论人丹质量标准

邓倩雯 林颖怡 宋丽莉

人丹收载于卫生部《药品标准》中药成方制剂第19册，处方由薄荷脑、肉桂、木香、小茴香、草豆蒄、甘草、儿茶、冰片、桔梗、樟脑和丁香罗勒油等11味中药粉末组成的成方制剂，具有祛风健胃功能。主要用于消化不良，恶心呕吐，晕船，轻度中暑酒醉饱滞［1］。原标准质量仅有桔梗和甘草的薄层色谱鉴别。由于该处方主要是由中药材粉末组成，故本实验采用简单方便，快捷准确的显微鉴别，对处方中的木香、小茴香和草豆蒄分别在显微镜下检测，对肉桂药材采用高效液相色谱法进行含量测定，以更精确的监测药材的投料量［2］，这样能更好的、更有效的对人丹进行质量控制。

1 仪器与试剂

显微镜:OLYMPUS BX-41系统生物显微镜;摄像放大倍数:10×40;数码成像装置:MC 30;高效液相色谱仪:安捷伦1100;色谱柱:Diamonsil(钻石)-C18 ODS(4.6 mm×250 mm，5μm);电子天秤:Sartorius-CPA225D，十万分之一;乙腈:色谱纯，Merck KGaA;水为超纯水;其余试剂均为分析纯;桂皮醛(批号:111710-200513中国药品生物制品检定所购进);人丹及人丹缺肉桂阴性样品(广州王老吉药业股份有限公司生产)。

2 实验方法与结果

2.1 木香、小茴香、草豆蒄药材粉末显微鉴别 本品为灰褐色粉末，气味香而辛凉。取样品少许，制片后放置显微镜下观察，并进行显微特征描述，其相同的显微特征分别为:木香:木栓细胞:淡黄棕色。表面观呈类多角形，大小不一，排列不甚整齐，垂周壁有的微波状弯曲。小茴香:网纹细胞，位于中果皮维管束柱两侧，淡黄色。呈类长方形或类长圆形，直径 25 ～55 μm，长至102 μm，壁厚，微木化，具网状纹孔，纹孔大，卵圆形或类矩圆形，直径3～11μm，长7～27 μm。草豆蔻:外胚乳细胞:呈类长方形或不规则延长，壁稍厚，有的呈连珠状增厚，有细小纹孔，细胞内充满由细小淀粉粒集结成的淀粉团，淀粉粒直径1～5 μm，脐点点状，淀粉团中包埋有细小方晶［3，4］。见图 1。

图1 人丹粉末显微特征图

2.2 肉桂含量测定

2.2.1 波长测定 安捷伦1100高效液相色谱仪，检测器:DAD。配制桂皮醛对照品溶液及人丹(缺肉桂)阴性对照溶液，在200～400nm波长范围内进行光谱扫描。扫描结果显示桂皮醛对照品溶液在290nm处有最大吸收波长，人丹(缺桂皮醛)阴性对照溶液，在290nm处无吸收波长。参照《中国药典》(2010年版一部)肉桂质量标准，选定290 nm为检测波长，结果见附图2～3。

图2 桂皮醛对照光谱图

图3 人丹缺桂皮醛阴性对照光谱图

2.2.2 色谱条件 流动相:乙腈-水(36:64);检测波长:290nm;色谱柱:Diamonsil(R)钻石 C18(5μm，250 mm ×4.6 mm)，柱系列号:8131121;柱温:35℃。理论塔板数按桂皮醛峰计算应不低于4000。

2.2.3 供试品溶液与对照品溶液配制 供试品溶液的配制:取人丹粉末2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，冰水中超声处理20 min，取出，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，即得［5］。

对照品溶液的配制:取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含10μg的溶液，摇匀，即得。

阴性对照品溶液的配制:按人丹处方量(缺肉桂药材)，配制阴性样品，按以上供试品溶液的制备方法，取同样比例的量，制备阴性对照品溶液。

2.2.4 专属性考察 按上述色谱条件操作，将桂皮醛对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，注入液相色谱仪中，得高效液相色谱图，阴性对照无干扰。结果见附图4。

图4 从上至下为:对照品溶液、样品溶液和阴性溶液色谱图

2.2.5 线性关系考察 取桂皮醛对照品溶液，分别为每1 ml 各 含 1.2631μg、2.5262μg、5.0525μg、10.1050μg、20.2101μg、40.4202μg、80.8403μg，以 10μL 为进样量，按上述所制定的色谱条件进行测定，得峰面积。以各峰面积为纵坐标，各对照品的浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，桂皮醛含量在1.2631～80.8403μg内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为:Y=43.423X +12.208，R2=0.9999。

2.2.6 精密度试验 取对照品溶液10μL，连续进样5次，测定桂皮醛峰面积值，计算得RSD为0.22%。结果所建立方法具有良好的精密度。

2.2.7 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24、72 h内，分别进样 10 μL，计算桂皮醛含量，得 RSD 为1.69%。结果制备的供试品溶液在72 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份，测定桂皮醛含量，计算，得RSD为0.70%。结果该方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 精密称定已知含量的人丹样品2.0 g，分别精密加入一定量的桂皮醛对照品溶液，测定，计算回收率，结果见表1。

表1 人丹加样回收率试验测定结果(%)

2.2.10 样品测定 分别精密称定三个批号的人丹，进行含量测定分析，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 显微鉴别，采用木香、小茴香、草豆蔻原药材中在显微镜下的特征性的细胞组织与人丹制剂中在显微下特征性的细胞组织进行对比，选择确定各相应药材的特征性的细胞组织。

3.2 处方中的肉桂也是主要成份之一，故只选用了桂皮醛作为本品的含量指标进行考察。桂皮醛的提取用甲醇作为溶剂，分别在冰水中超声提取10、20、30 min，和在冰水中超声提取10 min后放置过夜，再超声提取10 min，结果在冰水中超声提取20 mim相对含量最高。

3.3 对本品中的木香、小茴香、草豆蔻进行显微鉴别，肉桂作为高效液相色谱法的含量测定，它们具有特征性强，专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于人丹中药材的质量控制和分析。

［1］ 中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂(第19册)，1998，6.

［2］ 国家药典委员会.中国药典.2010年版(一部).北京:化学工业出版社，2010:127，附录Ⅵ D

［3］ 徐国均.《中药材粉末显微鉴定》人民卫生出版社，1986:607，39，547，403.

［4］ 国家药典委员会.中国药典.《中药粉末显微鉴别彩色图集》广东科技出版社，1999，150，90，234，78.

［5］ 马蓉蓉;唐意红;孙兆林;季宇彬;黄成钢;，RP-HPLC测定不同产地肉桂中桂皮醛和肉桂酸的含量，中国现代中药，2008年04(10):9-11.