鸡柔嫩艾美耳球虫对托曲珠利的耐药性检测

孟令海，关 琛，方素芳，王 鹏，吕 江，王 琼，顾小龙，崔 平*

（1.河北北方学院动物科技学院，河北 张家口 075000；2.河北省张家口市畜牧技术推广站，河北 张家口；3.河北省张家口市动物卫生监督所，河北 张家口；4.河北省张家口市动物疫病预防控制中心，河北 张家口）

鸡柔嫩艾美耳球虫病是一种寄生于鸡盲肠中的寄生虫病，一般以10～40日龄以内的雏鸡最易感染，受害严重，死亡率达80%以上，病愈后的雏鸡生长发育受阻，成年鸡多为带虫者，会导致体增重和产蛋率下降，严重危害养鸡业发展[1]。迄今为止，使用化学药物防治寄生虫病仍是养鸡业中常采用的技术手段。托曲珠利（Toltrazuril，TOL）是一种具有广谱、高效、低毒等特点的化学合成药物，也是目前用药剂量较低的一类抗球虫药[2]。但随着抗球虫药物的长期使用，耐药虫株不断出现，为鸡球虫病的预防与治疗带来诸多问题[3]。基于此，本试验通过检测鸡柔嫩艾美耳球虫对不同剂量托曲株利的耐药性，为托曲珠利的科学使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 14日龄体重一致的308肉鸡220只（复壮球虫用10只，耐药性试验用210只），饲养条件为严格消毒过的环境，饲料为不添加抗球虫药的全价饲料。

1.1.2 试验药物 托曲珠利溶液（生产厂家：大连奥普动物药业有限公司；批准文号：20200511）

1.1.3 试验虫株 从张家口地区不加任何抗球虫药的养鸡场采集粪便，通过单卵囊分离球虫，培养柔嫩艾美耳球虫至孢子化，95%卵囊孢子化后收集卵囊，在4 ℃ 保存备用。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组 将210只鸡随机分成7个组，每组30只。分别为I组（饮水治疗剂量为25 mg/L），II组（饮水治疗剂量为50 mg/L），III组（饮水治疗剂量为75 mg/L），IV组（饮水治疗剂量为100 mg/L），V组（饮水治疗剂量为125 mg/L），VI组（阳性组，感染不给药），VII组（阴性组，不感染不给药组）。

1.2.2 攻虫与给药 除VII组外，其他组在试验开始第1天时分别经口感染孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊5×103个/只，除VI组和VII组外，各试验组均于病毒感染前1 d开始饮水给药。感染后每天观察鸡的状况、粪便变化和采食情况，于感染后第7～15天每天收集粪便称重，观察记录粪便情况及其卵囊数。

1.2.3 耐药性判定指标 选用抗球虫指数（ACI）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）和最适抗球虫活性百分率（POAA）4项指标对耐药性进行综合判定[4]。（1）抗球虫指数（Anti-coccidial index, ACI）：抗球虫指数=（相对增重率+存活率）－（病变值+卵囊值），当ACI＜160，耐药；当ACI≥160，敏感。①存活率：以VII组的存活率为100%，计算其他各组试验鸡存活率，存活率×100%，可得存活率得分。②相对增重率：以不感染不给药组（即VII组）在试验期间每组鸡的平均增重为100%，计算其它各组每鸡的平均增重百分率，即相对增重率。③病变值：感染后9 d剖杀试验鸡，采取盲肠组织观察其病变情况并记分，盲肠病变记分的评定（详见表1，组内平均病变记分×10为该组病变值）。此外，因球虫感染死亡也记4分，并作全组平均后计算出病变值。④卵囊值：把剖检后消化的盲肠匀浆内卵囊数与该组第5～8天粪便卵囊数相加。根据卵囊比数换算成卵囊值，详见表2。其中，卵囊比数=试验组卵囊数或不感染对照组卵囊数/感染对照组卵囊数乘以100%。每项指标用阴性（－）表示无耐药性，用阳性（+）表示有耐药性。判断结果如下：完全耐药（Complete resistant，CR）：4项指标全为阳性；重度耐药（Serious resistant，SR）：4项指标中有3项指标为阳性；中度耐药（Middle resistant，MR）：4项指标中有2项指标为阳性；轻度耐药（Light resistant，LR）：4项指标中有1项指标为阳性；敏感（Sensitive，S）：4项指标均为阴性。

表2 卵囊值计算方法

（2）病变计分减少率（Reduction of lesion scores,RLS）。病变计分减少率（RLS）=感染不给药组平均病变计分－感染用药组平均病变计分/感染不用药组平均病变计分×100%。当RLS＜50%，耐药；当RLS≥50%，不耐药。（3）相对卵囊产量（Relative oocysts production,ROP）。相对卵囊产量（ROP）=感染用药组平均卵囊百万数/感染不用药组平均卵囊百万数×100%。当ROP＜15%，不耐药；当ROP≥15%，耐药。（4）最适抗球虫活性百分率[5]（Percent of optimum anti-coccidial activity, POAA）。最适抗球虫活性百分率（POAA）=感染用药组GSR－感染不用药组GSR/不感染不给药组GSR－感染不给药组GSR×100%。当POAA≤50%，耐药；当POAA＞50%，不耐药。增重与存活率（Growth and survival ratio，GSR）=笼末重/笼初重。综上所述，本试验选用ACI、RLS、ROP和POAA四项指标进行综合判定，每项指标用阴性（－）表示无耐药性，用阳性（+）表示有耐药性。判断结果如下：完全耐药（Complete resistant, CR）：4项指标全为阳性；重度耐药（serious resistant，SR）：4项指标中有3项指标为阳性；中度耐药（Middle resistant，MR）：4项指标中有2项指标为阳性；轻度耐药（Light resistant, LR）：4项指标中有1项指标为阳性；敏感（Sensitive, S）：4项指标均为阴性。

2 结果

2.1 临床症状和病理变化

I～VI组在开始攻虫过程中，均出现食欲不振、精神萎靡、羽毛逆立等症状。I～V组在使用托曲珠利后开始逐渐恢复食欲与精神，试验鸡均存活，I组和II组的体重增长缓慢，从III组开始，体重持续增长，总体上所有剂量的托曲珠利对试验鸡的生长性能无显著影响。剖杀时，对比7个试验组，I～V组，盲肠的状况良好，VI组（阳性组）的盲肠病变较严重，VII组（阴性组）的盲肠无病变。

2.2 耐药性检测结果

通过测定四项指标表明，所有试验组POAA值均≥50%，结果为阴性，敏感；所有试验组RLS值≥50%，结果是阴性，敏感；所有试验组ROP＜50%，结果是阴性，敏感；ACI值测定中，I组和II组的值均＜160，呈阳性，有耐药性，而III组、IV组和V组值均＞160，呈阴性，无耐药性，详见表3。

表3 耐药性检测结果

结果表明，I组和II组仅ACI指标呈阳性，结果为I组和II组为轻度耐药，III组、IV组和V组的四项指标呈阴性，结果为敏感，见表4。

表4 综合耐药性判定

3 讨论

本试验耐药检测结果表明，25 mg/L作为正常剂量的托曲株利与二倍剂量的托曲株利均出现轻度耐药性，使用托曲株利原始浓度抗鸡球虫的敏感性在逐步减弱。蒋禄峰[6]等对河北省部分地区柔嫩艾美耳球虫野外分离株进行耐药性检测，试验结果表明，石家庄、沧州、保定、唐山四个地区的分离株对妥曲珠利分别为重度耐药、中度耐药、重度耐药和完全耐药，这可能与当地的用药史和用药方法有很大关系。耿天天[7]等开展河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对地克珠利耐药性调查研究表明，河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利均存在耐药现象。地克珠利与妥曲珠利均属三嗪类抗球虫药，曾因高效低毒被广泛应用，然而长期用药已使鸡球虫产生了抗药性，本次采集的张家口地区分离株对正常剂量的托曲珠利与二倍剂量的地克珠利具有抗药性，建议在鸡球虫防治过程中可配合其他抗球虫药进行轮换用药和穿梭用药。

本研究虽然能够为张家口地区的球虫病防治提供一些理论依据和实际指导，但是要彻底解决球虫对当地养鸡业的阻碍，还需从多方面努力。据卢绪峰[8]报道，在潮湿高温的夏秋季，温湿度过高，鸡球虫病的发病率呈直线上升趋势，其死亡率呈指数增长；预防鸡球虫病重要的环节是要保持圈舍内的环境良好和干净卫生，应该避免小日龄鸡和成年鸡生活在一起，以避免成年带虫鸡感染小日龄鸡。养鸡场在做好日常管理的同时，有条件的鸡场尽量进行球虫耐药性测定，然后根据测定结果制定出适合本鸡场的预防和治疗用药方案[9-10]，将球虫耐药性降至更低，减少经济损失，提高鸡场的经济效益，为养鸡业的健康持续发展打下坚实基础。

4 结论

本次试验研究表明，张家口地区鸡柔嫩艾美耳球虫对托曲株利的耐药浓度为50 mg/L，75 mg/L及以上剂量仍能有效防治鸡球虫感染。