Ki67、Survivin蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达及临床意义

刘起胜

(湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012)

细胞核增殖抗原(Ki67)、凋亡抑制蛋白(Survivin)的异常表达与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，但两者在原发性肝细胞癌(HCC)的发生、发展中是否有相关性，目前尚无定论。2001年1月～2010年12月，我们采用免疫组化SP法检测了Survivin、Ki67在HCC组织中的表达，旨在进一步探讨HCC的发生机制。

1 材料与方法

1.1 材料 收集我院手术切除的HCC组织标本60份(肿瘤组)，患者男37例，女23例，年龄23～70(46.43±11.78)岁;均经病理证实且未行化疗、放疗和免疫治疗。另取正常肝组织标本20份作为正常组(肝破裂切除及尸检标本)。两组一般资料无统计学差异。DAB显色试剂盒和S-P试剂盒，兔抗人Survivin、鼠Ki67抗原、SP试剂及DAB显色试剂盒。

1.2 Ki67、Survivin表达检测 采用免疫组化 SP法。实验步骤按试剂盒说明进行操作，以3%H2O2室温孵育5～10min除去内源性过氧化物酶的活性，微波抗原修复，常规免疫组化标记。已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判断标准:在组织切片中，以试剂盒中阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。Ki67以细胞核着棕褐色颗粒为阳性，每张切片随机观察10个具有代表性的高倍视野，计数100个肿瘤细胞的阳性细胞数，以≤10%为(－)，＞10%的细胞着色为阳性［1］。Survivin定位于胞质，少数胞核可同时染色。Survivin均以肿瘤细胞出现棕黄色颗粒为阳性表达。根据阳性肿瘤细胞占肿瘤细胞总数的比例判定阴阳性及其程度:阳性细胞数≤10%为阴性( －)，＞10%为阳性［2］。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计软件，计数资料采用χ2检验，两变量之间采用Spearman等级相关分析，以P≤0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki67、Survivin表达 肿瘤组及正常组Ki67阳性率分别为 76.7%(46/60)、30.0%(6/20)，Survivin 阳性率分别为 78.3%(47/60)、25.0%(5/20)，P 均 ＜0.01。

2.2 Ki67、Survivin表达水平与HCC病理参数的关系 见表1。

表1 Ki67、Survivin表达水平与HCC病理参数的关系

2.3 相关性分析 HCC组织中Ki67与Survivin表达呈正相关(r=0.566，P ＜0.01)。

3 讨论

Survivin蛋白是迄今发现最强的凋亡抑制因子，Survivin蛋白的表达与多种肿瘤的生物学(或)疾病分期有关［3］，mRNA原位杂交和免疫组化结果表明，Survivin在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中均有过表达，阳性表达率为30% ～100%［4］。本研究肿瘤组Survivin阳性率明显高于正常组，提示Survivin参与HCC的发生、发展，其可能是参与抑制恶性肿瘤细胞的凋亡过程中的重要因素。本研究显示，Survivin在肝细胞癌组织中的表达与患者性别、年龄均无关联，与癌栓形成及肿瘤转移、包膜侵犯有关联。众多学者认为，癌栓形成、肿瘤转移、包膜侵犯可以代表肝癌侵袭和转移程度和时效，Survivin阳性表达与他们相关，说明这种阳性表达可能与肝癌的侵袭和转移相关，但具体机制仍待进一步研究。

Ki67抗原是研究细胞增殖性的重要指标，Ki67抗原表达可反映肿瘤细胞增殖活性，与恶性肿瘤的发展、转移及预后高度相关［5］。Ki67的检测已被广泛用于反映肿瘤细胞增殖速度和预测肿瘤预后［6～8］。本研究发现，肿瘤组中Ki67阳性率明显高于正常组，Ki67在肝细胞癌组织中的表达与患者性别、年龄均无关，与包膜侵犯、癌栓形成及肿瘤转移均呈显著正相关。提示肿瘤组乳腺癌细胞的增殖活性高。并支持Ki67可作为反映乳腺癌细胞增殖活性和判断其生物学行为的一个指标。本研究还发现，Ki67和Survivin在肝细胞癌组织表达具有一致性，由此推测，其作为均与细胞增殖相关的分子，在癌细胞增殖过程中均不同程度地发挥了作用。

总之，联合检测Ki67和Survivin可能有助于对肝细胞癌恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估，进而为肝细胞癌的预后判断和合理治疗提供参考依据。

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