宫颈癌存活蛋白的表达及其与预后的关系

成 杰,程 慧，张 蓓※,冯 强

(徐州市中心医院 1妇产科， 2病理科，江苏 徐州 221009)

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，早期患者预后较好，但晚期宫颈癌预后较差。目前研究认为，宫颈癌的发生、发展与凋亡相关基因关系密切[1-2]。近年来研究发现凋亡抑制因子存活蛋白在多种人类恶性肿瘤中高表达，并能强烈抑制细胞凋亡[1]。本研究应用免疫组织化学S-P法检测存活蛋白在宫颈癌组织及癌旁组织的表达，探讨宫颈癌组织中存活蛋白的表达及其与患者预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集20007年1月至2009年12月徐州市中心医院收治的70例手术切除的临床病理资料保存完整的宫颈癌石蜡切块，癌旁组织取自距癌组织0.5～1.0 cm。70例宫颈癌患者年龄为29～74(48.6±13.2)岁；其中年龄≥50岁38例，年龄<50岁32例；鳞状细胞癌47例，腺细胞癌23例；病理分级：G1～G2级39例，G3级31例；病理组织学分级：高分化26例，中低分化44例；根据2003年再次修订后的国际妇产科联盟提出的分期标准进行临床分期[2]：Ⅰ期35例，Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期26例；肿瘤直径≥4 cm 41例，<4 cm 29例；淋巴结转移：有43例，无27例。纳入资料重新切片并由病理医师再次确诊，所有病例术前未行放化疗。另取20例正常宫颈组织作为对照组，年龄为27～72(47.3±14.1)岁。

1.2免疫组织化学 实验用兔抗人存活蛋白单克隆抗体购自福建迈新生物工程公司，存活蛋白的表达采用免疫组织化学S-P法，S-P免疫组织化学试剂盒购自北京中杉桥生物公司，实验步骤按试剂盒说明书进行。磷酸盐缓冲溶液代替一抗作为阴性对照，已知抗体阳性标本为阳性对照。

1.4结果判定标准 存活蛋白阳性染色信号呈棕色细小颗粒，均位于细胞质。随机抽取10个高倍视野，结果判断采用半定量方法。按着色强度划分：细胞无着色，0分；细胞着色为浅黄色，1分；细胞着色为棕黄色，2分；细胞着色为棕褐色，3分。阳性细胞百分率：阴性，0分；阳性细胞<10%，1分；阳性细胞11%～50%，2分；阳性细胞51%～75%，3分；阳性细胞>75%，4分。两者积分相乘分为四个等级：0～2分为-； 3～5分为+； 6～8分为++； 9～12分为+++。3分及以上为阳性[3]。

2 结 果

2.1存活蛋白在宫颈癌、癌旁及正常组织中的表达 存活蛋白阳性染色定位在肿瘤细胞质中，呈棕色细小颗粒，也可以呈弥漫胞质分布(图1)。在宫颈癌组织中存活蛋白阳性表达率高于正常组织(χ2=15.82，P<0.05)；癌旁组织中存活蛋白阳性表达率高于正常组(χ2=7.11，P<0.05)，低于宫颈癌组(χ2=5.37，P<0.05)(表1)。

表1 存活蛋白在宫颈癌、癌旁及正常组织中的表达

图1 存活蛋白在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达(×400) 图A:存活蛋白在宫颈癌组织中呈强阳性表达，肿瘤细胞质内可见棕黄色颗粒；图B:存活蛋白在癌旁组织中呈弱阳性表达，肿瘤细胞质内可见棕黄色颗粒

2.2存活蛋白的表达及与宫颈癌临床病理因素的关系 70例宫颈癌组织中，存活蛋白阳性率与患者年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结有无转移无关(P>0.05)，与肿瘤组织学分级、病理分期及病理分级有关(P<0.05)(表2)。

表2 存活蛋白与宫颈癌临床病理因素间的关系

2.3存活蛋白与宫颈癌患者生存率的关系 以病理确诊为宫颈癌时为观察起点(以月计算)，70例患者随访至2012年5月。经生存分析发现，存活蛋白阴性组患者生存率高于存活蛋白阳性组(χ2=26.275，P<0.05)(图2)。

图2 存活蛋白阳性与阴性宫颈癌患者生存曲线

3 讨 论

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，居女性恶性肿瘤的第二位，仅次于乳腺癌。宫颈癌的发生和发展是一个多种因素参与的复杂病理过程。流行病学研究显示，细胞癌基因的激活、抑癌基因的失活和细胞凋亡的抑制均参与了宫颈癌前病变和宫颈癌的发生、发展[3]。近年来，研究发现细胞凋亡受抑制是正常细胞演变成恶性细胞的关键过程，参与细胞凋亡的基因较多，其中凋亡蛋白抑制因子家族是一类抑制凋亡的因子[4]。

存活蛋白是近年来新发现的凋亡抑制因子，它不仅抑制细胞的凋亡还参与对细胞分裂的调控，促进了细胞的异常增殖和恶性转化[5]。存活蛋白特异性表达于胚胎发育组织及分化未成熟组织，并在许多恶性肿瘤组织中高表达，而正常成人组织不表达(胸腺、胎盘、子宫内膜除外)[1-2]。本研究结果显示，正常宫颈组织中存活蛋白表达率较低，宫颈癌和癌旁组织中存活蛋白明显升高，癌组织较癌旁组织更高，与国内外研究结果一致[4,6]，提示存活蛋白的存在代表着细胞生物学转化的中间环节，其水平变化在正常宫颈组织向宫颈癌转化中起重要作用[6]。同时本研究结果表明，宫颈癌存活蛋白阳性的46例中，中低分化34例，高分化12例，可见肿瘤恶性程度越高，存活蛋白阳性率越高。Kim等[3]研究发现，存活蛋白表达与宫颈癌的病理演进有关，从轻度非典型增生到癌的演进中存活蛋白表达逐渐升高。有研究表明，存活蛋白在宫颈组织中的表达随宫颈分化程度的降低而升高[4]。本研究结果显示，存活蛋白在宫颈癌中的表达情况与患者的年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结有无转移均无相关性。但随着组织学分级和病理分期、分级的增加，存活蛋白过表达也随之升高，差异有统计学意义，说明存活蛋白基因表达程度与肿瘤的发生、发展和恶性程度相关，存活蛋白的高表达预示着肿瘤具有较高的局部浸润活性和转移潜能，预后更差，在一定程度上反映了宫颈癌的恶性程度[5]。以上特点使存活蛋白有可能作为宫颈癌诊断及判定预后的重要指标之一，也为肿瘤治疗提供了新的靶点。

有文献报道，存活蛋白与多种恶性肿瘤预后相关。恶性肿瘤的表达率显著地高于良性病变，且与肿瘤细胞的增殖活性间具有正相关性，过度表达者生存期短[7-10]。Bache等[6]观察44例经放射治疗后的宫颈癌患者存活蛋白表达情况时发现，晚期宫颈癌放疗患者中存活蛋白表达水平与患者的5年生存率明显相关。本研究结果显示，存活蛋白阳性患者生存率低于阴性组，提示存活蛋白阳性意味着疾病复发的危险性较高，生存时间缩短，预后不良，对指导治疗有一定作用。

综上所述，存活蛋白在宫颈癌中的异常表达与宫颈癌的发生、发展密切相关，有望成为早期诊断及预测宫颈癌预后的一个重要指标。

[1] Siripong P,Hahnvajanawong C,Yahuafai J,etal.Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from Rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Biol Pharm Bull,2009,32(7):1251-1260.

[2] Temme A,Rieger M,Reber F,etal.Localization,dynamics,and function of survivin revealed by expression of functional survivin DsRed fusion proteins in the living cell[J].Mol Biol Cell，2003,14(1):78-92.

[3] Kim HS,Shiraki K,Park SH.Expression of survivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J].Anticancer Res,2002,22(2A):805-808.

[4] 慧燕,黄利鸣,叶红.Survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的定量分析及其临床价值的评估[J].肿瘤防治研究,2008,35(1)：39-42.

[5] 李素文,朱宝申,孙丽娟,等.Survivin在宫颈癌组织中表达规律及临床意义[J].河北医药,2009,31(14)：1743.

[6] Bache M,Holzapfel D,Kappler M,etal.Survivin protein expression and hypoxia in advanced cervical carcinoma of patients treated by radiotherapy[J].Gynecol Oncol,2007,104(1):139-144.

[7] 孙延霞,石张镇,卢振霞.Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义[J].中国实验诊学,2012,16(5):844-845.

[8] 朱华,施铮铮,杨孝军,等.Survivin、Bcl-2、HPV 16/18 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及临床意义[J].实用妇产科杂志,2010,26(1):57-58.

[9] 朱华,胡燕帅,茨霞.survivin、bcl-2在宫颈癌和癌前病变组织中的表达及与人乳头瘤病毒16/18感染的相关性[J].中华医学杂志,2010,90(7):469-471.

[10] 秦前波,汪名飞,江从庆,等.结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与Survivin 表达的关系[J].中华实验外科杂志,2011,28(10):1713-1715.