PCSK9 基因多态性与急性心肌梗死的相关性分析

曲妍 刘园园 杨秀静 才奇博 关荣春 刘灿君

作者单位：161000 黑龙江齐齐哈尔，齐齐哈尔医学院附属第三医院检验科

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是造成冠心病患者死亡的关键原因之一，因AMI 死亡的冠心病患者在所有死亡人数中占比超过1/2，且有逐年上升趋势［1］。《急性心肌梗死诊断和治疗指南》［2］建议，按照临床实用原则，将AMI 分为ST 段抬高心肌梗死（ST-segment elevation myocardial infarction，STEMI）和非ST段抬高心肌梗死（non acute ST-segment elevation myocardial infarction，NSTEMI）两类，因二者堵塞血栓存在差异，因此治疗手段各不相同。上述指南同时强调，AMI 患者出现相关症状后，能否在短时间内恢复梗死相关动脉血流直接影响其近期和远期预后，因此，对AMI 患者进行早期有效预测具有极其重要的意义［3］。血脂代谢异常作为冠心病的风险因素之一，已得到不少研究报道证实［4］，这也导致近年来关于调控血脂基因的研究成为临床关注的热点。前蛋白转移酶枯草溶菌素9（preprotein transferase enzyme subtilin lysin 9，PCSK9）在血脂代谢调控中具有重要作用，且有研究表明，PCSK9 基因多态性与冠心病的发生有关，但其与AMI 的相关性尚未被彻底阐明［5］。本研究通过探讨PCSK9 基因多态性与AMI 的相关性，以期为AMI 的诊治提供指导依据，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1研究对象与分组 选择本院2021 年1 月—2022 年12 月收治的200 例AMI 患者作为研究对象，纳入研究组，其中合并基础疾病：高血压105 例，糖尿病87 例；疾病类型：STEMI 73 例，NSTEMI 127 例。另外选择同期200 名健康志愿者纳入对照组。

1.1.1纳入标准 ① 所有受检对象均与美国心脏病学会（American College of Cardiology，ACC）/美国心脏协会（American Heart Association，AHA）制定的AMI 相关诊断标准相符；② 年龄≥18 岁；③ 经冠状动脉（冠脉）造影确诊为AMI；④ 入组前无任何相关治疗史；⑤ 既往无冠脉支架置入术史。

1.1.2排除标准 ① 陈旧性心肌梗死；② 合并先天性心脏病或（和）心脏瓣膜病；③ 伴有重大感染、自身免疫性疾病或器质性病变；④ 精神异常；⑤ 无法完成本研究或检查。

1.1.3伦理学 本研究符合医学伦理学标准，并经本院伦理审批（审批号：2021-100），所有检测均获得过患者或家属知情同意。

1.2仪器与试剂 UniCel DxI 800 Access 全自动化学发光免疫分析仪购自美国贝克曼库尔特公司，DNA 提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；Veriti 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪、Thermo Biofuge Primo R 离心机均购自赛默飞世尔科技中国公司。

1.3研究方法

1.3.1PCSK9 基因rs11206510 位点基因型检测由大连宝生物公司完成PCSK9基因rs11206510位点引物的合成，其中上游引物为ACGTTGGATGTGCTT CCCCAAGGATATAGG，下游引物为ACGTTGGATGC TGTGTAGAGACAATGCAGG。分别采集所有受检对象晨起进食前静脉血3 mL，置于-80 ℃冰箱中保存备用。严格遵循试剂盒说明书完成外周血DNA 的提取，有关试剂盒选用北京天根生化科技有限公司产品。取3 μL DNA 模板配制30 μL 反应体系，并进行PCR 扩增。PCR 反应参数设置如下：95 ℃预变性5 min，95 ℃变性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，40 个循环。然后再实施时长10 min 的72 ℃延伸。扩增产物以限制性内切酶进行消化，分为TT、CT 以及CC 基因型。

1.3.2血脂指标水平检测 分别采集所有受试者晨起进食前静脉血3 mL，离心获取血清（离心半径为8 cm，以3 500 r/min 离心10 min）。使用全自动化学发光免疫分析仪检测三酰甘油（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）以及高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C），操作根据仪器说明书完成。

1.4观察指标 ① 比较研究组与对照组PCSK9 基因多态性；② 比较不同类型AMI 患者PCSK9 基因多态性；③ 分析携带PCSK9 不同基因型的AMI 患者血脂指标水平的差异。

1.5统计学方法 采用SPSS 22.0 软件分析数据。计量资料符合正态分布，表示方法为均数±标准差（±s），检验方法采用t检验；计数资料表示方法为例（%），检验方法采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1一般资料 研究组和对照组的性别、年龄、体质量指数（body mass index，BMI）比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），有可比性。见表1。

表1 对照组和研究组的一般资料比较

2.2两组PCSK9 基因多态性比较 研究组PCSK9基因TT 型的人数占比为82.50%，明显低于对照组（93.50%），而CT、CC 型的人数占比分别为13.50%、4.00%，均明显高于对照组（6.50%、0.00%），差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表2。

表2 研究组和对照组PCSK9 基因多态性比较

2.3不同疾病类型AMI 患者PCSK9 基因多态性比较 STEMI 组PCSK9 基因TT 型人数占比为64.38%，明显低于NSTEMI 组（92.91%），而CT、CC 型人数占比分别为26.03%、9.59%，明显高于NSTEMI 组（6.30%、0.79%），差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表3。

表3 不同疾病类型AMI 患者PCSK9 基因多态性比较

2.4PCSK9 不同基因型AMI 患者血脂指标水平比较 PCSK9 基因型为CT+CC 患者的TG、TC 以及LDL-C 水平均明显高于TT 基因型患者，而HDL-C 水平明显低于TT 基因型患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表4。

表4 PCSK9 不同基因型AMI 患者血脂指标水平比较（x±s）

3 讨论

AMI 主要是指由于冠脉急性或持续性缺血性缺氧引起的一类心肌坏死，患者临床症状以持续性胸痛为主，且在休息或（和）服用硝酸酯类药物治疗后均无法彻底缓解［6-8］。AMI 患者若未接受及时有效的干预，随着病情的恶化可能引发心律失常等严重并发症，进而危及患者生命安全［9-10］。因此，如何有效防治AMI 具有极其重要的意义，更是目前广大医务工作者研究的热点。不少研究报道均证实，在导致AMI 的诸多危险因素之中，血脂代谢异常是引起AMI 发病率以及病死率增加的关键因素［11-12］。PCSK9 属于独特的前蛋白转化酶之一，是枯草蛋白酶亚家族的重要成员之一，可介导低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor，LDL-R）的降解，继而促进LDL-C 含量的增加，该基因一旦出现序列变异，可能对血浆胆固醇水平造成极大影响［13-14］，因此具有较高的临床研究价值。

本研究结果显示，研究组PCSK9 基因TT 型人数占比为82.50%，相较于对照组的93.50%更低，而CT、CC 型人数占比分别为13.50%、4.00%，相较于对照组的6.50%、0.00%更高，与徐金等［15］研究结果一致，提示PCSK9 基因多态性与AMI 有关。分析原因，LDL-C 属于动脉粥样硬化及AMI 的关键致病风险因素，其中PSK9 基因的功能获得性突变以及功能丧失性突变均与LDL-C 水平密切相关，因此该基因间接参与AMI 的发生发展。然而，杨春等［16］的一项研究报道表明，PCSK9 基因多态性与AMI 无明显相关性，这与本研究结果存在明显差异，而导致上述差异发生的原因可能与纳入研究对象的地域不同、年龄跨度不一以及样本量大小差异有关，应予以重点关注。此外，STEMI 组患者PCSK9 基因TT型人数占比为64.38%，相较于NSTEMI 组的92.91%更低，而CT、CC 型人数占比分别为26.03%、9.59%，相较于NSTEMI 组的6.30%、0.79%更高。这反映了不同类型AMI 患者存在明显的PCSK9 基因多态性差异，其中STEMI 患者多见CT、CC 基因型。分析原因，CT、CC 基因型可有效结合CD36，进而调控多种通路，刺激血栓素A2 的异常激活，进而促进血小板活化，增加了心肌梗死后的梗死灶面积，冠脉狭窄程度更严重，患者心肌缺血程度较重［17-18］。另外，PCSK9 基因型为CT+CC 患者的TG、TC 及LDL-C 水平较TT 基因型患者更高，而HDL-C 水平较TT 基因型患者更低。这证实了PCSK9 基因与AMI 患者的血脂代谢功能密切相关，且CT+CC基因型患者的血脂代谢异常程度更高。究其原因，PCSK9 基因的错义突变可能引发常染色体显性高胆固醇血症，其表达的神经细胞凋亡调节转化酶（neural apoptosis-regulated convertase-1，NARC-1）可引起细胞表面LDL-R 降解，PCSK9 基因突变会导致其正常表达功能受损，进而使得细胞LDL-R 增多，最终引起血脂水平异常。另有研究报道表明，PCSK9基因的rs11206510 位点是影响LDL-C 水平的独立因素之一，这为本研究结果提供了一定佐证［19-21］。

综上所述，PCSK9 基因多态性与AMI 发生密切相关，其中AMI 患者PCSK9 基因多见CT+CC 型，且该类基因型患者的血脂代谢异常程度尤为严重，值得临床重点关注。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突