萎胃消对萎缩性胃炎癌前病变患者PTEN和ERK2蛋白表达的影响＊

钟 毅，赵自明，饶梅冰，戈 焰，范 明

(1.广东省第二中医院消化科，广州 510095;2.广东省中医研究所，广州 510095)

慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastdtis，CAG)是以胃黏膜固有腺体破坏﹑萎缩为特征的一种常见消化系统疾病，1978年世界卫生组织(WHO)将其列为胃癌的癌前状态，而在此基础上伴有不完全肠腺化生和(或)中、重度不典型增生则被视为癌前病变。目前对本病的治疗西医西药以对症治疗为主，疗效不甚确切，而中医药治疗 CAG疗效肯定，不仅可以逆转腺体的萎缩，甚至可使不完全肠腺化生及不典型增生逆转，因此一直受到医药学界的广泛关注［1］。本研究于2008年1月 ～2010年6月采用萎胃消治疗萎缩性胃炎癌前病变患者30例，探讨其对患者胃黏膜细胞增殖信号传导调控蛋白PTEN和ERK2表达的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本资料60例患者均为我院门诊和住院病人，全部符合2002年《中药新药治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究指导原则》［2］中慢性萎缩性胃炎伴胃黏膜上皮异型增生或/和不完全型结肠上皮化生的纳入标准。采用整体随机化方法分为治疗组和对照组。治疗组30例，其中男21例，女9例;平均年龄43岁±7岁;平均病程12±8年;伴不完全肠上皮化生23例，伴胃黏膜异型增生19例;对照组30例，其中男19例，女11例;平均年龄41岁±6岁;平均病程14±7年;伴不完全肠上皮化生21例，伴胃黏膜异型增生18例。2组患者治疗前性别、年龄、病程、临床症状、病理诊断比较均无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法

治疗组:口服萎胃消颗粒:太子参 15g，黄芪10g，白术 10g，薏苡仁 20g，石斛 10g，生地 10g，龟甲10g，天花粉 10g，枳实 12g，莪术 10g，山楂 20g，白花蛇舌草15g，半枝莲 15g，鸡内金10g，甘草 6g等，制成颗粒剂，1袋/次，1次/d;对照组:口服维酶素由北海阳光药业有限公司生产(批准文号国药准字H45021183，规格 100 × 0.2g/瓶)，1.0g/次，3 次/d，疗程3个月。

1.3 观察指标与方法

1.3.1 研究设备 Olympus CV-240电子胃肠镜，德国Zeiss公司;Microm-340E型石蜡切片机，英国Shandon公司;Hypercenter-XP组织脱水机，英国Shandon公司;Histocentre-2型组织包埋机、HPLAS-1000高清晰彩色病理图文报告管理系统。

1.3.2 临床症状和体征 用药前后纪录患者胃脘痛、胀闷、嗳气、纳差、乏力、嘈杂泛酸、口苦口干、大便不调等临床表现。

1.3.3 胃镜和常规病理组织学变化 治疗前1d、停药后1周内各做电子胃镜、病理检查1次。治疗前2周内停服相关抗炎药物。电子胃镜检测:治疗前后均根据电子胃镜的黏膜颜色改变、萎缩黏膜的范围、黏膜厚薄及黏膜血管透见程度、黏膜光泽变化等进行判断。病理学指标检测:活检部位以胃窦2块取自距幽门2cm～3cm处的大弯和小弯;胃体2块取自距贲门8cm处的大弯和小弯(约距胃角近侧4cm);胃角1块。对可能或肯定存在的病灶要另取标本。标本要足够大，达到黏膜肌层，不同部位的标本需分开装瓶。标本均常规用10%中性甲醛固定，石蜡包埋，H-E染色并切片，光镜下进行胃黏膜病理组织学检查，可依据固有腺体萎缩程度、黏膜肌层增厚、肠上皮化生、固有膜炎症、淋巴滤泡形成来检测。

1.3.4 胃黏膜细胞增殖信号传导调控蛋白PTEN和ERK2表达的免疫组化检测 采用链霉菌抗生物素-过氧化物酶方法(S-P法)检测。鼠抗人单克隆抗体 PTEN、ERK2及 S-P广谱超敏试剂盒(即用型)、DAB酶底物显色剂等均购自福州迈新生物技术开发公司。具体步骤:胃黏膜标本石蜡切片常规脱蜡、水化，PBS漂洗，浸泡于3%H2O2(20min)阻断内源性过氧化物酶，PBS(0.05mmol·L－1，pH7.4)洗3次，每次5min。组织切片置于 10mmol·L－1枸橼酸钠(pH6.0)溶液，微波炉中沸腾 10min冷却到室温，用 PBS(0.05 mmol·L－1，pH7.4)洗 3次，每次 5min。滴加正常山羊血清封闭液，室温20min。加入试剂，阴性对照用 0.05mmol·L－1PBS代替一抗，4℃ 过夜。用 PBS(0.05mmol·L－1，PH7.4)洗3次，每次5min。滴加生物素化二抗，20℃ ～37℃20min，用 PBS(0.05mmol·L－1，pH 7.4)洗 3次，每次5min。滴加试剂 SABC，20℃ ～37℃20min，用 PBS(0.05mmol·L－1，pH7.4)洗 3 次，每次 5min。DAB显色，蒸馏水洗终止反应。

1.4 统计学处理

用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量资料用t检验，计数资料用χ2检验。

2 结果

2.1 疗效评定标准

2.1.1 中医证候疗效判定标准 参照《中药新药治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究指导原则》［2］拟定，并将症状严重程度按无、轻、中、重分别记为0、1、2、3分。临床治愈:临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95%;显效:症状、体征明显改善，证候积分减少≥70%;有效:主要症状、体征明显减轻，证候积分减少≥30%;无效:症状、体征无明显改善甚或加重，证候积分减少不足30%。

2.1.2 疾病疗效判定标准 参照《中药新药治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究指导原则》［2］制定。临床治愈:胃镜复查黏膜炎症明显好转达轻度，病理检查证实腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生恢复正常或消失;显效:胃镜复查黏膜炎症好转，病理检查证实腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生恢复正常或减轻2个级度;有效:胃镜复查黏膜病变范围缩小1/2以上，病理检查证实炎症减轻1个级度以上，腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生减轻;无效:胃镜复查、病理检查达不到上述有效标准或恶化。

2.1.3 免疫组化结果判定 细胞浆内见棕褐色颗粒染色为阳性。每个切片选5个高倍视野，按阳性细胞数占同类细胞总数的百分比来计算。≤5%为阴性(－)，6% ～25%为表达阳性(+)，26%～50%为表达显著阳性(++)，＞50%为表达强阳性(+++)。并以各细胞表达强度积分:(－)为1分、(+)为2分，(++)为3分，(+++)为4分。观察染色情况，并进行各组染色强度积分统计。

2.2 2组患者中医证候疗效比较

表1显示，中医证候疗效总有效率治疗组为90%，对照组为56.67%，2组间比较差异有显著性(P ＜0.01)。

表1 2组治疗后中医证候疗效比较

2.3 2组患者治疗前后胃镜、病理变化情况比较

表2 2组治疗后胃镜、病理变化疗效比较

2组患者均在治疗前后进行内镜检查，经治疗后治疗组显效5例，有效16例，无效9例，总有效率为70%;对照组有效10例，无效20例，总有效率为33.33%，治疗组总有效率显著高于对照组(P＜0.01)。

2.4 2组患者治疗前后PTEN和ERK2积分变化的比较

表3 2组治疗前后PTEN和ERK2积分变化比较(±s)

表3 2组治疗前后PTEN和ERK2积分变化比较(±s)

注:与治疗前比较:△P ＜0.05，△△P ＜0.01

调控 治疗组(n=30)对照组(n=30)治疗前 治疗后 治疗前 治疗后PTEN 5.17 ± 0.43 5.83 ±0.12△蛋白4.79 ± 1.10 4.65 ±0.78 5.37 ± 1.08 5.37 ±2.02 ERK2 4.81 ±0.98 3.83 ±1.11△△

表3显示，黏膜PTEN积分表达情况比较，治疗组治疗后与治疗前比较，P ＜0.05(t=7.086)，可见中药治疗组黏膜PTEN表达经治疗有显著提高，而西药对照组PTEN表达水平变化不明显。黏膜ERK2积分表达情况比较，治疗组治疗后与治疗前比较，P ＜0.01(t=3.33)，可见中药治疗组黏膜ERK2表达经治疗有显著降低，而西药对照组ERK2表达水平变化不明显。

3 讨论

研究证明，胃黏膜上皮细胞癌变并非是由正常细胞一跃而成为癌细胞，而是一个渐进的过程，在这一过程中的不同阶段，致病因素作用于不同的基因并引起相关基因结构和表达水平改变，最终导致胃癌的发生。目前普遍认为，幽门螺杆菌→慢性胃炎→胃黏膜萎缩→肠化生→异型增生→胃癌，是胃癌发生的基本模式。在发展为恶性肿瘤之前，常经历多年持续的癌前变化，若能及早识别和治疗这些病变，不失为防治胃癌的有效途径［3］。近年来研究发现，胃黏膜病变尤其是肿瘤的发生发展与细胞增殖、凋亡关系密切，细胞增殖、凋亡的相互消长决定了许多胃黏膜病变的发生、发展及转归［4、5］。细胞信号传导通路控制着细胞的所有活动，许多癌基因和抑癌基因位于信号传导通路的不同部位，参与重要的细胞活动过程。蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)是近年新发现的抑癌基因，可负调控多种细胞信号传导通路，参与正常细胞的生长、发育并抑制肿瘤的发生［6］。细胞外信号调节激酶(ERKs)是丝裂原活化蛋白激酶家族的一个亚族，包括 ERK1和 ERK2，ERK 参与多种肿瘤的发生发展［7］。高琦等［8］研究显示，PTEN的表达与ERK2的表达呈负相关，随着PTEN表达的减弱，ERK2表达增强，反之亦然。提示在胃癌发生发展中，可能是由于PTEN蛋白的低表达或失表达，不能有效抑制ERK信号通路的异常激活，使细胞异常增殖及恶性转化，并促进肿瘤浸润和转移。

慢性萎缩性胃炎属中医胃痛或胃痞范畴。对CAG癌前病变的病机多数医家认为属本虚标实，本虚以脾胃气阴两虚为主，标实则有气滞、血瘀、湿阻、热毒蕴胃等且多呈兼之势，病初为实多虚少，以实为主，后期以虚为主，故在治疗中必须注意整体与局部兼治，通过调整整体功能的活动来促进胃黏膜局部病变的好转。根据中医辨证论治的原则，通过临床观察，学者认为胃癌前病变患者均表现不同程度的脾胃虚弱，故健脾益气为治疗的主要原则。许多医家也同样认为对胃癌前病变治疗亦在健脾益气的基础上，加清热解毒、护膜抑癌之品，可收较好的效果。而活血化瘀治疗胃癌前病变也是重要的方法和优势。研究表明，活血化瘀药可改善胃黏膜微循环，并建立侧枝循环，增加血流量，使局部缺血缺氧得到改善，促进局部炎症的吸收及萎缩腺体复生，因而活血化瘀是治疗胃癌前病变的关键。同样中医的“证”与组织学的变化亦证明，气滞血瘀型、异型增生者为最多，肠化生亦常见于脾胃气阴虚者，这为治疗方药的应用提供了客观证据［1］。

萎胃消是根据作者20多年临床治疗萎缩性胃炎经验总结拟定的复方制剂，该方太子参、黄芪、白术、薏苡仁益气健脾，石斛、生地、龟甲、天花粉养阴清热，枳实、莪术、山楂理气化瘀，白花蛇舌草、半枝莲、鸡内金解毒散结，全方功补兼施、调和胃肠，共奏益气养阴、理气化瘀、解毒散结之功效。

本研究采用随机、单盲、阳性药平行对照临床试验方法，观察萎胃消治疗慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生和/或胃黏膜异型增生30例。结果显示，治疗组能显著改善症状，逆转部分腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生，在症状疗效、胃镜和病理变化上都较对照组有明显优势。同样治疗组治疗前后患者胃黏膜细胞增殖信号传导调控蛋白PTEN和ERK2表达差异有统计学意义。表明萎胃消具有良好的胃癌前病变逆转治疗效应，其作用机理可能是通过上调抑癌基因蛋白PTEN的表达和有效抑制ERK信号通路的异常激活，从而达到抑制胃黏膜组织的过度增殖，逆转肠化及异型增生，防止细胞失控性生长等作用。

［1］王冠庭.胃黏膜癌前病变及其逆转的研究［J］.现代消化及介入诊疗，2002，7(上消化道疾病研究进展专辑):79-82.

［2］中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则［S］.北京:中国医药科技出版社，2002:124-129.134-139.151-155.

［3］王长洪，林一帆，杨 卓.胃炎肠上皮化生与胃癌［J］.现代消化及介入诊疗，2002，7(上消化道疾病研究进展专辑):74.

［4］Thompson CB.Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease［J］.Science，1995，267:1456-1460.

［5］Potten CS，Booth C.The role of radiation induced and spontaneous apoptosis in the homestasis of the gastrointestinal epithelium:a brief review［J］.Comp Biochem Physiol B Bioche m Mol Biol，1997，118:473-478.

［6］Wu H，Goel V，Haluska FG，et al.PTEN signaling pathways in melanoma［J］.Oncogene，2003，22(20):3113-3122.

［7］Feng DY，Zheng H，Tan Y，et al.Effect of phosphorylation of MAPK and Stat 3 and expression of c-fos and c-jun protein on hepatocarcinogenesis and their clinical significance［J］.World J Gastronerol，2001，7(1):33-36.

［8］高 琦，李继昌.PTEN和 ERK2在胃癌发生发展中的表达［J］.中国误诊学杂志，2005，5(5):813-815.