现代鲜药抗肿瘤血管生成的研究进展

北京鲜动物药研制中心（100039）李建生

肿瘤血管生成是指肿瘤细胞诱导的微血管生长及肿瘤中血液循环建立的过程。1971年，哈佛大学教授Folkman首次提出肿瘤的生长和转移具有血管依赖性[1]。现代鲜药在肿瘤临床治疗中显示出了其独特的疗效，肿瘤血管生成的抑制作用也逐渐被认识。

1 肿瘤血管生成机制

当肿瘤体积小于2mm3或肿瘤细胞数量未达到107个时，组织间的弥散作用足可以提供肿瘤生长所必需的氧份和营养物质；而当肿瘤体积超过2mm3或肿瘤细胞数量超过107个时，仅仅靠弥散作用已经不能够满足肿瘤组织生长所需。此时，肿瘤细胞诱导其特异性血管网的形成，便开始发挥作用[1]。

肿瘤血管的生成方式有多种，如出牙式血管生成、套叠式血管生成、成血管细胞募集、血管选定、镶嵌体血管以及血管生成拟态等[2]。它们可能同时出现在同一类肿瘤中，也可能出现在同一个体不同肿瘤组织中，最终形成新的血管，为肿瘤的生长提供营养。肿瘤血管的生成是机体内环境、多种因子、基因、酶、分子等共同作用的结果[3]，它们既是肿瘤血管生成的原因，同时也是抑制肿瘤血管生成的靶点。不同的血管生成方式的分子机制不尽相同。肿瘤转移和血管生成在分子机制上有相似之处，都需要调节细胞粘附、基质降解和细胞运动，以便达到癌细胞转移和血管生成的目的。抗肿瘤血管的生成与抗肿瘤转移密切相关，调控肿瘤血管生成的任何一个环节，都可以抑制肿瘤的血管新生[4][5]。

2 现代鲜药的发展和特点

10余年前，以北京鲜药研制中心李建生教授为学术带头人，会同一批医药界的知名老专家，经过不断努力，成功研制开发了用于肿瘤治疗的鲜动物药制剂“金龙胶囊”和鲜动物植物药制剂“金水鲜胶囊”，并先后获得国药准字号批准上市。至此，现代鲜药产品的成功面世，标志着鲜药历史的发展迈入了新的时代，成为鲜药历史中的里程碑。2005年，现代鲜药组方及其制法获得国家专利，并实现了规范化、规模化、产业化发展，由此开辟了我国医疗、保健药品中一个崭新的领域，为临床治疗和健康保健增添了新的武器。

“现代鲜药”是对鲜药应用特色的继承和发展。现代鲜药是指在中医药理论指导下，以鲜活动植物体、菌类中药材为原料，运用低温冷冻现代生化分离提取工艺制备，并严格遵循规范标准而研制和生产出来的经国家药政部门批准，获得批准文号和药品注册证的新型中药制剂。因此，现代鲜药能够保持鲜药的特有成分和药效，保证了有效成分的天然结构，保持了药物的生理和药理活性，具有质量稳定可控、使用方便、剂型简便等特点。

现代鲜药代表之一的“金龙胶囊”主要成分为：鲜守宫、鲜金钱白花蛇和鲜蕲蛇，用于临床肿瘤防治疗效好。单独使用金龙胶囊可提高患者的生存质量、减轻患者痛苦、延长生存期。配合放化疗使用，可以保护血象、减轻肿瘤自身和放化疗引起的免疫抑制。手术前后配合应用具有抑制肿瘤术后复发、转移，延长生存期的作用。而长期服用金龙胶囊也未见明显的肝、肾功能的损害，说明了金龙胶囊具有较佳的安全性和有效性。

现代鲜药的另一代表“金水鲜胶囊”，是在金龙胶囊组方的基础上加入了鲜蛤蚧、鲜西洋参和冬虫夏草，针对于晚期肿瘤患者、放化疗患者和手术后患者，具有改善多脏器虚损及气阴两虚的特点。该组方具有补肺益肾、益气养阴、破瘀散结的功效，偏重于扶正抑瘤。

3 现代鲜药抑制肿瘤血管生成作用及机制

从Folkman教授提出抗肿瘤血管生成的概念以来，鸡胚尿囊膜（CAM）实验就成为研究药物对血管生成影响的经典体内实验之一。鸡胚尿囊膜肿瘤模型是研究人类肿瘤的一种较为理想的模型系统[6]。因此，本中心开展了现代鲜药金龙胶囊对CAM血管生成的抑制作用研究。结果表明，在一定剂量范围内，金龙胶囊能够抑制CAM新生血管网络的形成，金龙胶囊具有抗血管生成的作用。见附表及附图1。

基质金属蛋白酶（MMPs）是一种含锌离子的内肽酶，主要降解细胞外基质成分，在大多数正常组织中表达非常低或检测不出表达，但是在许多种肿瘤模型中都过度表达。本中心选用了高转移人肝癌裸鼠模型（LCI-D20）来探究金龙胶囊对肿瘤组织中MMPs表达的影响。在本实验中，将裸鼠平均分成3组，即生理盐水对照组、金龙胶囊0.75g/kg剂量组和金龙胶囊1.0g/kg剂量组，按照方案设计中的要求连续给予该模型裸鼠金龙胶囊4周，给药周期结束后处死裸鼠并取出接种瘤体，采用Western法检测肿瘤组织中MMP-2及MMP-9的含量。结果显示，经过金龙胶囊作用后，裸鼠肿瘤组织中MMP-2及MMP-9蛋白的表达量明显下降，且金龙胶囊各剂量组之间，以及与对照组间相比均有统计学差异。见附图2。

附表 金龙胶囊对CAM影响的血管计数比较（条）

附图1 金龙胶囊对新生血管网络生成的影响

附图2 金龙胶囊对肿瘤组织中MMP-2及MMP-9表达的影响

金龙胶囊对多种肿瘤的治疗中也证实了其有效性。为了更深入地探讨金龙胶囊对其他肿瘤的治疗作用，本中心与中国医学科学院肿瘤研究所合作进行了金龙胶囊对人类乳头瘤病毒（HPV）相关宫颈癌的作用研究，其中包括观察金龙胶囊对肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达量的影响。VEGF是特异性的内皮细胞促有丝分裂剂，与血管内皮细胞上的相应受体特异性结合后，能够增加血管通透性，并促进血管内皮细胞的增殖和迁移。其在大约60%的人类肿瘤中都过度表达，是肿瘤血管生成的主要调控者。实验首先建立了小鼠HPV相关宫颈癌模型，随后将小鼠随机分为生理盐水对照组、金龙胶囊低剂量组、金龙胶囊中剂量组和金龙胶囊高剂量组，连续干预HPV感染的宫颈癌小鼠模型14天，给药周期结束后用Western法分析金龙胶囊对VEGF蛋白表达量的影响。结果表明，与对照组比较，金龙胶囊治疗组小鼠瘤组织中VEGF表达水平明显低于对照组。

本中心还对金水鲜胶囊开展了抗血管生成作用研究。因目前临床肿瘤治疗中常采用放射治疗等手段，而现代鲜药联合放疗治疗肿瘤可以起到“1+1＞2”的效果。采用金水鲜胶囊联合放射治疗来探讨其对肿瘤血管生成的抑制作用。选择的指标为低氧诱导因子（HIF-1）及相关蛋白VEGF。HIF-1是目前发现的唯一一个高度特异性的，在缺氧状态下可发挥活性的核转录因子，可启动肿瘤血管生成相关靶基因VEGF的转录。目前，此项实验正在进行中，初步结果显示，金水鲜胶囊联合放疗使用，可有效抑制细胞中HIF-1和VEGF蛋白的表达。

4 启示与展望

与传统的肿瘤治疗方法相比，鲜药抑制肿瘤血管生成的最大优点在于：①毒副作用小，②具有广谱抗肿瘤作用及放大效应，③治疗特异性高，④不易产生耐药性等[7]。因此，以抗肿瘤血管生成为肿瘤治疗靶点，开发血管生成抑制剂已成为近年来的研究热点之一。目前，已有贝伐单抗、suntitinibmalate、sorafenib等肿瘤血管生成抑制剂类药物被美国FDA批准上市，而全球范围在研的抗血管生成药物也已接近100种[8]。

但有些临床前药效显著的药物临床作用并不突出[8]；抗肿瘤血管生成从理论上讲只能抑制肿瘤的生长和转移，不能达到消灭已有肿瘤细胞的目的[9]。这些问题是以抗血管生成为靶点治疗肿瘤的瓶颈。

对现代鲜药抗血管生成作用的深入研究，将对全面认识鲜药抗肿瘤机制，充分挖掘现代鲜药的潜力，扩大其应用范围以及解决西药抗血管生成开发中的问题等方面发挥巨大的作用。