猪链球菌2型诊断与防制措施

刘 爽，赵丽丽，孙学强，姚火春

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东 青岛 266032；2.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 南京 农业大学，江苏 南京 210095）

猪链球菌（Streptococcus suis type 2，SS2）已经成为危害养猪生产及人类健康的重要人畜共患病。可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎及猝死等；致人败血症、心内膜炎、脑膜炎，严重的致人链球菌毒素休克综合征而死亡。1998年7月江苏南通某地猪群暴发猪链球菌2型，同时导致21人感染发病和14人死亡。2005年7月，四川资阳等地农户猪急性死亡，随后人群发生不明疫病，致使204人感染发病、38人死亡，经农业部专家组诊断，病原也为猪链球菌2型。猪链球菌2型在我国的流行日趋严重，威胁公共卫生安全，使得猪链球菌感染的相关研究受到高度关注。

1 病原学及流行病学

根据菌体荚膜抗原特性的不同，SS可分为35个血清型（1～34型及1/2型）。SS2按兰氏分群为R群，菌落小，灰白透明，稍黏，在液体中培养才呈短链状。血平板培养一般先表现为α溶血，延时培养后则变为β溶血，或者菌落周围不见溶血，刮去菌落则可见α或β溶血。在绵羊血平板呈α溶血，马血平板则为β溶血。

猪链球菌病的流行病学非常复杂，许多健康猪携带SS2但不出现典型的临床症状。SS2还分为高致病株，中等毒力株和弱毒力株。病猪和病尸是猪链球菌主要的传染源，其次是病愈带菌猪和隐性感染猪，李小军等从送检的非法屠宰的猪肉中检出猪链球菌2型。病猪与健康猪接触，或经由病猪排泄物等引起猪发病。在自然情况下，链球菌病多半通过消化道、呼吸道、受损伤的皮肤及粘膜感染，病原菌很快能通过粘膜和组织的屏障而侵入淋巴道与血液，随即随血流播散全身。通常从口腔或鼻腔侵入机体，而后在扁桃体定居，活猪扁桃体带菌率变化较大（0%～100%）。表现亚临床症状病猪的鼻腔可分离出SS2，成为传染源。Clifton-Hadley等报道，健康带菌种猪、断奶猪引入一个未感染的猪群后，接受猪群的断奶猪及育肥猪通常会暴发本病，母猪经呼吸道可将该菌传给哺乳仔猪。Enright证实，苍蝇能在猪场内或不同场间传播本病，其它动物或鸟类作为传染源或传播媒介的重要性仍有待证实。SS2垂直传播的机制仍不十分清楚，Robertson等发现，母猪生殖道内存在猪链球菌，分娩过程中仔猪可能被感染，另一方面，目前仍没有证据表明，公猪生殖器携带本菌。

自1999年姚火春等报道猪链球菌2型起，广东、江苏、浙江、上海、四川、福建、河南、河北、安徽、山东、香港及东北地区等均有关于猪链球菌2型的分离鉴定或者诊断报道，引起了科研领域及社会各阶层的普遍关注。

2 诊断

猪链球菌2型引致的猪链球菌病的诊断，在临床上主要通过脑膜炎、关节炎、心内膜炎、支气管肺炎、多发性浆膜炎、脑炎、流产、败血症、脓肿及猝死等症状进行初步判定，并结合实验室的细菌分离、镜检、生化鉴定及单因子血清进行凝集分型。当然，分离病原菌及动物回归实验是最为可靠的诊断方法，但是目前我国的流行日趋严重且血清型种类繁多，致病机理仍未明确，建立快速、敏感、特异的检测方法及制备高效的疫苗是防制该病的当务之急。从快速便捷的角度上看，PCR方法不失为一种快速诊断的捷径，目前已报道的多种PCR检测方法。

Okwumabua等建立一种PCR方法，引物对根据SS2的谷氨酸脱氢酶基因（gdh）设计，能有效扩增所有测试的306株SS临床分离株（猪305；人1）的DNA，产生与设计相同的688 bp片段。测试的分离株分离自不同器官、地理来源不同的所有SS血清型。引物用于其他细菌DNA的检测时，未能检测到产物，说明其检测SS特异。用gdh基因引物和SS荚膜合成基因的引物建立多重PCR。可分别检测属于 1/2、1、2、7 和 9 的血清型菌株。倪艳秀等建立sly、epf、mrp的检测方法；孙理云等建立了检测fbps的PCR方法且发现国内SS2分离株与国外SS2分离株同源性99%以上。李干武建立了检测orf2的PCR方法。

3 防制

Holt等及Quessy等用无毒株作为活疫苗可使猪得到保护，但不能清除带菌猪或预防新的带菌猪出现。Kebede等研制猪链球菌2型的温度敏感缺失株疫苗，只获得了同源保护。Elliott等用猪链球菌2型的纯化荚膜免疫猪，结果不能抵抗全菌的攻击。Jacobs等用猪链球菌2型的溶血素，能完全保护小鼠抵抗致死性猪链球菌2型菌株的攻击，同样用纯化的溶血素给猪静脉注射免疫，能很好的保护猪抵抗致死性猪链球菌2型菌株的攻击。Quessy等证实用EF蛋白免疫可抵抗该菌异源株的攻击。Blecha等评价了白细胞介素-1β与白细胞介素-2重组体对猪链球菌全菌疫苗保护性的影响。

国内猪链球菌2型研究和应用相对比较成功的灭活疫苗是源于姚火春等在1998年分离自江苏海安的HA9801株的全菌灭活疫苗，王建等于2001年报道对上海地区猪链球菌病的流行病学调查结果证明在上海地区的猪链球菌病的病原以C群链球菌为主，同时存在较多比例的猪链球菌2型，并以马链球菌兽疫亚种ATCC35246株和猪链球菌2型HA9801株作为生产菌株，制备铝胶灭活疫苗，并对培养条件进行优化，免疫猪后测定了抗体消长规律，最后建立了仔猪感染动物模型并进行了免疫保护试验，分别用2株疫苗强毒株攻击，结果对猪链球菌2型保护率为 100%（10/10），对 C群的 ATCC 35246的保护率为90%，在进行临床试验时用5批疫苗免疫妊娠母猪、保育猪后进行攻毒试验结果，对哺乳仔猪的平均保护率达到88.09%（SS2）和79.06%（SeZ），对保育猪的平均保护率达到 90%（SS2）和 76.7%（SeZ），游启有等对猪链球菌2型灭活疫苗在2005—2008年全国十多个地区使用的调查证明该疫苗安全性好，副作用小，免疫效果可靠。猪链球菌灭活疫苗（马链球菌兽疫亚种+猪链球菌2型）于2006年获得农业部二类新兽药证书。猪链球菌灭活疫苗（马链球菌兽疫亚种+猪链球菌2型）现已在全国范围得到广泛应用和认可。

基因工程亚单位疫苗（subunit vaccine）又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗是只含有病原体的一种或几种抗原，而不含有病原体的其他遗传信息。原则上讲，用这些疫苗接种动物，都可使之获得抗性而免受病原体的感染。亚单位疫苗不含有感染性组分，因而无须灭活，也无致病性。随着分子生物学技术的日渐成熟和猪链球菌2型毒力基因以及保护性抗原的逐渐发现，国内开展表达SS2亚单位的研究工作及报道也日渐增多，所表达亚单位主要有MRP又称M蛋白、EF（Extra-cellular protein factor）、溶血素（Suilysin，SLY）、荚膜多糖以及新发现的保护性抗原纤连蛋白/血纤蛋白原、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、烯醇化酶（Enolase）、溶血素样蛋白、组氨酸三聚体蛋白。大部分SS2亚单位研究集中于基因的克隆、表达及反应原性的鉴定，少数报道进行了动物模型免疫及攻毒实验，极少数报道进行了猪的免疫保护试验，在进行了动物免疫保护试验的报道中有的实验中并未设立全菌灭活疫苗对照组，在为数不多的设计有全菌灭活苗对照组的报道中，无论是单独表达或是多个亚单位疫苗串联表达的相对保护率均低于全菌灭活疫苗免疫组。

（略）