′), 68.5 (C-4), 58.3 (C-6), 57.6 (C-9), 55.3 (C-3), 38.9 (C-5), 38.0 (C-10)。与文献[25]报道基本一致，故鉴定为环-4-羟基-(L)-脯氨酸-(L)-苯丙氨酸。

化合物12：白色固体，ESI-MSm/z：263.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.05～7.01 (2H, m, H-10, H-12), 6.74～6.68 (2H, m, H-9, H-13), 4.24 (1H, ddd,J=5.3, 4.6, 1.6 Hz, H-6), 3.63 (1H. dd,J=4.7, 1.6 Hz, H-3), 3.14 (1H, dd,J=14.0, 5.3 Hz, H-7a), 2.94 (1H. dd,J=14.0, 4.6 Hz, H-7b), 1.65 (1H, m,J=6.9, 4.7 Hz, H-1′), 0.82 (3H, d,J=7.0 Hz, H-3′), 0.49 (3H, d,J=6.8 Hz, H-2′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 169.6 (C-1), 169.4 (C-4), 157.9 (C-11), 132.4 (C-10, C-12), 127.6 (C-8), 116.3 (C-9, C-13), 61.3 (C-3), 57.5 (C-6), 39.3 (C-7), 33.4 (C-1′), 19.2 (C-3.), 17.2 (C-4′)。与文献[26]报道基本一致，故鉴定为环-(L)-缬氨酸-(D)-络氨酸。

化合物13：白色固体，ESI-MSm/z：247.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 8.09 (1H, s, H-1), 7.90 (1H, s, H-4), 7.23 (2H, m, H-9, 13), 7.18 (3H, m, H-10, 11, 12), 4.20 (1H, m, H-6), 3.53 (1H, m, H-3), 3.14 (1H, dd,J=13.5, 4.3 Hz, H-7a), 2.87 (1H, dd,J=13.5, 5.1 Hz, H-7b), 1.70 (1H, m, H-14), 0.64 (3H, d,J=7.1 Hz, H-15), 0.26 (3H, d,J=6.9 Hz, H-16)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ:166.6 (C-2), 166.4 (C-5), 136.3 (C-8), 130.3 (C-9, 13), 127.9 (C-10, 12), 126.5 (C-11), 59.2 (C-3), 55.0 (C-6), 37.8 (C-14), 31.0 (C-7), 18.2 (C-15), 16.2 (C-16)。与文献[27]报道基本一致，故鉴定为环-(L)-苯丙氨酸-(L)-缬氨酸。

化合物14：淡红色固体，ESI-MSm/z：284.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.58 (1H, m, H-5), 7.33 (1H, m, H-8), 7.09 (2H, m, H-6, H-7), 7.01 (1H, m, H-2), 4.42 (1H, m, H-11), 4.00 (1H, ddd,J=11.0, 6.4, 1.9 Hz, H-14), 3.46 (1H, m, H-17a), 3.27 (1H, m, H-17b), 1.97 (1H, m, H-19a), 1.68 (2H, m, H-18), 0.95 (1H, m, H-19b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 170.7 (C-13), 167.4 (C-16), 137.9 (C-9), 128.7 (C-4), 125.6 (C-2), 122.6 (C-7), 120.9 (C-6), 119.8 (C-5), 112.3 (C-8), 109.5 (C-3), 60.1 (C-14), 57.2 (C-11), 45.9 (C-17), 29.2 (C-10), 29.1 (C-19), 22.5 (C-18)。与文献[28]报道基本一致，故鉴定为brevianamide F。

化合物15：白色粉末，ESI-MSm/z：350.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.59 (1H, dd,J=8.0, 2.7 Hz, H-4), 7.34 (1H, dd,J=8.2, 2.7 Hz, H-7), 7.12 (1H, m, H-6), 7.05 (2H, m, H-5, 2), 6.62 (2H, m, H-18, 20), 6.46 (2H, dd,J=8.7, 2.6 Hz, H-17, 21), 4.17 (1H, m, H-9), 3.86 (1H, m, H-12), 3.04 (1H, dd,J=14.7, 3.9 Hz, H-8a), 2.76 (1H, m, H-8b), 2.56 (1H, m, H-15a), 1.46 (1H, dd,J=13.7, 8.4 Hz, H-15b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 169.7 (C-11), 169.3 (C-14), 156.2 (C-19), 138.0 (C-7a), 131.9 (C-17, 21), 128.9 (C-3a), 127.7 (C-16), 125.8 (C-2), 122.1 (C-6), 120.2 (C-5), 119.9 (C-4), 116.3 (C-18, 20), 112.5 (C-7), 109.6 (C-3), 57.9 (C-12), 57.1 (C-9), 40.6 (C-15), 31.2 (C-8)。与文献[29]报道基本一致，故鉴定为环-(D)-色氨酸-(L)-酪氨酸。

化合物16：白色固体，ESI-MSm/z：258.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.59 (1H, d,J=8.0, H-12), 7.31 (1H, d,J=8.1, H-15), 7.06 (2H, m, H-10, 14), 6.99 (1H, ddd,J=8.0, 6.9, 1.0 Hz, H-14), 4.26 (1H, m, H-2), 3.69 (1H, m, H-5), 3.45 (1H, ddd,J=14.7, 3.9, 0.6 Hz, H-8b), 3.14 (1H, ddd,J=14.7, 4.5, 0.7 Hz, H-8a), 0.35 (3H, d,J=7.1 Hz, H-7)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 170.6 (C-4), 169.5 (C-1), 137.8 (C-15a), 129.2 (C-11a), 125.8 (C-10), 122.4 (C-12), 120.2 (C-13), 119.9 (C-14), 112.1 (C-15), 109.3 (C-11), 57.5 (C-2), 51.7 (C-5), 30.8 (C-8), 20.0 (C-7)。与文献[30]报道基本一致，故鉴定为环-(D)-丙氨酸-(L)-色氨酸。

化合物17：白色粉末，ESI-MSm/z：185.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 3.99 (1H, m, H-2), 3.93 (1H, ddd,J=8.5, 4.7, 1.1 Hz, H-5), 1.85 (1H, m, H-7), 1.73 (1H, ddd,J=13.5, 8.6, 4.7 Hz, H-6a), 1.63 (1H, ddd,J=13.9, 8.5, 5.5 Hz, H-6b), 1.44 (3H, d,J=7.1 Hz, H-10), 0.98 (3H, d,J=6.6 Hz, H-8), 0.96 (3H, d,J=6.6 Hz, H-9)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 171.5 (C-4), 170.9 (C-1), 54.6 (C-5), 51.9 (C-2), 45.1 (C-6), 25.3 (C-7), 23.5 (C-8), 22.1 (C-9), 20.9 (C-10)。与文献[31]报道基本一致，故鉴定为环-丙氨酸-亮氨酸。

化合物18：白色粉末，ESI-MSm/z：203.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.55 (1H, dd,J=7.9, 1.0 Hz, H-4), 7.32 (1H, dd,J=8.1, 0.9 Hz, H-1), 7.07 (2H, m, H-3, 7), 7.00 (1H, ddd,J=7.9, 6.9, 1.0 Hz, H-2), 3.46 (2H, m, H-9), 3.46 (2H, t,J=7.4 Hz, H-9), 2.94 (2H, td,J=7.4, 0.9 Hz, H-10), 1.91 (3H, s, H-12)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 173.3 (C-11), 138.2 (C-6), 128.8 (C-5), 123.3 (C-7), 122.3 (C-2), 119.6 (C-3), 119.2 (C-4), 113.3 (C-8), 112.2 (C-1), 41.6 (C-10), 26.2 (C-9), 22.6 (C-12)。与文献[32]报道基本一致，故鉴定为N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]acetamide。

化合物19：淡黄色粉末，ESI-MSm/z：153.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 6.54 (1H, dd,J=2.4, 1.5 Hz, H-3), 5.97 (1H, d,J=2.5 Hz, H-5), 3.81 (3H, s, H-8), 2.02 (3H, d,J=1.7 Hz, H-7)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 189.4 (C-4), 183.5 (C-1), 160.6 (C-2), 145.3 (C-6), 134.5 (C-5), 107.9(C-3), 56.9 (C-8), 15.4 (C-7)。与文献[33]报道基本一致，故鉴定为2-methoxy-6-methyl-1,4-benzoquinone。

化合物20：白色固体，ESI-MSm/z：281.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 8.27 (1H, s, H-8), 8.21 (1H, s, H-2), 6.01 (1H, d,J=4.7 Hz, H-1′), 4.85 (1H, m, H-3′), 4.51 (1H, m, H-2′), 4.48 (1H, m, H-4′), 3.40 (1H, m, 5′a), 3.35 (1H, m, 5′b), 2.67 (3H, s, H-7′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 157.4 (C-6), 153.9 (C-2), 150.5 (C-4), 142.2 (C-8), 120.6 (C-5), 91.1 (C-1′), 79.4 (C-4′), 74.9 (C-2′), 74.4 (C-3′), 56.1 (C-5′), 38.3 (C-7′)。与文献[34]报道基本一致，故鉴定为5′-deoxy-5′-methylamino-9-(α-L-lyxofuranosyl)adenine。

化合物21：白色固体，ESI-MSm/z：281.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 8.25 (1H, s, H-8), 8.20 (1H, s, H-2), 6.00 (1H, d,J=4.9 Hz, H-1′), 4.91 (1H, m, H-3′), 4.43 (2H, m, H-2′, 4′), 3.53 (1H, m, 5′a), 3.19 (1H, m, 5′b), 2.67 (3H, s, H-7′)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 157.4 (C-6), 153.8 (C-2), 150.4 (C-4), 142.2 (C-8), 120.9 (C-5), 91.3 (C-1′), 79.6 (C-4′), 75.0 (C-2′), 74.4 (C-3′), 58.9 (C-5′), 39.2 (C-7′)。与文献[34]报道基本一致，故鉴定为5′-deoxy-5′-methylamino-adenosine。

化合物22：淡黄色固体，ESI-MSm/z：193.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 6.19 (1H, dd,J=2.4, 0.8 Hz, H-2), 6.13 (1H, d,J=2.4 Hz, H-4), 2.55 (3H, s, H-8), 2.39 (3H, s, H-9)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 206.2 (C-7), 164.3 (C-5), 163.2 (C-3), 142.6 (C-1), 118.2 (C-6), 112.1 (C-2), 101.7 (C-4), 32.9 (C-8), 23.3 (C-9)。与文献[35]报道基本一致，故鉴定为monapurpureusin。

化合物23：淡黄色固体，ESI-MSm/z：180.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.02 (2H, m, H-7, 11), 6.70 (2H, m, H-8, 10), 3.32 (2H, m, H-4), 2.67 (2H, m, H-5), 1.90 (3H, s, H-1)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 173.2 (C-1), 156.9 (C-9), 131.2 (C-6), 130.7 (C-7, 11), 116.2 (C-8, 10), 42.4 (C-4), 35.7 (C-5), 22.5 (C-1)。与文献[36]报道基本一致，故鉴定为N-乙酰基酪胺。

化合物24：白色固体，ESI-MSm/z：167.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, CD3OD)δ: 7.31 (2H, m, H-7, 11), 7.25 (3H, m, H-8, 9, 10), 4.88 (1H, m, H-4), 4.03 (1H, m, H-2), 2.98 (2H, m, H-5), 2.34 (1H, ddd,J=13.3, 8.2, 4.0 Hz, H-3a), 2.18 (1H, ddd,J=13.3, 7.7 Hz, H-3b)；13C-NMR (175 MHz, CD3OD)δ: 179.1 (C-1), 137.6 (C-6), 130.7 (C-7, 11), 129.6 (C-8, 10), 127.9 (C-9), 79.8 (C-4), 68.0 (C-2), 41.9 (C-5), 36.3 (C-3)。与文献[35]报道基本一致，故鉴定为trans-harzialactone A。

化合物25：无色固体，ESI-MSm/z：183.1[M+H]+。1H-NMR (700 MHz, DMSO-d6)δ: 4.40 (2H, d,J=5.6 Hz, 3-OH, 4-OH), 4.32 (2H, t,J=5.7 Hz, 1-OH, 6-OH), 4.13 (2H, d,J=7.2 Hz, 2-OH, 5-OH), 3.37～3.62 (8H, m, H-1, 2, 3, 4, 5, 6)；13C-NMR (175 MHz, DMSO-d6)δ: 71.3 (C-2, 5), 69.7 (C-3, 4), 63.9 (C-1, 6)。与文献[37]报道基本一致，故鉴定为D-甘露醇。

4 结论

本实验从冬虫夏草内生菌F.solani中分离鉴定出25个化合物，主要为环二肽类，其中化合物1～17、19～24为首次从该真菌的次生代谢产物中发现。该类成分在抗肿瘤、抑菌、免疫调节、抗氧化、杀虫等方面均显示出较好的生物活性，可为冬虫夏草相关药物开发提供新思路。