基于网络药理学和实验验证研究柠檬精油缓解焦虑症的作用机制

张依萍,徐 旭,吕亿婷,黄金琴,王盛东,奚林芝,王丹丹,刘 畅

1浙江万里学院生物与环境学院,宁波 315100;2宁波大央科技有限公司,宁波 315020

焦虑症是一种以暂时性或持续性情绪紧张为主要临床症状,并伴有自主神经紊乱、运动障碍等症状的神经症,也是一种心情不愉快并且伴随身体不适的精神类疾病[1]。近些年,人们的生活、学习和工作压力不断增加,使得抑郁症和焦虑症患病率大幅度提升。据统计,全世界患有抑郁症的人数占3.01%～5.00%、患有焦虑症的人数占4.00%～6.50%[2]。目前,治疗抑郁和焦虑的药物主要是艾司西酞普兰、文拉法辛、苯二氮卓类等西药,但其副作用大、依赖性强、用药周期长,给患者身体带来了一定的伤害。

焦虑症治疗除了药物治疗和心理治疗外,芳香疗法被认为是一种有效的辅助治疗手段[3]。植物精油有一系列的药理特性,包括抗焦虑、抗抑郁、镇静安神、神经保护作用等药理活性,许多动物和人类研究都支持使用香气及其成分来减少焦虑相关症状行为[4]。佛手、甜橙、香紫苏、柠檬草和薰衣草等植物精油,通过嗅吸或按摩方法对焦虑症状改善有积极的效果且未出现任何不良反应[5]。薰衣草精油中富含的芳樟醇、玫瑰精油中富含的香叶醇均在舒缓焦虑方面有作用[6]。研究发现,从柠檬果皮中提取的柠檬精油可以改善情绪、认知、缓解疲劳,可防止考试焦虑期间的认知能力下降[7];嗅吸柠檬精油(lemon essential oil,LEO)可显著升高人体脑电波的β波[8]。Martial等[9]采用行为试验研究了柠檬精油蒸汽对小鼠的抗应激作用,发现吸入柠檬精油后的小鼠在高架迷宫和开放场地测试中都有抗焦虑作用。Özer等[10]研究了大鼠持续暴露于扩散的柠檬精油氛围的行为、激素和神经元反应,发现大鼠在抬高加迷宫张开臂中花费的时间减少、热伤害阈值提高、福尔马林诱导的疼痛行为降低,下丘脑和中脑导水管周围灰质中的皮质酮浓度降低,表明LEO会导致与焦虑和疼痛有关的神经元回路发生显著变化。但是LEO是多种成分的混合物,具有“多成分、多靶点”的特点,对其抗焦虑症的作用机制尚未得到很好的阐明。

网络药理学是将药物作用网络与生物网络相结合,基于“药物-靶点-通路-疾病”模型,分析药物与生物体之间的相互作用,系统地探讨药物与疾病之间的关系[11,12]。本研究基于网络药理学方法,对柠檬精油抗焦虑的关键成分、靶点和信号通路进行预测分析,并结合系列实验(抗氧化活性、细胞炎症和小鼠焦虑模型)对网络药理学筛选出的柠檬精油中的关键成分、作用靶标进行验证,为柠檬精油抗焦虑的临床应用提供理论与实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料与仪器

材料:新鲜柠檬购于宁波果品批发市场,经由浙江万里学院刘利萍教授鉴定确认;乙酸橙花酯(批号PPE8F-RN,东京化成工业株式会社,纯度≥98%)。

试剂:CCK-8试剂盒(批号23131244,Biosharp);活性氧荧光法测试盒(批号UX030F603865,Elabscience);TNF-αELISA试剂盒(批号GY01X64 D0991,Elabscience);IL-6ELISA试剂盒(批号GY012R225072,Elabscience);NO含量检测试剂盒(批号20220718,索莱宝);DPPH(批号GTBXB-QP,上海化成工业发展有限公司);ABTS(批号C14003395,麦克林);DMEM细胞培养液(批号2204025,Viva Cell);胎牛血清(批号2011B,BOVOGEN);小鼠多巴胺受体D1 ELISA试剂盒(批号CV04TR4B0207,武汉伊莱瑞特);小鼠AMPA离子能谷氨酸受体2酶联免疫试剂盒(批号E220ER059,武汉菲越生物);小鼠白细胞介-素6高敏ELISA试剂盒(批号70-EK206HS-96,联科生物);苏木精(批号SLBN3249V,SIGMA);伊红(批号62R80915X,SIGMA)。

细胞:HaCaT人永生化表皮细胞(批号339817,北纳创联生物技术有限公司)。

动物:25只ICR小鼠(SPF级),雌性,体质量18～22 g,购自上海斯莱克实验动物公司,动物合格证号SCXK(沪)2022-0004。饲养于杭州赫贝科技有限公司,实验动物住所许可编号SYXK(浙)2020-0013,在温度20～25 ℃、湿度40%～70%,12 h光暗周期,自由进食(江苏协合药业生物工程有限公司提供饲料)饮水。操作符合动物实验3R原则和动物实验伦理要求(经杭州赫贝科技有限公司动物实验中心审批,审批号为HB2301006)。

仪器:气相色谱-质谱联用仪(8890-5977B,安捷伦);紫外可见分光光度计(TU-1810,北京普析通用仪器公司);高速离心机(5417R,艾本德);雾化机(405E,鱼跃);病理组织漂烘仪(TEC 2500 型,常州市郝思琳仪器设备有限公司);轮转式切片机(RM2235 型,LEICA 公司);显微镜(BX43型,OLYMPUS);全波长酶标仪(SpectraMax Plus 384型,美国MD);恒温培养箱(PYX-DHS500BS-Ⅱ型,上海跃进医疗器械公司)。

1.2 柠檬精油活性成分及对应靶点筛选

采用水蒸气蒸馏法提取柠檬果皮精油,气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定柠檬精油的组成,以血脑屏障(blood brain barrier,BBB)>0.3为筛选条件,获得柠檬精油中的主要活性成分。利用中医药系统药理学平台(TCSMP)预测活性成分的作用靶点,并用Uniprot数据库对靶点蛋白进行规范化。利用Cytoscape构建“柠檬精油-成分-靶点”网络图。

1.3 焦虑症靶点的收集

以“anxiety”和“anxiety disorder”为关键词,检索OMIM、GeneCards数据库,从GeneCards数据库取3次中位数,收集大于中位数的靶点为焦虑症的潜在靶点。合并数据库靶点,删除重复值,得到焦虑症靶点。

1.4 柠檬精油-焦虑症的共同靶点获取及蛋白质互作网络构建

利用Venny软件和微生信网站中的可视化工具获取柠檬精油与焦虑症的共同靶点。将二者的共同靶点输入STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI),其中物种设为“Homo sapiens”,置信度≥0.15,隐藏网络中无联系的节点,利用Cytoscape软件可视化。以度值评估靶点的重要性,预测关键靶点。

1.5 靶点功能富集分析与网络构建

利用David数据库对共同靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,GO选择生物过程(biological process,BP)、细胞组分(cellular component,CC)和分子功能(molecular function,MF)3个模块。KEGG分析选择KEGG Pathway模块。采用Cytoscape软件,以排行前20条通路及其涉及的交集靶点,以及这些靶点映射的活性成分构建“柠檬精油-成分-靶点-通路-焦虑症”网络。

1.6 关键化合物及核心靶点的分子对接

在PubChem数据库下载关键化合物分子结构的SDF格式,通过Open babel将SDF格式转化为mol2格式;通过RCSB PDB数据库得到核心靶点的最佳蛋白结构的PDB格式。利用1-Click Docking对活性成分与关键靶点进行分子对接,并用Pymol软件对分子对接结果进行可视化。

1.7 清除自由基活性

在试管中加入4 mL DPPH或ABTS工作液与1 mL样品混匀,暗置反应30 min,以95%乙醇调零,在518 nm或734 nm处测吸光值(A值)。以定容样液溶剂代替样液作为空白组,以VC作阳性对照组。重复平行3次,按公式(1)计算自由基清除率(RC)。

RC=[(A1-A2)/A1]×100%

(1)

式中,A1为以样液溶剂代替样液测得的吸光度,A2为测定的样品的吸光度。

1.8 细胞活性

细胞活性:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度至1×104个/孔,过夜,加入100 μL浓度为0(正常组,Nor)、0.001、0.01、0.1、1、10、100 μg/mL的样品液,培养24 h后,每孔加入10 μL CCK-8溶液,继续孵育4 h,在450 nm测定吸光值(A值)。按公式(2)计算细胞相对生长率(RG)。

RG=[(A1-A2)/A1]×100%

(2)

式中,A1为正常生长的细胞的吸光度,A2为加入测定的样品的吸光度。

1.9 抗氧化及抗炎活性的测定

抗细胞氧化活性[13]:将对数生长期细胞按2×105个/孔接种到6孔培养板中。置培养箱中培养24 h。设置3个组:空白对照组(control,Con),只加2 mL培养基;模型组(model,Mod),加入2 mL含20 μg/mL LPS的培养基;样品组,为3个剂量(0.25、0.5、1 μg/mL)且LPS的终浓度为20 μg/mL。继续培养24 h后,收集上清液,离心去除残留细胞。加入无血清培养基按1∶1 000稀释DCFH-DA,37 °C孵育30 min。用无血清培养基洗涤细胞三次以去除DCFH-DA。用荧光酶标仪检测(激发波长500 nm、发射波长525 nm)各组荧光值,并与空白对照组对比。

抗炎活性:按上述收集的细胞上清液,根据ELISA试剂盒说明书分别测定NO、TNF-α及IL-6细胞因子水平。

1.10 小鼠水迷宫实验

小鼠分组与给药:小鼠适应性饲养7 d后,随机分组,每组5只,设立空白对照组(control,Con)、模型组(model,Mod)、奥沙西泮阳性组(Positive,Pos)(用生理盐水配成100 μg/mL药液,按照10 mL/kg灌胃给药)、精油组(LEO)(用纯净水配成5%精油雾化液,每天同一时间段给予小鼠持续吸入雾化精油30 min,持续3周)、乙酸橙花酯单体组(neryl acetate,NA)(浓度5%,同精油组)。

小鼠焦虑模型建立:对照组小鼠正常饲养不采取任何刺激,其余四组均采用慢性不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)方法造模刺激[18]。随机设置7种刺激,每天2种,每种刺激出现6次,分别是:冰水游泳(4 ℃,5 min)、热应激(45 ℃,5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、夹尾(1 min)、斜坡饲养、潮湿垫料(24 h),共计21 d。

水迷宫测试:21 d刺激后进行,(1)定位航行:共5 d,每天同一时间开始,测试四次。将小鼠头朝向池壁轻轻地放在水里,从进入水里到发现平台为逃避潜伏期,时限为2 min,2 min后发现平台,小鼠在平台上逗留15 s;如果2 min后小鼠没有发现该平台,那么将小鼠引到该平台上待30 s。(2)空间探索:第6 d,撤去隐藏在水面下的平台,选择与平台相对的象限中点作为入水点,记录小鼠在2 min内穿越平台的次数及在平台象限的总时间。

海马HE染色(hematoxylin-eosin staining)观测:小鼠麻醉后开颅取海马,海马用体积分数4%多聚甲醛固定24 h,经脱水、透明、石蜡包埋后切片,HE染色,光镜(×400)观察海马区状态。

纹状体中相关蛋白的ELISA测定:小鼠麻醉后开颅取纹状体(液氮冻存),称取样品适量,按照试剂盒说明书的步骤检测小鼠脑纹状体中DRD1、GRIA2及IL6含量。

1.11 数据处理

2 结果

2.1 柠檬精油化学成分

柠檬精油的成分归属及鉴定信息的总离子流图(见图1)。由GC-MS鉴定出柠檬精油有30种成分,相对百分含量>1%的化合物有26种,占总峰面积的94.94%,含量最高的组分是β-红没药烯,占比最高的成分为萜烯类化合物。柠檬精油以嗅吸方式给药,符合BBB筛选条件的成分有23种(见表1)。

表1 柠檬精油的有效成分

图1 柠檬精油的总离子流图

2.2 “柠檬精油-成分-靶点”网络图

22种成分均有对应的靶点共计76个(见图2)。该网络中总节点度值为249,平均节点度值为11.32,大于平均值的有11个,分别是香叶醇、柠檬烯、巴伦西亚橘烯、亚油酸、乙酸橙花酯、异松油烯、β-石竹烯、β-蒎烯、α-萜品醇、甲基丁香酚、4-萜品醇。这11个成分可能起到重要作用。

图2 “柠檬精油-成分-潜在靶点”网络图

2.3 “柠檬精油-焦虑症”的交集靶点及蛋白质互作网络图

从GeneCards和OMIM数据库中筛选焦虑症靶点,经除重和标准化,获得焦虑症靶点787个。将柠檬精油成分靶点和焦虑症疾病靶点作韦恩图,二者有23个共同靶点(见图3)。

图3 柠檬精油-焦虑症交集靶点的韦恩图

23个交集靶点的蛋白互作(见图4)。String分析显示平均节点度值为16.2,大于平均值的节点有12个,它们是:白蛋白(ALB)、多巴胺受体D1(DRD1)、5-羟色胺受体2A(HTR2A)、溶质载体家族6成员4(SLC6A4)、溶质载体家族6成员3(SLC6A3)、γ-氨基丁酸A型受体亚基alpha2(GABRA2)、白细胞介素6(IL6)、肌动蛋白β(ACTB)、单胺氧化酶A(MAOA)、5-羟色胺受体3A(HTR3A)、AMPA离子能谷氨酸受体2(GRIA2)、单胺氧化酶B(MAOB)。这12个蛋白可能为核心靶点。

图4 交集靶点的PPI拓扑图

2.4 GO富集分析

以P<0.05筛选得到BP 38项、CC 19项、MF 18项。选取-log10(P)值大小排序前12项得到GO条形图(见图5)。

图5 柠檬精油干预焦虑症的核心网络靶点的GO分析条形图

GO富集结果表明:生物过程(BP)中交集靶点主要涉及了给药反应、离子跨膜运输、多巴胺分解代谢过程、单胺运输等过程;细胞组分(CC)中关键靶点主要分布于质体膜、突触后膜、浆膜的整体组成部分、细胞交界处等部位;分子功能(MF)中关键靶点主要与细胞外配体门控离子通道活性、单胺跨膜转运器活性、药物结合、一氧化二氮合成酶结合等有关。

2.5 KEGG通路富集分析

以P<0.05为标准,共富集获得31条KEGG通路,其中前20条KEGG通路(见图6)。X轴为通路中关键基因数占比,Y轴为通路名称;气泡颜色即-log10(P)值,颜色越红,P值越小,富集程度越好;气泡大小表示参与通路的基因数的多少。

图6 柠檬精油干预焦虑症核心靶点的KEGG通路富集气泡图

20条通路中包括神经活性配体-受体相互作用、羟色胺能突触、尼古丁成瘾、多巴胺能突触、可卡因成瘾、安非他命成瘾等,所含交集靶点的数目相对较多,可能是柠檬精油抗焦虑症的关键通路。

2.6 “柠檬精油-成分-靶点-通路-焦虑症”拓扑网络

前20条KEGG通路中涉及交集靶点有18个,占交集靶点总数的78.26%。将这20条KEGG通路、18个交集靶点以及涉及的柠檬精油的19个活性成分进行联合分析,得到的网络(见图7)。

图7 “柠檬精油-活性成分-靶点-通路-疾病”网络

该网络中有57个节点,其中,柠檬烯、α-松油醇、甲基丁香酚、β-蒎烯、乙酸橙花酯、β-石竹烯、4-萜品醇的度值较大,表明是作用于焦虑症的重要活性成分。γ-氨基丁酸A型受体亚基(GABRA1、GABRA2、GABRA5)、单胺氧化酶(MAOB、MAOA)、溶质载体家族6(SLC6A3、SLC6A2)、多巴胺受体D1(DRD1)、AMPA离子型谷氨酸受体亚基2(GRIA2)、白细胞介素6(IL-6)等靶点的度值较大,可能是柠檬精油参与调控焦虑症的重要靶点。

2.7 分子对接

根据“2.6”项,选取柠檬烯、β-蒎稀、4-萜品醇、α-松油烯、乙酸橙花酯与DRD1、GRIA2、IL-6蛋白进行分子对接(见表2)。

表2 柠檬精油活性成分与关键靶点的最低结合能

一般认为分子对接结合能<-5.0 kcal/mol,表示配体与受体可以较好地自发结合。表2中的五个活性成分和DRD1的结合能均高于对照奥沙西泮,与GRIA2和IL6的结合能多数都低于-5 kcal/mol,但与对照奥沙西泮相比略差。总的来看,五个成分都能有效的与DRD1、GRIA2、IL-6受体结合。

以乙酸橙花酯为例,与靶蛋白DRD1、GRIA2与IL-6之间结合(见图8)。乙酸橙花酯与DRD1、IL6的结合模式以盐桥为主、疏水作用为辅;乙酸橙花酯与GRIA2的结合模式以疏水作用为主、氢键为辅。

图8 乙酸橙花酯与靶点对接可视化图

2.8 体外抗氧化活性

柠檬精油抗DPPH、ABTS自由基的效果强于乙酸橙花酯(见图9),且抗ABTS的效果优于抗DPPH,与同浓度的阳性对照VC相近。可见柠檬精油多成分之间有协同性。

图9 柠檬精油和乙酸橙花酯对DPPH和ABTS的清除率

2.9 浓度对细胞活性的影响

柠檬精油和乙酸橙花酯对HaCaT细胞的活性影响(见图10)。在0.001～1 μg/mL的浓度范围内,几乎不影响细胞的存活率,在一定程度上对细胞生长还有促进作用。当浓度≥10 μg/mL时,细胞的活力大大降低。因此,选择精油浓度≤1 μg/mL进行后续实验。

图10 柠檬精油和乙酸橙花酯浓度对HaCaT活力的影响

2.10 细胞内抗氧化活性和抗炎症的影响

精油对LPS刺激的HaCaT细胞中ROS的清除率(见图11a)。通过检测荧光强度发现,与正常组相比,模型组荧光强度明显增强(P<0.01),表示细胞炎症造模成功。与模型组比较,柠檬精油与乙酸橙花酯对ROS都有清除作用,呈剂量依赖性。说明柠檬精油及其关键单体乙酸橙花酯通过降低细胞内ROS水平缓解氧化应激带给细胞的炎症损伤。

图11 柠檬和乙酸橙酯对LPS刺激的HaCaT细胞的影响

通过对炎症因子的检测结果发现(见图11),模型组的NO、TNF-α及IL-6水平显著升高(P<0.01),给予柠檬精油与乙酸橙花酯干预后有不同程度的降低,呈剂量依赖性。上述结果初步证明了柠檬精油及其关键成分乙酸橙花酯对炎症相关因子和趋化因子的调节作用。

2.11 嗅吸柠檬精油对小鼠行为学的影响

与空白组比较,模型组小鼠在水中央区域活动范围、目标象限游泳时间以及穿越次数明显减少(P<0.01),说明采用CUMS刺激造焦虑模型成功(见图12)。柠檬精油组及乙酸橙花酯组与模型组比较,总体在水中央区域活动距离、目标象限游泳时间以及穿越次数都强于模型组,且柠檬精油组差异有统计学意义(P<0.01),表明经过嗅吸雾化的柠檬精油后,小鼠的学习记忆能力均较模型组有一定的改善(见表3)。

表3 小鼠水迷宫实验结果

图12 水迷宫轨迹图

2.12 嗅吸柠檬精油对小鼠血浆中DRD1、GRIA2及IL6水平的影响

依据“2.6、2.7”网络药理学研究结论,柠檬精油主要作用靶点是DRD1、GRIA2、IL-6蛋白,对血浆中上述蛋白的ELISA检测结果(见表4)。

表4 嗅吸精油对小鼠血浆中DRD1、GRIA2、IL6含量的影响

焦虑组小鼠血浆中GRIA2、IL6含量较空白组上升,但DRD1较空白组有所下降,其中GRIA2、IL-6差异有极显著性(P<0.01),造模成功;各给药组与焦虑组比较,GRIA2、IL6含量均低于焦虑组,而DRD1含量有所上升,其中IL-6有显著性差异(P<0.05),但是均高于空白组,表示嗅吸精油后对焦虑症状有不同程度的缓解但还没有恢复到正常水平。

2.13 海马组织的HE染色

小鼠海马的HE染色可知,相比空白组,模型组小鼠海马区存在大量细胞核固缩,神经元形态发生改变,神经元有损伤。而嗅吸LEO和NA组小鼠的海马中偶见核固缩,且症状有所缓减。表明LEO和NA都可以一定程度上保护和修复小鼠海马组织的神经元形态,对焦虑状态起到一定的改善作用(见图13)。

图13 小鼠海马组织的HE染色(400×)

3 讨论与结论

本研究通过网络药理学的方法,挖掘柠檬精油抗焦虑的关键成分、作用靶点及信号通路,从而探索柠檬精油抗焦虑症的潜在作用机制。通过构建“柠檬精油-活性成分-靶点-通路-焦虑”网络,识别出柠檬精油抗焦虑的关键成分有19个(如柠檬烯、α-松油醇、甲基丁香酚、β-蒎烯、乙酸橙花酯、β-石竹烯、4-萜品醇等),关键作用靶点有18个(如GABRA1、GABRA2、GABRA5、MAO、SLC6A3、SLC6A2、DRD1、GRIA2、IL-6等),涉及的主要通路有神经活性配体-受体相互作用、羟色胺能突触、多巴胺能突触、尼古丁成瘾、可卡因成瘾等信号通路。

柠檬精油的挥发性物质以萜类化合物含量较高,已有研究发现[14,15]萜类具有抗焦虑、抑郁以及改善认知障碍的作用。乙酸橙花酯具有抗炎和抗氧化效果,广泛作用于如神经炎、焦虑症等的治疗[16];通过定量构效关系模型计算对多巴胺受体D2、血清素转运体和5-羟色胺受体1A的亲和力,得出乙酸橙花酯可能是有效的抗抑郁药和神经抑制剂[17]。乙酸橙花酯能调控单胺氧化酶A,防止5-羟色胺在单胺氧化酶A作用下生成5-羟基吲哚乙酸,使突触间隙的5-羟色胺浓度减少,从而起到缓解焦虑的作用[18]。

DRD1属于代谢型G蛋白偶联受体,可以通过非受体酪氨酸激酶以Gαq蛋白依赖抑制DRD1的方式减少离子型谷氨酸受体介导的脊髓神经元的激活,从而缓解慢性疼痛[19],也有研究表明可通过电针刺激杏仁基底外侧激活DRD1来缓解小鼠焦虑行为导致的神经损伤[20]。由GRIA2编码的亚基在神经元中高度表达,敲除GRIA2后,小鼠在高架迷宫中表现出焦虑感降低[21]。IL-6是一种与中枢神经系统神经炎症相关的细胞因子,在小胶质细胞中激活纹状体脑区可上调包括IL-6在内的炎性分子表达,并且诱导小鼠产生负性情感以及快感缺失[22]。

分子对接验证了柠檬精油的核心化合物乙酸橙花酯、柠檬烯、β-蒎稀、4-萜品醇、α-松油烯与核心靶标DRD1、GRIA2、IL-6蛋白之间的相互结合能均低于-5 Kcal/mol,具有较好的结合活性,表明柠檬精油具有抗焦虑症的良好分子基础。表明柠檬精油抗焦虑的作用机制是通过多成分、多靶点、多通路的相互调节作用实现的。根据网络预测结果,在细胞中对柠檬精油进行抗焦虑体外验证。

一旦机体的抗氧化机制遭到破坏,可产生氧化应激,导致炎性细胞因子的产生,促进炎症发生[23]。DA能神经元因氧化性损伤会导致焦虑的发生。通过对DPPH、ABTS自由基清除检测,柠檬精油的清除效果优于单体乙酸橙花酯。同时柠檬精油能够降低LPS诱导的HaCaT细胞内ROS水平且呈剂量依赖性,能有效降低NO、TNF-α和IL-6炎症因子,从而缓解氧化应激引起的细胞炎症损伤。柠檬精油也可改善小鼠焦虑时的认知能力,对组织损伤有所缓减,并降低血清中相关蛋白含量。

综上所述,本研究通过网络药理学方法,筛选出了柠檬精油干预焦虑症的主要化学成分、作用靶点和信号通路,并通过实验进行验证,得出柠檬精油中的柠檬烯、乙酸橙花酯等成分通过对DRD1、GRIA2、IL6等靶点调控多条信号通路,降低细胞氧化应激、抑制神经炎症反应,从而干预焦虑症。

研究结果表明柠檬精油成分中化合物的可调控不同靶点,而同一靶点可干预不同的生物学过程及信号通路,体现了柠檬精油多通路、多靶点联合作用的特点。但限于网络药理学方法论的局限性以及中药组分在提取时发生化学反应的复杂性,本研究主要是以生物信息学与生化指标的结果为基础,后续将在此基础进一步完善从基因组或蛋白组学方面进行验证,进而明晰柠檬精油的主要调控靶点与作用机制。