不同产地加工方法对兹丘木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量的影响

焦坤　关颖　王洪强　吕小翠　向莉

【摘要】目的：考察6种不同产地加工方法对兹丘木瓜药材中齐墩果酸和熊果酸含量的影响。方法：采用晒干、烘干法处理加工木瓜药材，用高效液相色谱法，以Rigol-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱，以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为210 nm，柱温为18 ℃，测定趁鲜切制晒干、纵剖两半晒干、沸水煮后纵切两半晒干、趁鲜切制烘干、纵剖两半烘干、沸水煮后纵切两半烘干处理的木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量。结果：不同产地加工方法的样品中齐墩果酸和熊果酸的含量有显著差异，总含量分别为0.81%、0.45%、0.55%、1.33%、0.84%、1.07%。其中以趁鲜切制烘干的样品含量最高。结论：本研究为湖北兹丘木瓜药材的产地加工方法研究提供了试验依据。

【关键词】木瓜；产地加工；齐墩果酸；熊果酸；高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2023）12-0020-04

Effects of Different Original Processing Methods on the Contents of Oleanolic Acid and

Ursolic Acid in Chaenomeles from ZiqiuJIAO Kun GUAN Ying WANG Hongqiang LV Xiaocui XIANG Li

1.Fuyang Center for food and Drug Control， Fuyang  236500，China;

2.Changyang  agricultural and rural bureau， Yichang 443500，ChinaAbstract：Objective  To investigate effects of six different original processing methods such as  on the contents of oleanolic acid and ursolic acid in chaenomeles from Ziqiu. Methods High-performance liquid chromatography（HPLC） was performed on a Rigol-C18column （250 mm×4.6 mm，5 μm） was adopted to determinate the contents of oleanolic acid and ursolic acid in chaenomeles from Ziqiu with fresh-cut， cut in half， boiled and cut in half by sun drying and hot air，using the mixture of methanol-water-acetic acid-Thehylamine （89∶11∶0.5∶0.1）as a mobile. The wavelength for detection was s et at 210 nm，while the temperature of column at 18 ℃ and the flow rate of 1.0 mL/min.Results there had a significiant effect on contents of oleanolic acid and ursolic acid in chaenomeles from Ziqiu prepared by different original processing methods，the total contents  of oleanolic acid and ursolic acid were 0.81%，0.45%，0.55%、1.33%，0.84%，1.07%，respectively，while the fresh processing had the most higher contents in six different samples.Conclusion This study provides a basis for original processing methods of chaenomeles from Ziqiu.

Keywords：Chaenomeles；Oleanolic Acid ；Ursolic Acid；Original Processing Methods； HPLC

木瓜為蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosia （Sweet） Nakai的干燥近成熟果实［1］。木瓜具有舒筋活络、化湿和胃之作用，临床常用于湿痹、腰腿酸痛、筋脉拘挛以及脚气肿痛。木瓜主产于湖北、四川、安徽、湖南、云南、山东、重庆、浙江等地，其中以湖北兹丘木瓜产量为最大。因生长环境不同，各地所产的木瓜的品质及化学成分含量存在很大差异。木瓜的产地加工方法也直接影响着药材的品质和化学成分含量，现今各产地的木瓜主要加工方式有趁鲜切制晒干、纵剖两半晒干、沸水煮后纵切两半晒干［1］、趁鲜切制［2-3］烘干、纵剖两半烘干、沸水煮后纵切两半烘干。根据前期调研，目前木瓜产地加工无技术指南，存在一定的盲目性和随意性等问题。有的产区用药典方法，有的并未采用药典方法来加工木瓜药材，各个产区加工处理木瓜药材存在着很大的差异性，亟需一种规范化的产地加工方法来控制木瓜药材质量。

中药材产地加工是形成中药材质量的重要环节，产地加工关乎中药材质量的优劣。为了研究不同产地加工方法对木瓜药材质量的影响，更好地控制木瓜产地加工的质量，本研究总结了目前6种常见的木瓜产地加工方法（见表1）。以齐墩果酸和熊果酸为指标，考察6种不同产地加工方法对兹丘木瓜药材中齐墩果酸和熊果酸含量的影响，以期为兹丘木瓜产地规范化加工研究提供一定试验参考。

1仪器与试药

1.1儀器Thermo ULtiMate3000 高效液相色谱仪，DAD3000 检测器，变色龙7.2 软件工作站，梅特勒XPE205DR 电子天平（ 0.01 mg），E LMA-E100H 超声清洗仪。

1.2试药齐墩果酸对照品（批号111522-201310，含量91.1%），熊果酸对照品（批号：111523-201208，含量93.5%）均购自中国食品药品检定研究院，甲醇为色谱纯（国药集团），水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。

试验用木瓜样品均采自湖北省长阳县同一木瓜植株（15年树龄），经本中心许世辉主任中药师鉴定为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeless speciosa （Sweet） Nakai 的近成熟果实。

2方法与结果

2.1样品的加工处理根据前期产区调研及文献报道，对采集的木瓜通过以下6种方式进行产地初加工，样品编号及处理方法见表1。

2.2齐墩果酸和熊果酸含量的测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Rigol-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）;流速：1.0 mL/min； 柱温：18 ℃；检测波长：210 nm；在此色谱条件下，样品中齐墩果酸和熊果酸的分离度大于1.5。理论板数按齐墩果酸峰计算应不低于4000。结果如图1所示。A.对照品；B.供试品;1.齐墩果酸;2.熊果酸

2.2.2对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品及熊果酸对照品，分别精密称定18.25 mg和20.15 mg至100 mL量瓶中，加甲醇制成对照品溶液，作为储备液。

2.2.3供试品溶液的制备取本品细粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 HZ）20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4线性关系取齐墩果酸和熊果酸对照品储备液各1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、10 mL分别至10 mL量瓶中，制成每1 mL含齐墩果酸16.598 μg、33.195 μg、49.793 μg、66.391 μg、82.989 μg、165.977 μg的溶液和每1 mL含熊果酸18.901 μg、37.801 μg、56.702 μg、75.603 μg、94.504 μg、189.007 μg的溶液。各进样2次，每次10 μL，测其峰面积，以峰面积平均值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得齐墩果酸回归方程：Y=80.111X-0.0019，R2=0.9995。结果表明齐墩果酸进样量在0.16598～1.65977 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。得熊果酸回归方程：Y=68.844X+0.0468，R2=0.9995。结果表明熊果酸进样量在0.18901～1.89007 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5精密度试验吸取齐墩果酸对照品和熊果酸对照品混合溶液10 μL，按2.2.1色谱条件连续进样6次，结果齐墩果酸峰面积RSD为0.71%（n=6）；结果熊果酸面积RSD为0.70%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.2.6重复性试验取编号1样品6份，分别按供试品溶液制备方法处理，同法测定，样品中齐墩果酸含量的RSD为2.23%；样品中熊果酸含量的RSD为2.60%。表明方法的重复性良好。

2.2.7稳定性试验精密吸取2.2.3项下的同一供试品溶液，按照2.2.1项下的色谱条件，分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进行分析，结果齐墩果酸峰和熊果酸的峰面积的RSD分别为2.51%和2.42%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.8加样回收率试验取已知含量的编号1的样品6份，每份取约0.25 g精密称定，分别按1∶1质量水平加入齐墩果酸、熊果酸对照品，按2.2.3项下方法制备并进行测定，计算回收率，齐墩果酸平均回收率为98.15%，RSD为2.0%（n=6），熊果酸平均回收率为96.02%，RSD为1.9%（n=6）。结果表明，本法具有较好的回收率。结果见表2。

2.2.9样品测定每个序号的样品取三份，按2.2.3项下方法制备并进行测定，取平均值，样品以干燥品计算，结果见表3 。

3讨论

目前的木瓜质控研究，多以有机酸［4-7］为主，2020版《中国药典》一部木瓜项下，以齐墩果酸和熊果酸为定量指标来控制木瓜的质量。药理学研究［8］表明，齐墩果酸具有护肝、抗癌、抗突变、抗胃溃疡、抗过氧化和抗血小板聚集等作用；熊果酸具有镇静、抗炎、抗菌、降血糖、抗氧化等作用［9］。本研究以熊果酸和齐墩果酸为考察指标，对兹丘木瓜的6种不同产地加工方法进行了考察，结果显示，6种不同产地加工法制备的样品中齐墩果酸和熊果酸的含量有显著差异，总含量分别为0.81%、0.45%、0.55%、1.33%、0.84%、1.07%。以趁鲜切制处理的样品（烘干）中齐墩果酸和熊果酸含量之和最高，纵剖两半直接晒干的样品含量之和最低。鲜切饮片［10-13］克服了传统加工方法的不足，更好地保存了齐墩果酸、熊果酸等药用成分［2］，有利于保证药材质量。其中沸水中煮后纵剖两半晒干的样品（药典加工方法）含量也显著高于纵剖两半直接晒干的样品，与前期学者［14］研究得出的结论较为一致。在湿热环境下，木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量的提高［15-16］是否与高温让活性酶失活或促进其它成分转化为齐墩果酸、熊果酸有关，还有待进一步研究。

产地加工是药材品质形成的重要环节，其中干燥过程尤为关键［17］。同一操作步骤处理的样品，干燥方式不同，所得的含量也不同。以木瓜鲜切处理为例，烘干所得的样品含量为1.33%，晒干所得的样品含量仅为0.81%，差异较为明显。从试验结果来看，自然条件下处理的样品，受外界影响因素较多，对有效成分可能有一定的影响。在前期的研究过程中，笔者考查了不同烘干温度对兹丘木瓜质量的影响，发现60 ℃低温烘干效果较好。低温烘干则不受天气条件影响，可迅速干燥药材，避免药材有效成分受自然环境的影响。在有条件的产地，可选择烘干法，一方面可以提高生产效率，另一方面也能保障药材加工过程中的质量。参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2020 年版）一部 ［S］.北京：中国医药科技出版社，2020：62-63.

［2］黄鹤，严宜昌，万明，等.鲜切皱皮木瓜饮片中齐墩果酸和熊果酸含量测定［J］. 三峡大学学报（自然科学版），2011，33（4）：85-88.

［3］李平媛.木瓜产地加工炮制一体化及一测多评质量评价应用研究［D］.宜昌：三峡大学，2021：32-35.

［4］張勇，张玲，谢晓梅.一测多评法同时测定木瓜中种常见三萜酸［J］.中成药，2013，35（4）：770-773.

［5］齐红，郭庆梅，李圣波，等.HPLC 转换波长法测定木瓜中绿原酸、齐墩果酸和熊果酸含量［J］.山东中医杂志，2014，33（3）：227-229.

［6］陈莉，王盛，杨静，等.不同产区木瓜药材质量对比分析［J］.中国中医药信息杂志，2022，29（3）：99-103.

［7］单莉，陈莉，杨洁，等.不同产地木瓜中齐墩果酸与熊果酸含量分析［J］.安徽医药，2020，24（12）：2352-2354.

［8］李雅玲，冯威，陈航宇，等.中药熊果酸药理学的研究进展［J］.生物技术世界，2015，89（4）：125-127.

［9］熊斌，雷志勇，陈虹.中药熊果酸药理学的研究进展［J］.国外医学：药学分册，2004，31（3）：133-136.

［10］洪智慧，杜伟锋，李小宁，等.中药材产地趁鲜加工的可行性及相关建议［J］.中华中医药杂志，2021， 36（1）：80.

［11］王文凯，贾静，张正，等.薄荷趁鲜切制的可行性探讨［J］.中国实验方剂学杂志，2014，20（17）：40-42.

［12］刘勇，陈骏飞，徐娜，等.趁鲜切制加工对三七药材干燥速率和质量的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2019，44（7）：1381.

［13］刘勇，陈骏飞，徐娜，等.大黄产地趁鲜切制工艺优选及与传统加工的比较研究［J］.时珍国医国药，2020，31（6）：1368.

［14］王晓阁，龙泉江，周宇，等.不同产地加工法对宣木瓜药材中齐墩果酸和熊果酸含量的影响［J］.中国中医药信息杂志，2014，21（11）：75-78.

［15］毕月玲，李晶，陈学艳，等.HPLC-ELSD 测定山茱萸不同炮制品中齐墩果酸和熊果酸的含量［J］.吉林中医药，2010，30（4）：341-343.

［16］喻喜华，陈晓辉，戴荣华，等.UPLC 测定山茱萸生品与酒炙品中齐墩果酸与熊果酸的含量［J］.中国现代中药，2010，12（5）：26-28.

［17］赵志刚，郜疏锐，侯俊玲，等.不同产地加工方法对山东丹参药材质量的影响［J］.中国中药杂志，2014，39（8）：1396.

（收稿日期：2022-10-08编辑：刘斌）