先天性锁肛猪类型及常规生理生化指标分析

蒋凯

1.井冈山大学生命科学学院，江西吉安 343009；

2.江西农业大学省部共建猪遗传改良与养殖技术国家重点实验室，南昌 330045

先天性锁肛症是一种复杂的直肠末端发育缺陷疾病，通常是后肠发育异常致使肛门口泄殖腔膜未能破裂引发的[1-2]。该病最明显的表型是无肛门，肛门区为皮肤所覆盖，无法排出胎粪，出现腹胀、呕吐等胃肠阻梗现象。环境因素和遗传因素均能导致肛门闭锁症的发生，但主要因素是遗传[3]。肛门闭锁症在人、牛、猪、羊和狗等哺乳动物中均有发生。人先天性锁肛症的发病率约为0.03%～0.05%[1]，其病理组织学较为复杂，包括简单的单一性肛门闭锁和形成不同类型的瘘管（直肠阴道瘘，直肠膀胱瘘及直肠尿道瘘等）的复杂性肛门闭锁，而且经常会伴有其他发育异常[4-6]。猪先天性锁肛症自然发生率远高于人类，为0.1%～1.0%[7]，表现形式与人类非常相似，但很少会伴有其他异常综合征表型，但锁肛类型很少被详细报道[6,8]。锁肛症发生在公猪上是致死的，一般在1周内死亡，严重影响经济效益；新生锁肛母猪中部分母猪因为会形成直肠阴道瘘，粪便能从阴道口排出，因此，锁肛母猪有50%的存活率[9]。猪先天性锁肛症是猪先天性畸形中较为多见的一种消化道末端发育不良遗传性疾病，其遗传率为0.11～0.35[10-11]。但先天性锁肛猪的血常规、血清生化以及内脏器官HE 切片等常规生理生化指标并未见相关报道。该病发病率高、手术治疗效益差，给养猪业带来较大的经济损失。

本试验对先天性锁肛猪进行临床诊断或解剖观察来判定锁肛类型，比较分析先天性锁肛猪（直肠阴道瘘锁肛猪）及其全同胞正常对照个体的生长曲线、血常规、血清生化、脏器组织切片观察等指标，旨在加强对先天性锁肛猪的类型及常规生理生化指标的认识，为后续研究提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 实验动物

实验用猪为笔者所在实验室科研猪场构建的1个大白猪近交群体。该群体由1头祖代大白公猪和3 头大白母猪配种获得F1代个体，1 头F1代公猪与4头F1代母猪、8 头F2代正常母猪及1 头F2代锁肛母猪配种后共获得了43 头先天性锁肛猪，其中5 头锁肛猪（直肠阴道瘘锁肛猪）一直存活。锁肛猪与对照猪在相同的条件下饲养管理，每日饲喂2次，自由饮水，饲养期间未发现其他疾患。

1.2 表型判定

首先通过肉眼观察新生仔猪的肛门发育情况，为进一步确定锁肛猪的类型，观察存活锁肛仔猪和正常仔猪的排便情况，如：正常仔猪是否能从肛门排出粪便（可能存在有正常肛门但直肠闭锁的类型）；锁肛母猪是否能从阴道口排出粪便（直肠阴道瘘）。针对死亡的锁肛猪进行解剖学分析，观察是否存在直肠闭锁、是否形成直肠尿道瘘或者直肠膀胱瘘等。

1.3 体质量测定

分别称量5 头锁肛猪（直肠阴道瘘锁肛猪）和5头对照猪（1 日龄、10 日龄、60 日龄、120 日龄和180日龄）的体质量，以日龄为横坐标、体质量为纵坐标绘制生长曲线。

1.4 血液生理生化指标的检测

通过耳缘静脉采集90 日龄和180 日龄直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪的血液，1 份保存于EDTA-Na2抗凝管中，送往江西中医药大学附属医院，利用BC-6800（迈瑞）血液自动分析仪检测血常规指标。另取1 份样本经离心分离血清，送往南昌大学第一附属医院，使用7600（日立）全自动生化分析仪检测血清生化指标。

1.5 组织切片

屠宰2 岁直肠阴道瘘锁肛猪和同胞对照猪各2头，采集肝、脾、肺、肾、大脑和小脑等6种组织标本，在4%多聚甲醛溶液中保存并带回实验室，采用HE染色法（苏木精-伊红染色法）制作石蜡切片，切片于BA410显微镜（Motic，中国）下观察。

1.6 数据统计分析

试验数据以“平均值±标准差”表示，通过Stu‐dentt-test 进行统计分析,在α=0.05 水平进行显著性分析。P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 先天性锁肛猪表型特征及类型

与正常个体相比，锁肛猪个体无肛门存在，肛门区被皮肤所覆盖，不能正常排便、排气。锁肛猪刚出生时大多能正常吃奶；半天后变得烦躁不安，不时有排便动作；2～3 d 后，腹腔压力增大，出现腹胀、呕吐，吸乳少或不吸乳，常有排便努责姿势，四处游走，不安。锁肛公猪主要表现出严重腹部膨胀，一般在1周内死亡；部分锁肛母猪因形成直肠阴道瘘，能从阴道口排出粪便，多数能正常存活。

对所有死亡的锁肛猪进行解剖学观察，结果显示锁肛个体除肛门直肠外，其余各个组织和器官并无明显发育异常，为此重点分析了患病个体的肛门直肠的异常情况。43 头锁肛猪存在4 种锁肛类型：肛门直肠均闭锁（n=18）、直肠阴道瘘（n=15）、直肠尿道瘘（n=7）和肛门闭锁直肠未闭锁（n=3）。锁肛公猪和锁肛母猪的锁肛类型略有差别（图1、2）。肛门直肠均闭锁的个体中包括10 头公猪和8 头母猪（公母比约为1∶1），而发生直肠尿道瘘和肛门闭锁直肠未闭锁的均为公猪，发生直肠阴道瘘的均为母猪。

4 种类型的表型症状分别是:①肛门闭锁直肠未闭锁（图1A）：表现为无肛门存在，但直肠末端有开口，开口于腹腔内，且开口前端与腹壁黏连，并发生组织增生，造成仅能排出少部分稀粪于腹腔内，不能存活。②直肠尿道瘘（图1B）：表现为无肛门存在，但直肠末端开一极小的口与尿道连接，不能正常排粪，排尿处皮毛偶见稀粪污染。③肛门直肠均闭锁（图1C和图2A）：表现为肛门和直肠均闭锁，无法排出粪便，不能存活。④直肠阴道瘘（图2B）：表现为无肛门存在，但直肠末端开口于阴道，粪便能够从阴户排出，大多数能正常存活。

图2 锁肛母猪的肛门直肠解剖学观察

2.2 生长曲线分析

分别在第1 天、第10 天、第60 天、第120 天和第180 天称量体质量。由图3 可见，直肠阴道瘘锁肛猪的体质量均与对照个体无显著差异（P>0.05）。

图3 直肠阴道瘘锁肛猪与对照猪生长速度比较

2.3 血常规与血生化指标检测分析

血常规和血生化指标的检测结果(表1、2)均表明，直肠阴道瘘锁肛猪和对照个体在2 个时间点所有参数之间均无显著差异（P>0.05）。

表1 直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪血常规结果（n=5）

表2 直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪血生化指标结果（n=5）

2.4 主要组织切片结果

直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪的肝、脾、肺、肾、大脑和小脑这6个主要器官组织HE切片结果显示，直肠阴道瘘锁肛猪与对照个体相比，未发生明显的病理性变化，并没有出现显著的病理性特征（图4）。

图4 直肠阴道瘘锁肛猪与对照猪组织切片对照图（×200)

3 讨论

本试验对锁肛猪进行临床诊断或解剖观察来判定锁肛类型，发现存在肛门直肠闭锁、直肠阴道瘘、直肠尿道瘘和肛门闭锁直肠未闭锁4 种锁肛类型，与前期研究发现一致[6]，这4 种锁肛类型在人类锁肛症中也有类似报道[1,12-14]。其中，肛门直肠均闭锁和直肠阴道瘘2种锁肛类型在猪中报道较多[8-9,2]，而直肠尿道瘘和肛门闭锁直肠未闭锁2种类型未见相关报道。不同类型的锁肛形成有不同的类型，因此，猪先天性锁肛症类型的判定可为该病发病机制的遗传解析提供一定的基础资料。

此外，本试验分析了存活的锁肛猪（直肠阴道瘘）的生长速度、血液生理生化指标和组织切片。结果显示，生长速度、血液生理生化指标和组织切片与正常对照个体相比均不存在显著差异（P>0.05）（表1～3，图3～4），表明直肠阴道瘘锁肛猪常规生理生化指标正常。而且5头直肠阴道瘘锁肛猪均能与正常个体配种繁育后代。因此，本研究试验结果提示直肠阴道瘘锁肛猪除无正常肛门外，并不存在其他健康不良情况。本研究丰富了先天性锁肛猪类型及常规生理生化指标方面的研究，可为先天性锁肛猪后续研究提供重要借鉴。