2007—2009年东莞市屠宰猪体内猪链球菌2型带菌情况调查及分析

洪伟彬，张险朋，黄炳炽

（东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523086）

猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2，SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌。它不仅可以引起猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎、败血症和突然死亡，而且可以感染相关从业人员，并导致死亡。1991年我国广东省首次分离到猪链球菌2型[1]，此后全国各地陆续分离到该细菌。1998－1999年江苏省南通地区暴发猪链球菌2型疫情，并引起20多人感染，死亡14人[2]。2005年7月，四川资阳地区再次暴发猪链球菌2型疫情，导致34人死亡[3]。给养猪业和公共卫生安全带来重大危害。链球菌可隐性带菌，扁桃体是猪链球菌入侵猪体内首先定植的器官，也是猪隐性带菌的主要部位。通过监测猪群扁桃体内SS2的携带情况，可了解SS2在猪群内的感染。本研究用荧光PCR的方法对本市屠宰猪体内SS2隐性带菌情况进行监测，为进一步制定链球菌病预防控制措施奠定基础。

1 材料与方法

1.1 样本采集

2007—2009年从东莞市各屠场采集猪扁桃体共1893份，冷冻保存备用。

1.2 主要仪器

ABI7500PCR仪，ECSO生物安全柜，37℃恒温培养箱，高速冷冻离心机。

1.3 主要试剂

牛肉膏、胰蛋白胨均购自广州环凯微生物科技有限公司；猪链球菌2型荧光PCR检测试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司批号:2008002；2009001）；其它化学试剂均为分析纯。

1.4 细菌培养

以无菌操作取扁桃体25 g，加入装有225mL灭菌选择性THB增菌液的广口瓶内，均质，于36±1℃培养24±2 h。无菌吸取增菌液1mL备用。

1.5 模板制备

取培养后的菌液50μL于1.5mL无菌离心管内，加入50μLDNA提取液充分混匀，100℃恒温处理10±1min，12000 rpm 离心 5min，备用。

1.6 PCR扩增

反应采用25μL体系，反应条件为:94℃3min，1个循环；93℃30 s，55℃45 s，40个循环；收集荧光在55℃45s。

2 结果

2.1 不同年份猪链球菌2型荧光PCR检测结果

取 2μL模板 DNA做荧光PCR，部分样品检测见图1。不同年份屠宰猪体内猪链球菌2型带菌情况不同（表1）。2009年带菌率最高，为74.8%，而2007年为0。

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2.2 不同季度猪链球菌2型荧光PCR检测结果

各个季度猪链球菌2型阳性率不同，结果见表2。第二季度和第三季度的阳性率要明显高于第一季度和第四季度。

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3 讨论

本研究采用荧光 PCR来监测样本中的猪链球菌2型，与传统方法相比，荧光 PCR具有快速，敏感性高，特异性强，操作简便等特点，适合于动物防疫部门大规模的监测。

本研究所监测样本来自东莞市各镇街屠场屠宰猪，因此本文的结果可以认为是来自健康猪群的猪链球菌2型带菌情况调查。SS2广泛存在正常猪呼吸道中，活体扁桃体棉拭子检出率一般在50%以上，而屠宰场猪扁桃体SS2的检出率可达100%，猪群是否会发生猪链球菌病与其带菌率的高低并无直接关系[4]。国内不同地区健康猪体内SS2的检出率差异比较大，有报道称江苏地区大部分健康猪群的SS2的带菌率普遍较高，为31.6～77%，平均带菌率为40.9%[5]。胡杰等[6]用普通PCR的方法对广西8个县屠场的猪扁桃体样本进行SS2带菌调查，平均带菌率为36.3%。2007年我市尚未出现SS2隐性感染的生猪进场，2008年屠宰猪的带菌率达到37.4%，2009年则高达74.8%。说明SS2在我市屠宰猪中隐性感染已相当普遍；但也不能排除屠场消毒不彻底，使SS2污染屠场环境，从而使所采样本受到污染的可能。从纵向来看，每个季度SS2阳性率也有所不同，以第二季度为最高，第三季度次之。由此可见，带菌率一定的季节性。和罗隆泽等人的报道一致[7]。

猪链球菌2型的毒力因子主要有溶菌酶释放蛋白（MRP），细胞外蛋白因子（EF），溶血素（sly），荚膜多糖（cps2A），甘油醛－3－磷酸脱氢酶编码基因（gapdh），纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白（FBPS）和orf2毒力相关基因等[8-9]。这些毒力因子都可以影响SS2的毒力。Vecht U等[10]研究发现，并不是所有的SS2菌株都致病，而是存在着强致病力、弱致病力以及无致病力菌株，并依此将其分为三个型，即 MRP+EF+、MRP+EF-、MRP-EF-，且从健康猪分离的菌株86%为MRP-EF-，即无致病力毒株。罗隆泽等[10]通过调查发现，四川资阳地区健康猪携带的2型猪链球菌是高致病性菌株（MRP+EF+），与同期病人分离株具有一致的生物学特征，是引起猪或人发病的重要传染源。本研究发现在2009年东莞市屠宰猪群的SS2平均带菌率达到了74.8%，带菌率非常高。但究竟是属于SS2的哪种表型，以及哪种表型比较多，尚需进一步的研究。

通过对东莞市屠宰猪SS2带菌率的监测发现，目前SS2隐性带菌在我市屠宰猪中已相当普遍，对我市人民的健康是一个潜在威胁。因此，需进一步搞清楚它们的致病性，以便制定有针对性的预防和控制措施，保护人民群众健康。

[1]黄毓茂，黄引贤，余志东，等.2型猪链球菌的初步研究[J].中国畜禽传染病，1993，（5）:1-3.

[2]姚火春，陈国强，陆承平，等.猪链球菌1998分离株病原特性鉴定[J].南京农业大学学报，1999，22（2）:67-70.

[3]李卓，孙光，杨木，等.猪链球菌病及其防治[J].畜牧兽医科技信息，2005（8）:14-15.

[4]何孔旺，陆承平，倪艳秀，等.PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子[J].扬州大学学报:农业与生命科学版，2002，23（3）:1-4.

[5]何孔旺，倪艳秀，王继春，等.猪链球菌2型分子流行病学研究[J].中国人兽共患病杂志，2002，18（5）:45-47.

[6]胡杰，刘棋，陆承平.广西屠宰猪的猪链球菌2型分子流行病学调查[J].中国兽医杂志，2008，44（10）:37-38.

[7]罗隆泽，王鑫，崔志刚.四川资阳地区健康猪2型猪链球菌分离与分子生物学特征分析[J].中国人兽共患病学报，2009，25（9）:842-845.

[8]Jacobs A A，Loeffen W，Vanden-Berg A，et al.Identifcation，purification and characterrization of a thiolactvated hemolysin （suilysin）of Streptococcus suis [J].Infect Immun， 1994，62:1742-1748.

[9]Smith H E，Daraman M，Vander Velde J，et al.Identification and characterization of the cpslocus of Streptococcus suis serotype2:the capsule protects against phagocytosis and is an important virulence factor[J].Infect Immun，1999，67（4）:1750-1756.

[10]Vecht U ，Wisselink H J，Jellema M L，et al.Identification of two proteins associated with virulence of the Streptococcus suis type 2[J].Infect Immun，1991，59:3156-3162.