IgG4相关疾病与人类白细胞抗原-DR、DQ等位基因的相关性

于立杰，陈　雨，张盼盼，张　文

(中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院风湿免疫科 风湿免疫病学教育部重点实验室， 北京 100730)

ChinJAllergyClinImmunol，2016，10(4)：346- 350

IgG4相关疾病(IgG4-related disease，IgG4-RD)是一种新近被命名的慢性炎症性自身免疫性疾病，主要表现为受累脏器的肿大，血清中IgG4浆细胞增多，组织中IgG4阳性浆细胞浸润为主要特点，其临床疾病谱广泛，可累及淋巴结、鼻窦、泪腺，颌下腺，腮腺、肺脏、胰腺、腹膜后组织、胆管、前列腺等多个器官或组织[1- 3]。该病的病因尚不清楚，目前认为包括三方面：基因易感性、感染的分子模拟机制、免疫系统(包括固有免疫和适应性免疫)紊乱[4]。对疾病相关易感基因的研究较少，日本报道 人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)-DRB1*0405和DQB1*0401可能与疾病发病相关[5]。本研究拟探讨我国IgG4-RD患者HLA-DR、HLA-DQ基因与疾病的相关性。

对象和方法

对象

北京协和医院IgG4-RD前瞻性队列研究患者91例，诊断符合2011年IgG4-RD全面诊断标准(Comprehensive diagnostic criteria for IgG4-RD 2011)[6]：(1)临床检查显示一个或多个器官特征性弥漫/局灶性增大或肿块；(2)血清IgG4水平增高(≥1.35 g/L)；(3)组织病理学检查显示大量淋巴、浆细胞浸润和纤维化，以及IgG4阳性浆细胞浸润(IgG4阳性浆细胞/IgG阳性浆细胞>40%，IgG4阳性浆细胞>10个/高倍视野)。明确诊断：(1)+(2)+(3)；很可能诊断：(1)+(3)；可能诊断：(1)+(2)[6]，并除外其他自身免疫性疾病和恶性肿瘤。对照组为年龄和性别匹配的100例健康查体者。该研究经北京协和医院伦理委员会批准，入组者签署知情同意书。

方法

采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)法检测。

DNA提取：取300 μl抗凝全血，采用离心柱法提取全血DNA。

序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)基因分型：按照上海伟和生物公司HLA-DR、DQ试剂盒操作步骤进行。

仪器：ABI 9700 基因扩增仪、Thermo Heraeus Pico 17离心机、大龙掌上离心机D1008E、其林贝尔掌上离心机LX- 100、SBP Select旋涡振荡器、奥豪斯先行者CP512型电子天平、天能EPS300电泳仪、天能2500凝胶成像系统、Eppendorf可调式移液器、Thermo NanoDrop 2000分光光度计、Milli-Q Advantage A10超纯水机。

统计学处理

所有数据采用SPSS 17.0软件分析，HLA-DR、DQ出现频率通过累计每个等位基因出现的次数计算；实验组与对照组基因出现频率比较采用卡方检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

结　　果

一般情况

91例IgG4-RD患者，男64例，女27例，平均年龄(52±13)岁；对照组男性57例，女性43例，平均年龄(48±15)岁；与对照组相比，试验组性别、年龄差异无统计学意义。

91例IgG4-RD患者脏器受累情况

最常见受累器官为颌下腺、淋巴结，均为58%；其次为泪腺和胰腺，分别为51%和32%；垂体、胃肠道受累较少，为1%(表1)。

HLA-DR、DQ在IgG4-RD及对照组中表达情况

与对照组比较，IgG4-RD患者中HLA-DRB1*03(13%vs. 5%，χ2=3.94，P=0.047)表达率显著增高；HLA-DRB1*09 表达率显著降低(16%vs. 33%，χ2=6.91，P=0.009)；按照器官受累部位比较，29例IgG4相关自身免疫性胰腺炎(autoimmune pancreatitis，AIP)患者HLA-DRB1*03(28%vs. 5%，χ2=10.29，P=0.001)、HLA-DRB1*08(31%vs. 13%，χ2=3.97，P=0.046)表达率显著升高，HLA-DRB1*09(0vs. 33%，χ2=12.86，P=0.04)表达率显著下降；19例胆道受累患者中，HLA-DRB1*09(0vs. 33%，χ2=8.68，P=0.002)表达率显著下降；53例颌下腺受累患者中HLA-DRB1*07(32%vs. 17%，χ2=4.55，P=0.033)、HLA-DQB1*02(36%vs. 20%，χ2=4.58，P=0.032)表达率显著升高；HLA-DRB1*09(15%vs. 33%，χ2=5.66，P=0.017)、HLA-DRB1*14(3%vs. 15%，χ2=4.42，P=0.036)表达率显著下降；46例泪腺受累患者中，HLA-DRB1*03(17%vs. 5%，χ2=4.53，P=0.033)、HLA-DQB1*02(37%vs. 20%，χ2=4.79，P=0.029) 表达率显著升高；26例腮腺受累患者中HLA-DRB1*04(38%vs. 19%，χ2=4.41，P=0.008)、HLA-DRB1*07(35%vs. 17%，χ2=3.91，P=0.048)、HLA-DQB1*02(38%vs. 20%，χ2=3.88，P=0.049)表达率显著升高，HLA-DRB1*09(12%vs. 33%，χ2=4.66，P=0.031)表达率显著下降；20例腹膜后受累患者中HLA-DRB1*08(35%vs. 13%，χ2=4.33，P=0.037)表达率显著升高；HLA-DRB1*09(10%vs. 33%，χ2=4.27，P=0.039)表达率显著下降；20例肺部受累患者中HLA-DRB1*04(40%vs. 19%，χ2=10.74，P=0.001)表达率显著升高；19例泌尿系统受累患者中HLA-DRB1*08(37%vs. 13%，χ2=4.90，P=0.027)表达率显著升高；HLA-DRB1*09(11%vs. 33%，χ2=3.88，P=0.049)表达率显著下降；16例前列腺受累患者中HLA-DRB1*09(6%vs. 33%，χ2=6.02，P=0.014)表达率显著下降；53例淋巴结受累患者中HLA-DRB1*09(11.3%vs. 33%，χ2=8.57，P=0.003)表达率显著下降；26例鼻窦受累患者中HLA-DRB1*03(23%vs. 5%，χ2=6.35，P=0.012)、HLA-DRB1*07(46%vs. 17%，χ2=9.90，P=0.002)、HLA-DRQ1*02(54%vs. 20%，χ2=6.59，P=0.001)表达率显著升高；HLA-DRB1*09(8%vs. 33%，χ2=12.0，P=0.01)表达率显著下降；余HLA-DR、DQ基因亚型表达差异无统计学意义。

表1　IgG4-RD患者脏器受累情况Table 1　Organ involvement in patients with IgG4-RD

讨　　论

本研究发现IgG4-RD患者中HLA-DRB1*03表达率显著增加，考虑为疾病易感基因；DRB1*09 表达率显著降低，考虑为疾病保护基因，按照脏器损害分组，发现HLA-DRB1*09在IgG4相关胰腺、胆道、颌下腺、腮腺、腹膜后、泌尿系、前列腺、淋巴结及鼻窦受累患者中表达率显著下降，考虑该基因亚型为上述脏器保护基因；HLA-DRB1*14在IgG4相关颌下腺受累中表达率显著下降，考虑为颌下腺损伤保护基因；HLA-DQB1*02在IgG4相关颌下腺、泪腺、腮腺、鼻窦受累患者中表达率显著升高，考虑与颌下腺、泪腺、腮腺、鼻窦损伤易感基因；HLA-DRB1*03在IgG4相关胰腺、泪腺、鼻窦受累中表达率显著升高，考虑为该脏器损伤易感基因；HLA-DRB1*04在IgG4相关腮腺、肺部受累中表达率显著升高，考虑为该脏器损伤易感基因；HLA-DRB1*07在IgG4相关颌下腺、腮腺、鼻窦受累患者中表达率显著升高，考虑为该脏器损伤易感基因；HLA-DRB1*08在IgG4相关胰腺、腹膜后、泌尿系受累中显著升高，考虑为该脏器损伤易感基因；由此得出，在国内人群中，DRB1*03高表达，DRB1*09基因的表达缺失考虑可能与IgG4-RD的易感性有关，且基因表达频率的不同，其损伤脏器亦不相同。其他HLA-DR、DQ基因亚型分析尚未发现有统计学意义。

IgG4-RD的发病机制目前尚不清楚，可能有多因素参与本病的发生和发展，包括基因、环境、遗传机制。在该病与HLA基因相关性研究方面，早在2002年，日本学者Kawa等[5]对IgG4相关AIP进行了研究，该研究纳入AIP患者40例，健康对照201例，发现HLA-DRB1*0405和DQB1*0401表达频率显著升高，认为该基因增加了疾病的易感性。但2013年同样一项来自日本的研究发现，在1对患有AIP的兄妹中，并未发现DRB1*0405和DQB1*0401的表达，得出AIP可能是由多种基因参与的疾病[7]。一项关于AIP的研究发现[8]，HLA-DRB1*0701和DQB1*0202增加了该疾病的易感性；来自中国中台湾的研究报道显示，在中国患者中CTLA- 4 49A 多态性和-318C/+49A/CT60G单倍体与AIP 相关[9]。然而，以上两项研究均集中在AIP易感基因的研究，且研究例数较少，有一定的局限性。本研究以IgG4-RD不同脏器损伤分类，探讨了IgG4-RD相关疾病不同脏器损伤可能的易感基因，而这种分类方法在国内外尚未有报道。本研究发现IgG4相关疾病HLA-DR、DQ基因亚型国外报道不一致，考虑与种族差异有关。

目前针对HLA个别基因对于疾病危险性方面尚缺乏基于人口基数遗传免疫学的研究，但该研究策略可在啮齿类动物体中实现[10]，且在AIP的小鼠模型HLA易感基因方面已有大量的研究[11- 14]，但由于小鼠HLA等位基因与人类存在差异，因此这些研究所得结论与人类实际情况也有差异。

本研究发现IgG4相关疾病HLA-DR、DQ基因亚型与国外报道不一致，考虑有以下可能：(1)种族差异；(2)既往报道主要针对AIP患者，而本研究是收集多种器官受累的患者；(3)本研究样本量相对较少。

本研究从免疫遗传学角度初步探讨了IgG4-RD与人类白细胞抗原-DR、DQ等位基因的相关性，为进一步研究IgG4-RD发病机制提供了初步理论依据，但本研究纳入病例数较少，存在一定的局限性，且尚未对有意义的基因亚型进行高分辨分析，需要进一步探讨。

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