慢性自发性荨麻疹患者白细胞介素-35及白细胞介素-26表达水平

朱慧兰，杨　婧，李润祥，梁碧华，毕　超，梁艳华，戴京萍

(广州市皮肤病防治所，广州 510095)

慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria，CSU)是一种多种炎性细胞参与、累及皮肤黏膜的异质性疾病。目前研究发现，介导免疫耐受的CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)和介导炎性反应的辅助性T细胞(helper T cell，Th)17这两类不同的T淋巴细胞与CSU的发生有密切关系[1]。白细胞介素(interleukin，IL)-35由Collison等[2]于2007年发现并命名，归属于IL-12家族，具有免疫抑制功能，表达和分泌方式仅局限于Treg细胞。IL-26是由Knappe等于2000年在研究单纯疱疹病毒转化的T细胞时发现的炎性细胞因子，归属于IL-10家族，主要由Th17细胞分泌[3]。目前，国内外对于IL-35及IL-26的研究仍处于起步阶段，尚无关于CSU与IL-35及IL-26相关性的报道。本文通过对CSU患者外周血中IL-35及IL-26表达水平的检测和分析，探讨IL-35及IL-26与CSU发病机制的关系。

对象和方法

临床资料

2012年2月至6月广州市皮肤病防治所收入的CSU患者，根据CSU疾病活动评估分为静止期组及活动期组。入选标准：(1)反复起风团，单个风团皮损持续时间<24 h，伴或不伴瘙痒；(2)每天或几乎每天发作，病程持续6周以上；(3)除外物理性荨麻疹等有明确诱因的荨麻疹；(4)1个月内未使用糖皮质激素和(或)免疫抑制剂，采血前1周内未使用抗组胺药物；(5)非妊娠或者哺乳者，无严重心、肝、肾等主要器官病变及其他系统性疾病。健康对照组均来自同期广州市社区医院体检中心，体检结果正常，无感染、自身免疫病和肿瘤。采血均经研究对象知情同意。

CSU疾病活动评估

临床症状观察指标包括风团发作频率及瘙痒程度，所有CSU患者按0～4级标准评分，0级为静止期，1～4级为活动期[4](表1)。

主要试剂与仪器

人IL-35及IL-26酶联免疫吸附试验试剂盒(武汉优尔生科技股份有限公司，E92008HU)，全自动酶免分析仪(意大利SEAC公司，ALISEI QUALITY SYSTEM)。

IL-35及IL-26表达水平检测

分别用真空采血管抽取受试者静脉血3 ml，室温凝固30 min，1000 r/min离心15 min，取上清液微量离心管分装、标记后置于-80℃冰箱中冻存，备测。操作步骤严格按照IL-35及IL-26酶联免疫吸附试验试剂盒说明书执行。每个试剂盒使用前先做预实验，检测测试剂盒正常，标准孔设复孔，检测人IL-35及IL-26光密度值，根据标准孔和复孔的平均值绘制标准曲线。通过曲线回归方程计算出待测孔人IL-35及IL-26浓度。

统计学处理

表1　慢性自发性荨麻疹评分标准Table 1　The score criteria of chronic spontaneous urticaria

结　　果

基本资料

CSU患者89例，男42例，女47例，年龄为13～58岁，平均年龄为32.4岁。CSU静止期组41例，男21例，女20例；活动期组48例，男21例，女27例。对照组48例，男、女各24例，年龄为14～53岁，平均年龄为30.0岁。各组性别及年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

IL-35及IL-26水平组间比较

CSU活动期组血清IL-35水平明显高于CSU静止期组及对照组，差异有统计学意义(均P<0.01)；但CSU静止期组IL-35水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。

CSU活动期组患者血清IL-26水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；但CSU活动期组IL-26水平与CSU静止期组及CSU静止期组与对照组间差异均无统计学意义(均P>0.05)(表2)。

IL-35及IL-26水平与临床症状相关性

CSU患者IL-35水平与临床症状评分呈显著正相关，但与病程无相关；CSU患者IL-26水平与临床症状评分呈负相关，但与病程无相关(表3)。

讨　　论

本研究发现，CSU活动期组IL-35表达水平较健康对照组及CSU静止期组明显升高，提示CSU患者体内可能存在IL-35表达水平的异常。经过有效治疗后，患者症状减轻甚至消失，CSU静止期IL-35表达水平明显低于活动期组。IL-35是由IL-27的EBI3和IL-12的p35组成的异源二聚体[5]，两组相关基因均可发挥抑制作用。IL-35可选择性抑制效应细胞，其主要由Treg细胞分泌。Langhans等[6]研究发现，在慢性肝炎和自限性慢性丙型肝炎感染患者的Treg细胞和效应细胞培养基中加入抗IL-35物质能有效阻断抑制效应，IL-35可能是Treg细胞发挥免疫抑制作用的关键因子之一。大量研究结果显示，无论是接种注射IL-35还是在体外培养中加入IL-35，均可促进Treg细胞增殖，同时抑制Th17的分化和IL-17的合成[7]。以上结果提示，IL-35可能通过刺激Treg细胞分化增殖抑制Th17细胞生成，导致细胞免疫系统紊乱，从而参与CSU的发生发展过程。

表2血清白细胞介素-35及白细胞介素-26水平组间比较

分组例数白细胞介素⁃35(pg/ml)白细胞介素⁃26(pg/ml) 健康对照组4894 57±11 1160 60±8 83 CSU静止期组41108 71±25 3856 10±10 30 CSU活动期组48147 94±17 08△∗43 95±7 73∗

CSU：慢性自发性荨麻疹；与CSU静止期组比较，△P<0.01；与健康对照组比较，*P<0.01

IL-26是由IL-20Rl和IL-10R2组成的异二聚体。部分学者通过对IL-26基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)的研究发现，IL-26存在两个异型单核苷酸D12S2510 和D12S2511，这两个异型单核苷酸与自身免疫性疾病和变态反应性疾病的易感性相关，异型单核苷酸rs2870946与介导炎性疾病发生密切相关[8]。IL-26主要由Th17细胞分泌，当IL-17分泌增多时，IL-26表达水平增加；IL-26可能促进IL-17细胞因子表达，提示IL-26可能可“放大”Th17的细胞功能。本研究发现，CSU活动期患者IL-26表达水平较健康对照组明显降低，推测可能系Th17细胞分化相对减少，导致T细胞活动异常，从而参与CSU发病。本研究还发现，CSU患者外周血IL-35及IL-26表达水平和症状评分明显相关。说明IL-35及IL-26血清表达水平可能是CSU活动程度的有效指标之一，检测其表达水平有助于病情活动水平的判断。

由于IL-35的结构和功能使其与多种疾病相关。Niedbala等[9]研究发现，IL-35可改善小鼠胶原性关节炎(collagen induced arthritis， CIA)临床症状，有效阻止关节破坏。Huang等[10]发现，经肺给予pVAX-IL35 DNA，可减轻小鼠地塞米松敏感性嗜酸粒细胞性气道炎性反应。张耀源和张孔[11]发现，支气管哮喘患者血清中IL-35水平较健康对照组低，随着治疗深入与疾病控制，IL-35表达水平呈上升趋势直至与健康对照组无明显差异，据此提示IL-35可能作为一种保护因子参与哮喘治疗水平的评估。Langhans等[6]研究证明，丙型肝炎病毒中Treg细胞通过分泌IL-35抑制效应T细胞分化，发挥免疫抑制作用。以上研究均提示，IL-35作为抑制性细胞因子在自身免疫性疾病和病毒感染性疾病中发挥着重要作用。炎性疾病和自身免疫性疾病都与免疫系统异常调控有关，IL-26的作用机制还有待深入研究，而其在人体内的低表达也给研究带来了挑战。

表3　慢性自发性荨麻疹患者IL-35及IL-26表达水平与临床症状评分及病程相关性分析Table 3　Correlation analysis between expression of IL-35 and IL-26 in the CSU patients and score of clinical symptom and course of disease

综上所述，通过检测IL-35及IL-26表达水平，推测这两种细胞因子可能在CSU的发病中发挥一定作用，而作用机制仍有待研究。另外，随着研究深入，IL-35有可能为CSU的临床评价和治疗带来新思路。

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