顶空气相色谱法测定唑来膦酸中有机溶剂残留量

李玮玲

(广东省广州市药品检验所，广东 广州 510160)

唑来膦酸是一种特异性地作用于骨的二磷酸化合物，能抑制因破骨活性增加导致的骨吸收，临床用于治疗恶性高钙血症，控制恶性肿瘤骨转移，并能改善多发性骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤治疗的疗效[1－2]，目前主要有注射用唑来膦酸等制剂。唑来膦酸的制备工艺比较复杂，各个厂家所用到的溶剂略有差异，主要使用了甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷和正己烷等。笔者建立了顶空毛细管气相色谱法测定唑来膦酸中的6种残留溶剂，方法快速，准确，灵敏度高。

1 仪器与试药

Aglient 7890A型气相色谱仪;Aglient G1888顶空进样器;氢火焰离子化检测器。甲醇对照品(广州化学试剂厂，批号为20090905－2，含量不低于99.5%);无水乙醇对照品(广州化学试剂厂，批号为20100501－2，含量不低于99.7%);丙酮对照品(广州化学试剂厂，批号为090201－2，含量不低于99.5%);乙腈对照品(天津市协和昊鹏色谱科技有限公司，批号为20090902－2;含量不低于 99.9%);正己烷对照品(Merck，批号为I270991601，含量不低于98.0%);唑来膦酸样品[山东新时代(批号为090901)，诺华(批号为C0001)，南京制药厂(批号分别为ZA20090801，ZA20090802，ZA20090803)];试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用氰丙基苯基(6%)－二甲基聚硅氧烷(或极性相近，94%)为固定液的毛细管柱为色谱柱;程序升温:起始温度40℃，维持10 min，再以每分钟35℃的速率升温至220℃，维持5 min;进样口温度为250℃;氢火焰离子化检测器(FID);检测器温度为280℃;采用恒压模式，柱前压为15 psi，分流比为10∶1;顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30 min，传输管温度为90℃。

2.2 溶液制备

分别取甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷与正己烷各适量，精密称定，用N，N－二甲基甲酰胺溶液定量稀释制成每l mL中分别含甲醇 0.3 mg，乙醇 0.5 mg，丙酮 0.5 mg，乙腈 0.041 mg，二氯甲烷0.06 mg和正己烷0.029 mg的混合溶液，摇匀，精密量取2 mL，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。取样品约0.2g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入N，N－二甲基甲酰胺溶液2 mL，密封，作为供试品溶液，色谱图见图1。

图1 气相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:取甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷与正己烷对照品约 1，1.6，1.6，0.14，0.2，0.1 g，精密称定，置 100 mL 量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，分别取上述贮备液 1，2，3，5，10 mL，分别置 100 mL 量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取2 mL，置顶空瓶中，密封，进样，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品质量浓度作横坐标(X)、峰面积作为纵坐标(Y)，得到各成分测定的线性方程、相关系数及线性范围见表1。

精密度试验:分别制备对照品溶液6份，进样，记录色谱图，测定峰面积值。结果甲醇的 RSD为0.8%，乙醇的 RSD为0.8%，丙酮的 RSD为0.7%，乙腈的 RSD为1.2%，二氯甲烷的 RSD为1.0%和正己烷的 RSD为1.0%，表明方法的进样重复性良好。

稳定性试验:取同一对照品溶液，分别于0，6，12 h时进样，记录色谱图，测定峰面积值。结果峰面积没有显著性变化，表明对照品在12 h内稳定。

表1 残留溶剂测定线性试验结果

加样回收试验:按标示量的100%设计回收试验，共测定6份样品。结果甲醇平均回收率为100.7%，RSD为0.9%;乙醇平均回收率为101.3%，RSD为0.8%;丙酮平均回收率为100.7%，RSD为0.7%;乙腈平均回收率为97.5%，RSD为1.6%;二氯甲烷平均回收率为102.3%，RSD为1.2%;正己烷平均回收率为96.9%，RSD为1.0%。

检出限测定:在拟订色谱条件下，在色谱图主成分的峰高为基线噪音3倍时，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷和正己烷的检出限分别为 75.0，60.5，44.6，6.98，11.7 ng/mL 和 7.86 pg/mL。

2.4 样品含量测定

分别制备、吸取对照品溶液与供试品溶液，进样，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法以峰面积计算标示百分含量。样品测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果(%)

3 讨论

乙腈、甲醇、二氯甲烷和正己烷均为二类溶剂，限度分别0.041%，0.3%，0.06%，0.029%;乙醇和丙酮为三类溶剂，限度均为0.5%[3]。本试验测定的这6种成分的残留量均较低。

唑来膦酸原料的生产厂家较多，生产的工艺均不相同，使用的溶剂不同，重结晶的方法和所用的溶剂均有差异，唑来膦酸原有的标准[4－8]较多，但均不控制有机溶剂残留量，为此本试验建立了测定唑来膦酸中的有机溶剂残留量的方法。

本试验测定的6种溶剂，极性和熔点方面的差异，可以采用顶空－程序升温的气相色谱法测定。

[1]何杰文，范 华，梁桂才.唑来膦酸的临床应用[J].中国现代药物应用，2012，6(18):92 －93.

[2]王 增，卢红阳，翁 琳.唑来膦酸抗肿瘤作用的临床研究进展[J].中国临床药理学与治疗学，2011，16(8):945－950.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录61.

[4]YBH21592004，国家药品标准(试行)[S].

[5]YBH21432004，国家药品标准(试行)[S].

[6]YBH21172004，国家药品标准(试行)[S].

[7]YBH21302004，国家药品标准(试行)[S].

[8]YBH21542004，国家药品标准(试行)[S].