鸟氨酸脱羧酶抗酶2 在结直肠癌中的表达及临床意义

朱 俊，曹 维

（1 如皋博爱医院消化内科，江苏 226500；2 南通大学附属医院消化内科）

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是目前全球发病率及死亡率较高的恶性肿瘤[1]，国内发病率呈逐年升高趋势[2]，约20%CRC 患者在发现时已有转移，预后较差[3]，早发现、早诊断、早治疗可显著提高患者生存率。已证实鸟氨酸脱羧酶抗酶（ornithine decarboxylase antizyme，OAZ）作为肿瘤抑制因子抑制肿瘤的发生及发展进程[4-5]，是肿瘤治疗的潜在靶点。OAZ通过多胺过度积累诱导的核糖体移码机制对多胺的生物合成起负调控作用，减缓肿瘤细胞的增殖和转化速度[6]。已知的OAZ 基因家族主要包括OAZ1、OAZ2、OAZ3 和机制不明的OAZ4。OAZ1 在体内外均可抑制鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase，ODC）活性[7]，对许多肿瘤具有抑制作用。OAZ2 与OAZ1 作用相似，但有研究表明其仅在体内抑制ODC 活性[8]。OAZ2 通过调节多胺代谢，在胃癌[9]、神经母细胞瘤[10]中起肿瘤抑制作用，在一定程度上可以增强甚至替代OAZ1 的肿瘤抑制作用[11]。本研究选取2018 年1月—2022 年12 月如皋博爱医院普外科经手术切除病理证实的80 例结直肠癌组织及其配对癌旁组织，采用实时定量逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测OAZ2 mRNA 表达，分析OAZ2 表达与结直肠癌临床和病理参数的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 手术切除的80 例结直肠癌组织及其配对癌旁组织，均经病理证实为腺癌，组织标本置液氮罐冻存待测。80 例患者中男性36 例，女性44例；年龄≤65 岁44 例，＞65 岁36 例；分化程度：高分化46 例，中低分化34 例；浸润深度：T1～T2 期57例，T3～T4 期23 例；淋巴结转移30 例。

1.2 OAZ2 mRNA 检测方法 采用TRIzol 试剂盒（Sigma-Aldrich，美国）从组织中提取总RNA，取每个样品2 μg RNA，使用FastStart Universal SYBR Green Master（Roche，美国）和LightCycler 480 PCR系统（Roche，美国）进行RT-qPCR。以cDNA 为模板，反应体系：10 μL PCR 混合物，0.5 μL 正向和反向引物，2μL cDNA 模板和反应所需的水，最终反应体积为20 μL。PCR 反应步骤：95 ℃变性30 s，然后94 ℃15 s，56 ℃30 s，72 ℃20 s，共45 个循环。引物采用Primer 5.0 软件设计，由Invitrogen（上海）公司合成，引物序列见表1。

表1 引物序列

1.3 统计学处理 应用SPSS 22.0 统计学软件进行数据处理分析。计数资料以频数和率表示，组间差异性比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OAZ2 mRNA 在结直肠癌中的表达 结直肠癌组织中OAZ2 mRNA 表达水平低于配对的癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图1。

图1 结直肠癌及其癌旁组织OAZ2 mRNA 表达

2.2 OAZ2 mRNA 表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系 按照80 例结直肠癌组织OAZ2 mRNA表达量中位数，分为高表达和低表达各40 例。结果显示，OAZ2 mRNA 表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移有关，中、低分化结直肠癌组织中OAZ2 mRNA表达低于高分化结直肠癌组织，有淋巴结转移结直肠癌组织中OAZ2 mRNA 表达低于无淋巴结转移结直肠癌组织，差异均有统计学意义（P＜0.05），OAZ2 mRNA 表达与患者性别、年龄、肿瘤浸润深度无关（P＞0.05）。见表2。

表2 OAZ2 mRNA 表达与结直肠癌患者临床病理参数关系 n（%）

3 讨论

多胺在DNA 复制、RNA 转录翻译、血管生成等过程中发挥重要作用。过量多胺堆积会造成细胞异型增生和恶性增殖，导致肿瘤的发生发展。ODC 是多胺生物合成过程中的限速酶，协助外源性鸟氨酸转化为机体生长代谢所需的多胺（腐胺、精胺和亚精胺），内源性ODC 抑制剂的失效造成ODC 水平异常升高，多胺过度累积，从而导致细胞恶性增殖[12]。ODC 作为促癌基因在乳腺癌、结直肠癌等许多癌症中高表达。

OAZ 是ODC 内源性抑制酶，通过抑制ODC 的活性而抑制多胺代谢，进而抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡，是重要的肿瘤抑制因子[13]。OAZ2 在胃癌和神经母细胞瘤中通过调节多胺代谢抑制肿瘤生长，也可通过抑制转录因子NFκB 影响细胞周期[14]。OAZ2 还可能修复因miR-34a 水平降低导致的结直肠癌患者化疗药物耐药性，推测OAZ2 在结直肠癌的发生发展中可能发挥重要作用。本文研究结果显示，结直肠癌组织中OAZ2 mRNA 表达水平低于配对的癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。中、低分化及淋巴结转移结直肠癌组织中OAZ2 mRNA 表达低于高分化、无淋巴结转移结直肠癌组织，差异均有统计学意义（P＜0.05）。提示OAZ2 可能参与结直肠癌的发生发展，有望作为潜在的肿瘤治疗新靶点。