气相色谱法测定医用胶中α-氰基丙烯酸正丁酯和柠檬酸三乙酯的含量

＊梅炜华 吴小红 汪家升 董芳芳

（浙江伽奈维医疗科技有限公司 浙江 310000）

α-氰基丙烯酸酯粘合剂是目前应用最广泛的医用胶粘合剂之一，这类粘合剂的开发、研究备受瞩目，发展非常迅速，主要用于迅速止血、组织及器官等局部部位的粘结及栓塞等，解决了一些传统方法无法达到的预期效果的问题，与其他粘合剂相比，其单组分、无溶剂、聚合速度快、粘结强度大、毒性小及良好的生物相容性等优良特性，已经成为临床应用的良好医学材料[1]。柠檬酸三乙酯是胶粘剂较为常用的增塑剂，在医用胶中加入适宜的增塑剂可以明显地改善其柔韧性，使膜性能由弯曲易折断改善为耐弯折无硬物，使用中放热不明显，达到医用要求。

国家食品药品监督管理总局发布的2016年第6号《α-氰基丙烯酸酯类医用粘合剂注册 技术审查指导原则》[2]中明确对产品主体成分含量要求质量控制；目前尚未制定对该类产品的国家标准或行业标准，并且相关文献资料也相对匮乏。其中，气相色谱-质谱法测定医用胶a-氰基丙烯酸正丁酯的含量[3]，CN113447587A是一种氰基丙烯酸酯类化合物的纯度测定方法[4]，氰基丙烯酸甲氧基乙酯中微量杂质的毛细管气相色谱分析[5]，毛细管气相色谱法测定柠檬酸三乙酯含量[6]，以上几篇文献单个成分检测有相应的介绍但并不完善。本方法主要针对α-氰基丙烯酸正丁酯及其增塑剂柠檬酸三乙酯两种成分在同一条件下进行检测，经过方法学验证确保准确性。

1.实验部分

(1)仪器与试剂

8860型气相色谱仪，配备氢火焰离子化检测器，美国安捷伦科技公司；色谱柱：HP-5（30m×0.32mm×0.25μm），美国安捷伦科技公司；ME204E分析天平，梅特勒-托利多公司。

α-氰基丙烯酸正丁酯标准品（上海甄准生物科技有限公司）；柠檬酸三乙酯对照品（中国食品药品检定研究院）；丙酮（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）。

(2)色谱条件

色谱柱为HP-5（30m×0.32mm×0.25μm），程序升温：初始温度100℃保持2min，以10℃/min的速率升温至180℃，保持3min；进样口温度：230℃；检测室温度：250℃；柱流速：2mL/min；进样量：1.0μL，分流比30:1。

(3)实验方法

空白溶液配制：用移液枪移取1mL丙酮，置于进样小瓶中，密封，作为空白溶液。

标准曲线配制：分别量取适量氰基丙烯酸正丁酯对照品用丙酮定容至10mL得到10mg/mL氰基丙烯酸正丁酯中间液和适量柠檬酸三乙酯对照品用丙酮定容至10mL得到10mg/mL柠檬酸三乙酯中间液，再取5mL氰基丙烯酸正丁酯中间液和1mL柠檬酸三乙酯中间液用丙酮定容至配制成5mg/mL的氰基丙烯酸正丁酯和1mg/mL柠檬酸三乙酯溶液，作为标准储备液。

分别移取上述标准储备液0.2mL、0.5mL、0.8mL、1.0mL和1.2mL，用丙酮定容至10mL，配制成含α-氰基丙烯酸正丁酯0.1mg/mL、0.25mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL和柠檬酸三乙酯0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.12mg/mL的标准溶液混合溶液。

2.结果与讨论

(1)定性分析

溶剂丙酮的出峰位置不影响α-氰基丙烯酸正丁酯和柠檬酸三乙酯的定性和定量，如图1所示。

图1 丙酮与α-氰基丙烯酸正丁酯、柠檬酸三乙酯的色谱图

(2)精密度与系统适用性

配制6份含α-氰基丙烯酸正丁酯0.6mg/mL和柠檬酸三乙酯0.12mg/mL的供试品溶液，由一个分析人员在相同的条件下进行测试，所得6份供试液的含量在＞100.0μg/mL，100～1000μg/mL时，物质的相对标准差（RSD）应不大于3.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯、柠檬酸三乙酯精密度与系统适用性试验结果，如表1所示。

表1 精密度与系统适用性试验结果

(3)线性

线性系指在设计的范围内，线性试验结果与试样中被测物浓度直接呈比例关系的能力。可用同一对照品储备液经精密稀释或分别精密称取对照品，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，至少制备5个不同浓度水平。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。α-氰基丙烯酸正丁酯、柠檬酸三乙酯各自所得线性方程，如表2所示，线性关系图见图2、图3。

表2 两种物质的线性方程

图2 α-氰基丙烯酸正丁酯线性图

图3 柠檬酸三乙酯线性图

(4)准确度

分别配制含α-氰基丙烯酸正丁酯0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL；柠檬酸三乙酯0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.10mg/mL的供试品溶液各三份，分别测定其含量。含量＞10.0μg/mL，≤100μg/mL的物质的相对标准差（RSD）应不大于4.0%；含量＞100.0μg/mL，≤1000μg/mL的物质的相对标准差（RSD）应不大于3.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯、柠檬酸三乙酯加标回收率试验结果，如表3所示。

表3 加标回收率试验结果

(5)定量限

主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。所测6份溶液浓度＞1μg/mL，≤10μg/mL时物质的含量相对标准差（RSD）应不大于6.0%，所测6份溶液主峰的保留时间相对标准差（RSD）应不大于2.0%。α-氰基丙烯酸正丁酯定量限试验结果，如表4所示。

表4 定量限试验结果

(6)检出限

主峰与噪音峰信号的强度比不得小于3。α-氰基丙烯酸正丁酯的最小检出量为0.4μg/mL；柠檬酸三乙酯最小检出量为1.0μg/mL。

3.讨论

医用胶属于生物医学特殊功能性胶粘剂，在我国作为Ⅲ类医疗器械管理。然而，由于目前国内缺乏针对这类产品的国家标准或行业标准，企业在注册产品时无依据可循，因此难以有效控制产品质量。一方面，α-氰基丙烯酸正丁酯本身较高黏度，样品浓度应适宜。当样品浓度过高时（20mg/mL），进样针易堵塞，且目标物峰拖现象较为明显。通过降低样品浓度至5mg/mL，并调高分流比，可以有效改善拖尾现象，但同时易产生残留物质，在多次进样后会导致目标峰浓度偏高。最终将样品浓度降至0.5mg/mL时，重复进样不会使目标物浓度增加，因此该浓度下的进样效果更佳。另一方面，α-氰基丙烯酸正丁酯遇水极易固化，因此，在配制时需注意环境保持干燥，以免样品长时间暴露在空气中吸收水分并引起聚合现象。同时，在现有的α-氰基丙烯酸正丁酯检测方法的基础上，对柠檬酸三乙酯的检测方法进行优化验证。结果表明，在该条件下，两种物质均能够良好地响应。

4.结论

实验结果表明，该方法适用于医用胶中α-氰基丙烯酸正丁酯和柠檬酸三乙酯的含量检测。该方法简单易行，结果准确可靠，重现性良好，为医用胶中α-氰基丙烯酸正丁酯和柠檬酸三乙酯的含量测定及生产监控提供了有力支持。