UPLC法测定藿香正气口服液中3种核苷

何 丹，杨 林，秦少容，张景勍

(1.重庆医科大学药学院，重庆 400016;2.重庆市食品药品检验所，重庆 401121;3.太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，重庆 408000)

藿香正气口服液是由苍术、陈皮、厚朴、生半夏等共十味中药组成的复方口服制剂，具有解表化湿，理气和中之功效。用于外感风寒、内伤湿滞，夏伤暑湿，头痛昏重，脘腹胀痛，呕吐泄泻，胃肠型感冒［1］。目前对藿香正气制剂的定量测定多见于采用HPLC法对厚朴酚、和厚朴酚、陈皮苷及百秋李醇进行测定［2-5］，还未见藿香正气口服液中核苷类成分量测定的报道。核苷类成分是半夏药材中含有量较高的活性成分之一，药理活性明确，且核苷类成分含有量的高低是判别半夏药材及饮片质量优劣的重要依据［6］，也直接影响到制剂的药效。目前关于中药材及中成药中核苷类成分的测定方法的文献报道主要是采用 HPLC法［7-9］，未见采用UPLC法。本实验采用 UPLC(Ultra Performance Liquid Chromatography)法同时对藿香正气口服液中的尿苷、鸟苷及腺苷进行测定。该方法高效、快速，重复性和精密度良好，适用于藿香正气口服液中3种核苷类成分的测定。

1 仪器与试药

Waters ACQUITY UPLC;藿香正气口服液(批号11111571、11111896、11111902，太极集团重庆涪陵制药厂);尿苷对照品(批号100635-200401，中国食品药品检定研究院);鸟苷对照品(批号E-0575，上海同田生物有限公司);腺苷对照品(批号110879-200202，中国食品药品检定研究院)。甲醇为色谱纯(山东禹王实业总公司化工厂)，实验用水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH Cl8色谱柱(1.7μm，2.1 mm×50 mm);柱温30℃;流动相为水-甲醇按表1梯度洗脱;检测波长254 nm;体积流量0.5 mL/min;进样量5μL，理论塔板数按尿苷峰计算不低于2000。

表1 梯度洗脱Tab.1 Mobile phase gradient elution

2.2 对照品贮备液的制备 精密称取尿苷对照品0.02058 g、鸟苷对照品0.01146 g和腺苷对照品0.01006 g，置100 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，加水稀释至刻度，摇匀。得尿苷为205.8μg/mL、鸟苷为114.6μg/mL、腺苷为100.6μg/mL的混合对照品贮备液。

2.3 供试品溶液的制备 取批号为11111571、11111896和11111902的藿香正气口服液适量，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。

3 结果

3.1 线性关系考察 精密量取混合对照品贮备液0.5、0.8、1、2、4、5 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得系列混合对照品溶液。按2.1项下色谱条件测定，以峰面积Y对质量浓度X(μg/mL)进行线性回归。尿苷的回归方程为Y=87703X－3811(r=0.9999);鸟苷的回归方程为Y=60604X－1478(r=0.9999);腺苷的回归方程为Y=61913X－524(r=0.9999)。结果表明，尿苷在10.29～102.9μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系;鸟苷在5.73～57.3μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系;腺苷在5.03～50.3μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.2 精密度试验 取混合对照品溶液，按2.1项下方法连续进样6次，测定峰面积。结果尿苷、鸟苷和腺苷的RSD分别为0.34%、0.35%和0.36%。符合精密度试验要求。

3.3 稳定性试验 取混合对照品溶液，室温下放置0、1、2、4、6、8 h，按2.1项下色谱条件分别进样5μL测定峰面积。结果峰面积基本不变，尿苷、鸟苷和腺苷的RSD分别为0.31%、0.33%和0.32%，表明溶液在8 h内基本稳定。

3.4 重复性试验 取批号为11111571藿香正气口服液，按供试品配制方法平行配制6份，按2.1项下方法进样分析，按外标法以峰面积计算，尿苷、鸟苷和腺苷的平均质量浓度分别为38.33μg/mL、23.40μg/mL 和 27.48 μg/mL，RSD 分 别 为1.45%、1.19%和0.98%。

3.5 加样回收率试验 取已知含有量的藿香正气口服液，精密量取5 mL，共27份，置10 mL量瓶中，分别精密加入相当于制剂中尿苷、鸟苷和腺苷含有量的80%、100%和120%的混合对照贮备液，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，按2.1项下色谱条件进样5μL，按外标法计算回收率。结果见表2～4。结果尿苷、鸟苷和腺苷的平均回收率分别为97.25%、98.34%和98.88%，RSD分别为2.46%、2.18%和1.89%。

表2 尿苷回收率Tab.2 Results of recovery tests for uridine

表3 鸟苷回收率Tab.3 Results of recovery tests for guanosine

表4 腺苷回收率Tab.4 Results of recovery tests for adenosine

3.6 样品测定 3批样品按供试品配制方法配制，按2.1项下方法进样分析，计算，结果见表5，色谱图见图1。

表5 藿香正气口服液测定结果(n=3)Tab.5 Determination results of Huoxiang Zhengqi Qral Liquid(n=3)

图1 藿香正气口服液测定色谱图Fig.1 UPLC chromatograms of Huoxiang Zhengqi Oral Liquid

4 讨论

超高效液相色谱技术采用1.7μm颗粒度色谱柱填料，与传统的5.0μm颗粒度的色谱柱填料的HPLC技术相比能获更高的柱效，并且在更宽的线速度范围内柱保持恒定，因而有利于提高流动相速度，缩短分析时间，提高分析通量［10］。同时可显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度，特别适用于中药指纹图谱研究和中药复方制剂多成分的分析测定［11-15］，已成为继HPLC后现代分析的重要手段。从本实验的结果，UPLC法测定藿香正气口服液中核苷类成分分离效果好，方法准确可靠。

《中国药典》2010年版中藿香正气口服液中含量测定项规定对厚朴酚与和厚朴酚和橙皮苷进行测定，作为质量控制指标［1］。本实验中当甲醇比例增加后洗脱出的成分较多，在下一步研究工作中可同时测定以上成分。

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