复方金银花对雏鸡法氏囊强毒抑制效果观察试验

冯善祥

（菏泽学院动物科学系，山东 菏泽 274000）

鸡传染性法氏囊病（IBD）是鸡的主要疫病之一[1]，常用抗血清和卵黄抗体治疗[2]。由于制备、保存和运输等环节的影响，抗血清和卵黄抗体治疗IBD往往存在效果不确定或有传播其它疾病的危险[3]。

1 材料与方法

1.1 试验药品

1.1.1 供试药品

金银花复方制剂方由金银花、连翘、黄连、栀子、黄芩、芍药、玄参、浙贝母、桔梗、甘草10味中药组成（均购于菏泽市药材公司）。

1.1.2 对照药品

1.1.2.1 中药对照组

扶正解毒散，由板蓝根、黄芩、淫羊藿三味中药组成，功能、适应症与本品相似，按2005版《中国兽药典》标准上用量为每只鸡0.5～1.5 g（按每只鸡1 g应用）。

1.1.2.2 西药对照组

利巴韦林，批号200509049，辽宁制药总厂生产，用生理盐水配成1%浓度的溶液备用。按常规剂量每1L水加利巴韦林0.1 g。

1.1.3 疫苗

法氏囊D78冻干疫苗，购自英特威公司，批号:B001AM01。

1.2 种毒

法氏囊标准强毒BC-6/85株，购自中国兽医药品监察所，TCID50=105.5/0.1mL。

1.3 抗原与血清

法氏囊AGP诊断抗原与标准阳性血清（AGP效价为1:128）购自中国兽医药品监察所。

1.4 试验动物与分组

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1日龄海兰褐雏鸡，在严格消毒环境下饲养2周，称重，选择体重、大小均匀一致、健康的雏鸡240只，公母各半。按照公母各半简化分层的方法，随机分为8组（见表1），除疫苗对照组按法氏囊常规免疫程序免疫外，其他各组不免疫法氏囊疫苗，其它疫苗按常规免疫程序按时免疫、平时加强消毒，各组隔离饲养。除疫苗对照组外，各组在试验前抽血进行法氏囊母源抗体AGP试验，抗体阴性后开始试验。除试验所需药物外，饲料中不添加其他任何抗菌药物和抗病毒药物。

1.5 给药方法

按照表1方法，疫苗对照组于14日龄按常规剂量滴口免疫法氏囊D78冻干苗，各受试药物组和药物对照组（中药对照组、西药对照组）从22日龄开始给药，连用5 d。以0.01 mol·L-1（pH7.2）PBS缓冲液对IBDV强毒BC-6/85作1:100稀释，除健康对照组外，各组于24日龄点眼、滴鼻攻毒，0.2mL/只。在试验期间，各组隔离饲养，所用的饲料、饮水和用具严格分开，避免交叉污染。

1.6 临床观察与记录

感染后，每日3次观察鸡只的健康状况、饮水、采食及粪便情况，记录各组鸡的发病和死亡情况，并对病死鸡剖检、进行病理检查。感染后第11天（即34日龄）结束试验，称重（称重前12h停饲停水），全部剖杀试验鸡，进行病理检查、抗原检测和法氏囊病变指数计算（法氏囊湿重（mg）/体重（g））。

1.7 判定标准与相关指标的计算

1.7.1 保护 攻毒后，未出现临床症状，精神、采食、饮水、粪便等未见异常；试验结束后剖检未发现法氏囊眼观病变，法氏囊等组织AGP检测抗原阴性为受到保护。法氏囊眼观病变和抗原AGP检测有一项为阳性，则判断为未受保护。

保护率=每组未发病鸡数/每组试验鸡总数×100%

1.7.2 发病 精神沉郁、采食量减少、排白色水样稀便，打堆、害冷。法氏囊有眼观病变或AGP检测法氏囊抗原为阳性。

发病率=每组发病鸡总数/每组试验鸡总数×100%

1.7.3 有效 未发病及有临床症状但未死亡者为有效。

有效率=每组存活鸡总数/每组试验鸡总数×100%

1.7.4 死亡率 凡在试验期间，试验鸡出现典型法氏囊病症状并死亡，尸检发现法氏囊肿大或萎缩等典型病变，且法氏囊等组织AGP检测阳性，判定为法氏囊病毒感染死亡，根据死亡数计算各组死亡率。

死亡率=每组死亡鸡总数/每组试验鸡总数×100%

1.8 血清学确诊

取病死鸡和试验结束后的剖杀鸡的法氏囊、胸腺和脾脏，磨碎，反复冻融，浸出液作为抗原，与法氏囊标准阳性血清作琼脂扩散试验，24～72 h观察，出现明显的沉淀线，即确诊为试验鸡感染IBDV。

1.9 数据分析 将各组的试验数据以X2检验及方差分析进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 临床症状与病理变化

2.1.1 临床症状 试验鸡攻毒48 h后陆续发病，阴性对照组第4天开始死亡，死亡高峰集中出现在接种后5～7 d之间，以后逐渐减少，第9天不再死亡。主要症状为精神沉郁，羽毛逆立无光泽，缩颈垂羽、排白色水状粪便，食欲严重下降或废绝。在此期间大部分发病鸡因脱水、消瘦而死亡。而健康对照组鸡在精神、食欲、活动、粪便等方面均未见异常，其他各组也分别有不同程度的发病率和死亡率，但症状较阴性对照组轻，病变也不典型。

2.1.2 病理变化 阴性对照组最严重，病死鸡出现典型的法氏囊病病变，鸡体严重脱水，法氏囊肿大，部分鸡只法氏囊外观呈紫葡萄状，浆膜面可见淡黄色胶冻样水肿液，黏膜出血，有乳白色渗出物，胸腿肌有出血斑或出血条纹，腺胃和肌胃交界处有出血斑，肾脏肿大，有尿酸盐沉积，呈花斑肾病变。脾、盲肠扁桃体肿大。其他各试验组发病鸡病程较长，症状没有阴性对照组典型，可见法氏囊肿或萎缩，内有干络样渗出物，机体严重脱水，肾脏有尿酸盐沉积，其他器官病变不明显。剖杀健康对照组鸡，各组织器官未见异常。

2.2 金银花复方制剂抑制IBD强毒感染的结果 结果（表2）表明，西药对照组与中药对照组相比在有效率、保护率上差异均不显著（p>0.05）；金银花复方高、中剂量组与药物对照组（西药对照组及中药对照组）相比在有效率和保护率上差异显著（p<0.05）；金银花复方制剂高、中剂量组与疫苗对照组在各项指标上差异都不显著（p>0.05），但药物中剂量组在保护率上略逊于疫苗对照组，而药物高、中剂量组在有效率方面略好于疫苗对照组。

2.3 法氏囊组织中的抗原检测 结果（表3）表明，在保护率方面药物高、中剂量组与疫苗对照组间差异不显著（p>0.05），金银花复方制剂高剂组、疫苗对照组显著高于低剂量组、药物对照组（p<0.05），而中剂量组显著高于低剂量组和药物对照组（p<0.05）；中药对照组与西药对照组间差异不显著（P>0.05）。

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2.4 法氏囊病变指数 剩余成活鸡的法氏囊病变指数结果（表4）表明:金银花复方制剂各组对法氏囊有不同程度的保护作用，与阴性对照组、疫苗对照组相比差异显著（p<0.05），疫苗对照组又与阴性对照组差异显著（p<0.05），说明疫苗免疫虽然可以在一定程度上抵御法氏囊强毒的攻击，但强毒本身对法氏囊也有一定程度的损伤。金银花复方制剂高、中剂量组与药物低剂量组、药物对照组差异显著（p<0.05），此结果说明随着金银花复方制剂剂量的增加，其抗病毒作用增强，对法氏囊的保护作用越来越明显。金银花复方制剂高、中剂量组与健康对照组间差异不显著（p>0.05），表明金银花复方制剂中等剂量即可提供足够的抗病毒作用。

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3 讨论与结论

3.1 法氏囊病毒感染鸡后，主要损害法氏囊等免疫器官，使B淋巴细胞缺失，导致免疫抑制，使鸡对多种病原易感性增加和对多种疫苗免疫应答下降[4]。金银花复方制剂中的金银花、连翘、黄芩可增加动物体内淋巴细胞转化率，刺激T、B淋巴细胞的功能，诱导产生干扰素，从而起到抗病毒和抑菌的作用；桔梗能激活巨噬细胞和T细胞，增强免疫功能；甘草具有促进淋巴细胞增殖的作用，且体外增强作用随剂量的增加而增加[5]。因此，本试验所用金银花复方制剂可以明显的减弱IBDV强毒对雏鸡法氏囊等免疫器官的损害，对法氏囊强毒感染雏鸡具有明显的保护作用[6]。

3.2 根据中医学理论，法氏囊病属热毒侵袭所致。热为阳邪，易伤阴液，故表现饮欲增加；由于热入血分，迫血妄行，致使肌肉等处出血，又因热邪化火生风，风助火势，上扰神明，故病鸡昏睡，精神不振；热毒耗灼肾阴，故见肾石；热毒易耗津伤血，从而导致本源枯竭，故发病急，死亡快。防治该病应以清热解毒、燥湿止泻、凉血生津、泻火为主，该方中金银花、黄连、连翘以清热解毒、杀菌消炎为主，黄芩、桔梗、栀子可清热凉血、泻火解毒、宣肺排脓、止咳平喘，而甘草起调和诸药，增加药效的作用[7]。本试验研究表明金银花复方制剂可增强机体免疫力，降低法氏囊强毒感染雏鸡的发病率和死亡率，有很强的保护作用。

3.3 用疫苗预防法氏囊病效果较好，但由于病毒变异和超强毒的存在，免疫失败时有发生，法氏囊卵黄抗体与抗血清对法氏囊病疗效确切，但也存在着血清型不符和外来病原污染等问题，而中药由于安全、绿色、作用机制独特，作用广泛，在病毒病防治上具有特有的优势，在病毒性疾病多发季节或易感日龄进行预防性投药和在发生疾病时进行治疗可以降低死亡率，减少经济损失，而发生免疫失败时用疫苗紧急接种几乎不能取得较好的效果，这时用抗病毒中药不失为一种较好的补救措施。本试验表明，金银花复方制剂高、中剂量组无论在保护率，还是在有效率方面都优于药物对照组和药物低剂量组，与疫苗对照组相当，且对法氏囊强毒感染引起的法氏囊萎缩具有一定保护作用，用于鸡传染性法氏囊病的预防具有明显效果，建议临床使用剂量和方法为:混饲，每只鸡1g，连用5d。

[1]何秀苗，阳秀英，韦平.传染性法氏囊病及其病原分子生物学研究进展[J].动物医学进展，2007，28（2）:48-51.

[2]黄宇翔，李洪彬，刘力威，等.传染性法氏囊病（IBD）防治试验研究—1复方中草药煎剂及卵黄抗体防治效果比较 [J].中兽医学杂志，2006（2）:11-13.

[3]王尚荣.不同中草药组方对人工感染鸡传染性法氏囊病的疗效观察[J].江苏农业科学，2007（3）:151-157.

[4]刘玉锋，余锐萍，李慧姣，等.IBDV强毒株感染SPF鸡后法氏囊淋巴细胞的凋亡及调控机制[J].中国农业大学学报，2004，9（3）:45-48.

[5]侯玉慧，杜爱芳，胡松华.复方黄芩对雏鸡免疫功能的增强作用[J].中国兽医杂志，2006，42（3）:31-32.

[6]张玉杨，肖治军，郭成留，等.IBD细胞适应毒对鸡法氏囊重与体重比值的影响 [J].河南农业科学，2006（12）:91-92.

[7]张丽云，吉淑娟.瘟囊克注射液对人工感染传染性法氏囊病和鸡新城疫的疗效试验[J].河北北方学院学报:自然科学版，2007，23（3）:35-38.