文氏马齿苋汤对急性湿疹小鼠血清IgE、IL-2和IL-5的影响

邹瑾，景明夷，朱宝华，3，陈明岭✉

（1. 成都中医药大学附属医院，四川 成都 610000； 2. 成都中医药大学，四川 成都 610000；3. 中山市中医院，广东 中山 528400）

湿疹是一种具有渗出倾向的炎症性皮肤病，临床根据病程及皮损特点将其分为急性、亚急性、慢性湿疹［1-2］。急性湿疹在红斑的基础上见丘疹、丘疱疹，有明显的渗出，皮损境界不清楚，瘙痒剧烈，可以发生于任何年龄、任何季节。本病的发病机制尚不清楚，目前多认为与免疫功能异常、皮肤屏障功能障碍、菌群失调或内分泌变化等因素相关，其中以T 细胞介导免疫反应研究最多［3］。相关研究显示，近30 年来在工业国家中，儿童和成人的湿疹患病率分别上升15%～30%和2%～10%［4］。目前西医治疗以外用糖皮质激素制剂和口服抗组胺药物为主，但疗效短暂，具有停药后容易复发、长期使用不良反应较多等缺陷。湿疹，中医又称为湿疮，因禀赋不耐，风、湿、热阻于肌肤所致［5］。中医药治疗湿疹有独特的优势，大量的临床研究证明中医药治疗湿疹安全有效。本研究所使用的文氏马齿苋汤是由简化消风散合马齿苋汤化裁而来，为四川文氏皮科流派传承人艾儒棣教授及陈明岭教授根据多年的临床经验总结的经验方。既往的临床试验证明该方治疗湿疹的疗效明确，复发率较低，且无明显不良反应［6-9］，但未曾在动物试验中开展相关研究，故本实验通过建立急性湿疹动物模型，初步探讨文氏马齿苋汤对急性湿疹小鼠免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）、白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白 细 胞 介 素-5（interleukin-5，IL-5）的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康Balb/c 雄性小鼠36 只，8 周龄，体质量（20 ±2）g，由四川省成都市达硕实验动物有限公司提供，生产许可证号：SCXK（川）2015-03，于成都医学院SPF级实验动物房饲养。动物房内每日保持明/暗周期12/12 h（光照时间为7：00—19：00），每个Optimice 100 EVC笼具内饲养6只动物，笼具内隔音、通风、温度控制在20～26 ℃、相对湿度40%～70%。常规饲养，自由摄食，在同一环境中适应性喂养1周后开始实验。所有动物均使用成都医学院实验动物中心提供的饲料和灭菌水喂养。本研究已获得成都中医药大学附属医院动物实验伦理委员会审批，伦理审批号：2022DL-013。

1.2 主要试剂

2，4-二硝基氯苯（DNCB，成都科龙化工有限公司，批号：2022042203）；丙酮（成都科龙化工有限公司，批号：20220116）；橄榄油（成都科龙化工有限公司，批号：20220316）；小鼠IgE、IL-2、IL-5检测试剂盒（江苏晶美生物科技有限公司，批号分别为JM-02339M2、JM-02981M2、JM-02447M2）。

1.3 主要仪器

卧式冷冻箱（合肥美菱股份有限公司，型号：BCD-318AT）；电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：ME203E/02）；台式高速冷冻离心机（龙医疗设备有限公司，型号：D3024R）；电热鼓风干燥箱（天津莱玻特瑞仪器有限公司，型号：GEL-70）；涡旋混合器（大龙医疗设备有限公司，型号：MXE）；酶标检测仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司，型号：RT-6100）。

1.4 药品

文氏马齿苋汤组方：马齿苋20 g，黄芩10 g，金银花15 g，连翘15 g，生地黄20 g，川射干15 g，龙骨20 g，紫荆皮15 g，石膏20 g，知母10 g，地肤子30 g，煅磁石30 g，山药30 g，生甘草6 g。由成都中医药大学附属医院中药房制备（其中高剂量组为105.298 g/kg，中剂量组为52.649 g/kg，低剂量组为26.325 g/kg）。龙胆泻肝丸（北京同仁堂制药有限公司，国药准字Z11020653），小鼠服用剂量为2.466 g/kg。

1.5 动物分组

适应性饲养1 周后，依据体质量按照区间分组法随机分为空白组、模型组、龙胆泻肝丸组和文氏马齿苋汤高、中、低剂量组，每组6只。

1.6 模型制备

参照文献［10-11］制备方法，采用2，4-二硝基氯苯（DNCB）的方法造模，造模前1 d于小鼠背部选1.5 cm ×2 cm 大小区域用剃毛刀去毛。第1 天和第2 天，以7%DNCB（0.7 g DNCB 溶于10 mL 丙酮-橄榄油溶剂，丙酮∶橄榄油 = 4∶1）100 μL 外涂小鼠去毛背部致敏；第7、9、11天，除空白组外，用移液枪在其余组小鼠右耳双侧外涂1% DNCB（0.1 g DNCB 溶于10 mL 丙酮-橄榄油溶剂，丙酮∶橄榄油 = 4∶1）20 μL激发，同时左耳外涂丙酮-橄榄油溶剂作为对照。

1.7 动物给药

造模成功后，龙胆泻肝丸组予以龙胆泻肝丸灌胃，文氏马齿苋汤高、中、低剂量组予以高、中、低剂量文氏马齿苋汤灌胃，每次灌胃0.2 mL，空白组和模型组予以等量生理盐水灌胃，1次/d，连续7 d。

1.8 检测指标

治疗结束后，小鼠眼眶采血，3 000 r/min，离心15 min，采集血清，于-20 ℃中保存，采用ELISA 法检测血清中IgE、IL-2、IL-5水平。

1.9 统计学方法

运用SPSS 26.0 软件进行统计学分析，各组数据以均数 ± 标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析。P＜ 0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 局部皮损表现

与空白组比较，造模后小鼠背部可见红肿、渗出、脱屑、结痂等皮损改变。7 d 治疗结束后，龙胆泻肝丸组小鼠背部可见焦黄色厚痂皮，皮肤红斑、水肿、渗出减少；文氏马齿苋汤高剂量组小鼠大部分痂皮脱落，局部皮肤仍可见少量痂壳、红斑、脱屑；文氏马齿苋汤中剂量组小鼠痂皮完全脱落，大部分皮肤已修复，肉眼可见少量红斑；文氏马齿苋汤低剂量组小鼠背部可见黄色厚薄不一的痂皮，上覆少量鳞屑，红斑、水肿、渗出减少。见图1。

图1 不同组别小鼠局部皮损变化

2.2 各组血清IgE、IL-2、IL-5水平比较

与空白组比较，模型组IgE、IL-2、IL-5 水平显著升高（P＜ 0.01）。经药物干预后，各药物组IgE、IL-2、IL-5 水平出现不同程度降低。与模型组比较，龙胆泻肝丸组及文氏马齿苋汤高、中剂量组IgE、IL-2、IL-5 水平显著降低（P＜ 0.01），文氏马齿苋汤低剂量组IgE、IL-2 水平显著降低（P＜ 0.01；P＜0.05）；与龙胆泻肝丸组比较，文氏马齿苋汤中剂量组IgE 显著降低（P＜ 0.05），文氏马齿苋汤高剂量组IL-2 水平显著降低（P＜ 0.05），文氏马齿苋汤中、低剂量组IL-5 水平显著降低（P＜ 0.01，P＜ 0.05）。具体见表1。

表1 各组小鼠血清IgE、IL-2、IL-5水平比较（±s）

表1 各组小鼠血清IgE、IL-2、IL-5水平比较（±s）

注：与空白组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；与模型组比较，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01；与龙胆泻肝丸组比较，△P ＜ 0.05，△△P ＜ 0.01。

组别空白组模型组龙胆泻肝丸组文氏马齿苋汤高剂量组文氏马齿苋汤中剂量组文氏马齿苋汤低剂量组IL-5/（pg/mL）10.57 ± 2.07##△△21.69 ± 1.86**△△17.30 ± 1.88**##15.01 ± 2.64**##13.35 ± 2.66*##△△20.24 ± 1.17**△n 6 6 6 6 6 6 IgE/（pg/mL）4.57 ± 0.75##△△9.27 ± 1.33**△△7.33 ± 1.20**##7.12 ± 1.48**##5.81 ± 0.91##△7.22 ± 1.13**##IL-2/（pg/mL）98.20 ± 16.87##△△230.03 ± 29.02**△△188.39 ± 29.29**##154.11 ± 27.91**##△159.28 ± 33.54**##194.56 ± 13.19**#

3 讨论

文氏马齿苋汤是由四川文氏皮科流派代表人物艾儒棣教授及陈明岭教授经验方——简化消风散合马齿苋汤化裁而来，两方合用，针对急性湿疮的病因病机，效果更佳。方中马齿苋清热解毒、散血消肿，黄芩清热燥湿，两者共为君药；金银花和连翘配伍可疏散风热、清热解毒，生地黄清热凉血、养阴生津，知母和石膏配伍可清热泻火、生津润燥，加上射干共助君药清热之力；紫荆皮、地肤子祛风止痒，龙骨、磁石镇惊安神止痒，佐以山药，补益脾胃，以防用药过于寒凉伤胃，甘草为使药，全方共奏清热除湿、祛风止痒之效。现代药理学研究证明马齿苋具有抗炎、抑菌、抗肿瘤、抗氧化和增强免疫力的作用［12］；黄芩中含有黄芩苷、汗黄芩素等成分，通过强化机体的巨噬细胞功能，能够提高机体的免疫功能［13］；生地黄能帮助合成淋巴细胞DNA 和蛋白质，同时减轻毛细血管壁通透性，抑制血管内皮炎症，发挥抗过敏的作用［14］；地肤子提取物可以抑制速发型变态反应并且通过抑制白细胞总数、调节细胞因子和受体抗Ⅳ型超敏反应［15］；龙骨和磁石配伍，镇惊和催眠、止痒效果更佳。本研究发现给予急性湿疹小鼠文氏马齿苋汤后，其皮损大部分已修复，肉眼仅可见少量红斑、痂壳、鳞屑，其中文氏马齿苋汤高、中剂量组最为显著。

本研究通过建立急性湿疹小鼠模型，探讨文氏马齿苋汤对小鼠皮损及血清IgE、IL-2 和IL-5 的影响。结果发现与模型组比较，文氏马齿苋汤能不同程度降低血清IgE。与龙胆泻肝丸组比较，文氏马齿苋汤中剂量组IgE 表达更低，差异具有统计学意义。研究表明湿疹患者的血清中IgE 浓度高于正常人［16］，原因是湿疹患者皮肤屏障功能的下降使过敏原渗透到皮肤中，刺激表皮的朗格汉斯细胞，从而产生高亲和性的IgE抗体，吸附在细胞表面，引起免疫系统的高敏感性，细胞表面的IgE 抗体与抗原结合，最终引发I 型超敏反应，表现为皮肤瘙痒［17］。

湿疹的致病原因复杂，其发病机制可能与Ⅳ型变态反应有关，相关的T淋巴细胞产生一系列淋巴因子，各种炎症细胞活化因子共同引起血管扩张，血管壁通透性增强从而形成皮肤湿疹样改变［18］。所以本研究亦选择IL-2 和IL-5 作为检测的指标。IL-2 是由Th1细胞活化所产生的免疫调节因子，对于免疫细胞增殖和机体免疫功能调节有着重要的作用［19］，能促进白介素-2 受体（IL-2R）的表达，并且刺激TNF-α、IFNγ 等其他细胞因子的分泌，引起组织形成以淋巴细胞（主要是T细胞）和单核吞噬细胞系浸润为主的渗出性炎症，同时在各种炎症细胞和活性因子的作用下，血管扩张，管壁通透性增加，最终导致皮肤湿疹样改变或加重湿疹皮损的炎症反应［20］。IL-5 是主要由Th2 细胞分泌的细胞因子，能够清除外来病原体，还可导致血清免疫球蛋白IgE 和嗜酸性粒细胞过度表达，加重Ⅰ型变态反应［21］。IL-5 能够与细胞因子特异性亚基受体IL-5Rα结合，后者主要在嗜酸性粒细胞上高表达，嗜酸性粒细胞在两者的共同作用下分化形成［22］。总之，IL-5 在嗜酸性粒细胞的诱导和增殖中发挥重要作用，能够促进炎症组织和血液中嗜酸性细胞增多，加重炎症反应。本研究结果显示模型组小鼠血清IL-2、IL-5表达水平明显升高，经药物干预后，与龙胆泻肝丸组比较，文氏马齿苋汤高剂量治疗组IL-2水平明显降低，文氏马齿苋中、低剂量组IL-5表达水平显著降低。说明不同剂量的文氏马齿苋汤对降低IL-2、IL-5的水平不一，对血清中炎症细胞因子IL-2、IL-5有较明显的抑制作用，提示文氏马齿苋汤能够调节小鼠免疫反应，抑制改善皮损水肿、红斑和渗出状态。

4 结论

综上所述，文氏马齿苋汤降低急性湿疹小鼠血清IgE、IL-2、IL-5 表达水平，具有免疫调节和抗炎作用，从而改善急性湿疹皮损状况。