肝癌病人血清中长链非编码RNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平及其临床诊断价值分析

罗兴红 杨柳 董琪 田爱霞 龙丹

有研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)在细胞增殖、侵袭和迁移等各种生物过程中发挥着关键作用,与癌症的发生发展有关[1]。E2F1激活的lncRNA BSN-AS2通过靶向miR-654-3p/SYTL2轴促进脊柱骨肉瘤的进展[2]。miR-4782-3p通过去泛素化酶泛素特异性肽酶抑制非小细胞肺癌的生长[3]。本研究检测肝癌病人血清中lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。

对象与方法

一、对象

二、方法

1.资料收集:收集病人年龄、性别、肿瘤直径、TNM分期、是否肝硬化、浸润深度、分化程度等资料。

2.qRT-PCR检测血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平:按照Trizol试剂操作步骤分离提取血清总RNA,并测定其浓度和纯度,按逆转录试剂盒操作步骤逆转录合成cDNA,采用ABI 7500型PCR仪检测血清中lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p相对表达水平,内参分别为GAPDH和U6,引物设计后由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表1。为减小实验误差,各样品重复3次,使用2-△△Ct方法(Ct为循环阈值)计算目的基因lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p的相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

三、统计学方法

结果

1.两组血清中lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达的比较见表2。结果显示,研究组血清lncRNA BSN-AS2的表达水平高于对照组,血清hsa-miR-4782-3p的表达水平低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 两组血清中lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达的比较

3.病人血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p水平的相关性分析见表4。经Spearman等级相关分析显示,肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p表达呈负相关(r=-0.536,P<0.05)。

4.血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p水平对肝癌病人诊断价值:血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3单独及联合诊断肝癌的AUC分别是0.890、0.856和0.937,灵敏度分别为87.00%、93.00%和86.00%,特异度分别为78.89%、70.00%和92.22%;血清AFP单独检测肝癌的AUC分别是0.901,灵敏度分别为83.00%,特异度分别为86.67%;二者联合优于lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p各自单独预测(Z二者联合-lncRNA BSN-AS=2.481、P=0.013,Z二者联合-hsa-miR-4782-3P=3.503,P=0.001),二者联合预测特异度大于AFP单独预测肝癌,AUC值略大于AFP。见表5,图1。

图1 血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p水平诊断肝癌的ROC曲线

表5 血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p水平对肝癌病人诊断价值

讨论

研究发现,lncRNA虽然不编码蛋白,但是却具有复杂的生物学功能。有研究表明,lncRNA-SNHG14可以通过PTEN信号转导H3K27乙酰化激活PABPC1促进肝细胞癌进展[5]。lncRNA DLX6-AS1可以通过miR-513c/Cul4A/ANXA10轴促进肝细胞癌的进展[6]。本研究中肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2的表达水平高于对照组,lncRNA BSN-AS2的表达与肝癌病人的年龄、性别、肿瘤直径、肝硬化、ALT、AFP无关,与TNM分期和分化程度有关。

miRNA是真核生物中长度约18～25个核苷酸的内源性小非编码RNA,可降解靶基因或抑制靶基因翻译过程,参与细胞增殖、凋亡和组织分化[7]。miR-203是近年来新兴的参与肿瘤病理生理过程的生物标志物[8],可以参与调节炎症通路与角质形成细胞的增殖与分化过程,也可以作为抑癌因子或者致癌因子作用于目标基因,通过与不同靶点和信号通路相互作用来参与调控肿瘤细胞的生物活动过程[9]。有研究发现,miR-203a-5p在肝癌病人外周血中的水平低于对照组,影响SOCSI、SOCS3的甲基化状态参与调控肝癌的发生发展[10]。本研究中肝癌病人血清hsa-miR-4782-3p的表达水平低于对照组,提示在肝癌的发展过程中,hsa-miR-4782-3p可能发挥抑癌基因作用。将miR-203a-5p表达与肝癌病人临床病理特征进行分析发现,TNM分期和分化程度增加,血清hsa-miR-4782-3p的表达进一步降低,提示hsa-miR-4782-3p参与肝癌的发生发展。另外,本研究中肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p负相关,提示lncRNA BSN-AS2可能通过调控hsa-miR-4782-3p影响肝癌的发生。本研究结果显示,血清AFP单独检测肝癌的AUC分别是0.901,灵敏度分别为83.00%,特异度分别为86.67%,而血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3单独及联合诊断肝癌的AUC分别是0.890、0.856和0.937,灵敏度分别为87.00%、93.00%和86.00%,特异度分别为78.89%、70.00%和92.22%;二者联合优于lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p各自单独预测,且二者联合灵敏度和特异度均优于AFP单独检测,提示二者有作为肝癌诊断标志物的潜能。本研究仅初步探究了lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p作为诊断肝癌生物标志物的潜在效果,两者作为临床诊断指标还需验证,后续本研究将进一步扩大试验样本量,根据病人肿瘤直径或疾病进展探究lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p与临床常用诊断指标的关系以及与疾病进展的关系并评估不同预后病人血清水平。

综上所述,肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2表达水平显著升高,hsa-miR-4782-3水平显著降低,可作为诊断肝癌的潜在生物标志物。