安庆市市区健康体检人群幽门螺杆菌感染情况调查

胡晓东 李小月 王万俊 朱芳来 喻朝霞 査 勇 吴珍珍

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种只有一条环状染色体的多鞭毛、单极、螺旋形弯曲、末端钝圆的原核杆菌，有1～2 个微小弯曲，菌体长2～4 μm，宽0.5～1.0 μm。Hp是革兰氏阴性菌，不分解糖类，菌落富含尿素酶，可分解尿素释放氨，是鉴定该菌的主要依据。在培养基中，细菌常生长为S形或呈海鸥型。培养Hp所需条件较高，需要5%～10%的二氧化碳和5%的氧气，同时需要动物血清及37 ℃的培养环境[1]。在Hp直接的细胞毒性作用中，存在一种导致Hp感染位置产生炎性反应的重要效应蛋白，该蛋白具有遗传基因多态性和地区分布的差异，同时与消化道溃疡、胃炎、胃癌及一些非胃肠道疾病的发生发展密切相关，并影响胃损害的严重程度及临床结局。其致病机制主要与影响多条细胞信息传递通路有关[2]。Hp感染导致不同的临床结局，这是由Hp不同的毒力菌株、宿主遗传背景及环境因素共同作用的结果[3]。鉴于以上背景，Hp在感染率、感染类型以及最终致病结果上存在一定的地域性差异。本文通过对安徽医科大学附属安庆第一人民医院参与健康体检的10008 例健康体检者，采用ELISA法、免疫印迹法、化学发光免疫分析技术进行血清学检测，以探究安徽省安庆市市区Hp的感染率情况及相关细胞因子水平，并初步探讨其免疫学机制。

1 资料与方法

1.1 研究对象 回顾性分析2019年4月-2021年8月在安徽医科大学附属安庆第一人民医院参与健康体检者10008 例，所有人均已签署知情同意书并知晓相关内容。

1.2 仪器与试剂 幽门螺杆菌抗体分型相关实验采用伯劳特（深圳）公司生产的幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒，并搭配其对应的免疫印迹仪使用；血清胃蛋白酶原采用苏州长光华医生物医学工程公司提供的胃蛋白酶原试剂盒及其配套的全自动化学发光免疫分析仪检测；胃泌素G-17 采用北京正旦国际科技有限责任公司提供的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测，其余细胞因子水平检测采用美国BD公司生产的ELISA试剂盒，并搭配美国BioTech公司酶标仪检测。

1.3 实验步骤 ①所有体检者分批采血、分批检验，清晨6：00-8：00 在检验科窗口采集空腹静脉外周血5 mL，4000 转/min离心15 min，收集血清并做好标记。幽门螺杆菌分型实验按照伯劳特（深圳）公司所售试剂盒说明书要求操作，结果判读时：出现质控带，且空泡毒素（CagA）、穿孔蛋白（VacA）区带出现一种或二者同时出现，则为HpⅠ型感染；出现质控带，尿素酶A（UreA）和尿素酶B（UreB）区带出现一种或二者同时出现，且未见CagA，VacA带，则为Hp Ⅱ型感染；仅出现质控带则为阴性结果。②测定胃蛋白酶原PG I和胃蛋白酶原PG Ⅱ时，样品与特异性单克隆抗体反应后形成抗体-抗原-抗体夹心复合物。复合物形成固相后，反应溶液中的磁性颗粒被磁场吸附，未结合的化合物被清除。加入底物溶液，然后检测化学发光光子的强度。光强度与血清样品中胃蛋白酶原的浓度成正比。样品中分析物的量由多点校准曲线确定。③G-17与其它细胞因子水平检测实验按照各自ELISA试剂盒说明书要求操作，加入终止液后即刻使用酶标仪，检测出OD值并换算出具体浓度。

1.4 统计学方法 本研究使用SPSS 20.0 统计学软件对数据进行处理。计数资料以百分比（n%）形式表示；计量资料则以均值±标准差（±s）的形式表示，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 安庆市区健康体检人群近年来幽门螺杆菌感染情况分析 安庆市健康体检人群中，阴性率为41.16%（4119/10008）、Hp总体感染率为58.84%（5889/10008），其中HpⅠ型感染率33.99%（3402/10008）高于HpⅡ型的24.85%（2487/10008）。

2.2 不同性别组体检人群的，HpⅠ型感染与HpⅡ型感染情况分析 女性HpⅠ型、HpⅡ型和总感染率分别为14.86%、11.33%和26.19%。同时，男性HpⅠ型、HpⅡ型感染率和总感染率分别为19.13%、13.52%和32.65%。男性HpⅠ型、HpⅡ型感染率和总感染率均高于女性，但差异均无统计学意义，见表1。

表1 安庆市市区健康体检人群不同性别Hp感染率分析 例(%)

2.3 不同年龄组体验人群的HpⅠ型感染与HpⅡ型感染情况分析 根据年龄可分为七组，各年龄组间Hp抗体阳性率差异具有统计学意义（χ2=529.652、1751.295、70.807，均P＜0.01），见表2。

表2 安庆市市区健康体检人群不同年龄Hp感染率 例(%)

2.4 不同感染类型组体验人群的各种细胞因子水平情况分析 本市健康体检人群中，相对于没有感染Hp的体检者，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ与TNF-α在感染者体内均有所升高，且差异具有统计学意义，两种免疫应答类型均发挥着重要作用，缺一不可。而在HpⅠ型感染者与HpⅡ型感染者之间，除IL-8 外，上述细胞因子水平则没有显著差异。胃泌素-17（G-17）仅在HpⅡ型感染着体内显著升高，PGI与PGⅡ在两种感染者体内均有显著升高，但二者的比值在感染前后差异无统计学意义，见表3。

表3 安庆市区健康体检人群不同Hp感染类型分组后各细胞因子水平分析（±s）

表3 安庆市区健康体检人群不同Hp感染类型分组后各细胞因子水平分析（±s）

注：★：P＜0.05；★★：P＜0.01；★★★：P＜0.001，与幽门螺杆菌阴性组相比

感染类型IL-1β(ng/L) IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)IL-10(ng/L) IFN-γ(ng/L)TNF-α(ug/L)G-17(pmol/L) PGI(ng/mL) PGⅡ(ng/mL) PGRⅠ型 9.18±3.46★★★13.74±8.88★★116.27±14.14★★★61.45±21.11★★★24.95±15.87★16.31±9.99★ 4.30±3.67 118.14±35.36★★★14.69±8.67★★★14.79±23.80Ⅱ型 9.68±1.98★★★13.50±6.79★★93.55±13.62★★44.79±18.19★★★26.94±9.40★★16.04±12.45★6.68±16.51★★ 81.87±32.07 9.21±5.26 10.04±3.62阴性3.15±1.80 1.77±1.23 61.40±24.954.75±3.848.57±6.28 4.35±3.39 0.650±0.43 85.30±25.21 6.99±2.46 12.68±2.77

3 讨 论

幽门螺杆菌作为一种对外界生长环境十分苛刻的螺旋形、兼性厌氧型原核细菌，是唯一一种能在胃酸环境中生存的微生物。Hp存在两种重要的毒力因子，即细胞空泡毒素（VacA）和细胞毒素相关蛋白（CagA），VacA能使细胞产生空泡变性的蛋白，分子量为87 KD，此蛋白能通过改变离子通透性导致细胞空泡形成，进而损伤胃黏膜，造成糜烂或溃疡形成。CagA蛋白分子量为120～140 KD，其致病作用尚未完全明确，无致空泡变性的作用，但是CagA与VacA之间存在良好的相关性，可视为Hp的毒力标志。根据Hp可否表达VacA和CagA，将Hp分为Ⅰ和Ⅱ型两个亚型，Ⅰ型Hp菌株分泌含有VacA和或CagA，为高毒力菌株，与消化性溃疡和胃癌的发生关系密切；Ⅱ型Hp菌株不表达VacA和CagA，这类菌株毒性相对较小[4]。Hp主要通过消化道进入人体，即所谓“病从口入”。目前主流观点认为一旦感染Hp就应立刻、全部消灭，常规方法为服用胃酸抑制药物（PPI）、抗生素及铋制剂，但根除率并非100%[5]。因此，调查并了解人群Hp感染情况、研究致病机理就显得十分必要。

安庆市作为“全国文明城市”，生活节奏较慢，尤其是聚餐文化盛行更是给Hp在人群中的传播提供了便利条件。本研究的主要对象是在市区工作的成年人，合餐制聚餐较多，这使得可以通过“口-口”途径传播的Hp有机会在此类人群中传播。因此，在全国Hp感染率呈逐年下降趋势的背景下，安庆市区Hp感染率仍然与10 余年前的全国平均感染水平58%几乎保持一致[6]，这表示安庆市区人们生活水平的提升并未完全带动卫生习惯的改善，例如，在聚餐时公筷、公勺的使用仍然是一个容易被忽视的问题。需要提出的是，本次研究的对象几乎全是在市区工作的体检人群，而安庆地处皖西南，下辖县级区域较多，各县卫生习惯、生活水平与市区存在一定的差异，故本次研究未能反映整个“大安庆”地区的全面情况。另外，尚未成年的儿童由于几乎没有体检病例，也被排除在研究之外。但有研究显示Hp在儿童中反而有着更高的感染率[7]。有待后续研究完善上述不足之处。相对于碳呼气实验与快速尿酶实验，本次研究所采用的免疫印迹实验不仅阳性检出率高，且能对Hp感染进行分型[8]，从而可对后续治疗提供指导意见。

综上所述，安徽省安庆市区健康体检人群中Hp感染率随年龄增长而增加，60～69 岁感染率最高，70 岁后降低。60～69 岁Hp感染者G-17 和PG水平显着高于未感染人群。与HpⅡ型感染者相比，HpⅠ型感染者PG水平较高，但两者之间G-17 水平没有差异。加强易感人群健康教育，改善本地卫生条件，及时根除感染，对预防本地Hp感染具有关键作用。