灵芝酸枣仁胶囊改善睡眠的功能研究

冯伟伟, 吴美媛, 邓春萌, 王哑倩, 茆广华, 徐财泉, 吴向阳

1.江苏大学环境与安全工程学院, 江苏 镇江 212013; 2.丽水学院医学与健康学院, 浙江 丽水 323000; 3.浙江方格药业有限公司, 浙江 丽水 323800



灵芝酸枣仁胶囊改善睡眠的功能研究

冯伟伟1, 吴美媛2, 邓春萌1, 王哑倩1, 茆广华1, 徐财泉3, 吴向阳1

1.江苏大学环境与安全工程学院, 江苏 镇江 212013; 2.丽水学院医学与健康学院, 浙江 丽水 323000; 3.浙江方格药业有限公司, 浙江 丽水 323800

为研究灵芝酸枣仁胶囊的改善睡眠功能，将ICR小鼠随机分为灵芝酸枣仁高、中、低剂量组和空白对照组，每组12只。人体推荐每公斤服用剂量为45 mg/kg·d，以此剂量的5倍、10倍和30倍，即每日以225 mg/kg BW、450 mg/kg BW和1 350 mg/kg BW经口灌胃30 d后，通过直接睡眠、延长戊巴比妥钠睡眠时间、巴比妥钠阈下剂量催眠和巴比妥钠睡眠潜伏期实验评价灵芝酸枣仁胶囊的改善睡眠作用。研究发现，与空白对照组相比，3个剂量组的直接睡眠实验结果皆为阴性(P>0.05)；与空白对照组相比，中剂量组小鼠延长戊巴比妥钠睡眠时间显著延长(P<0.05)，而高剂量组小鼠戊巴比妥钠睡眠时间极显著延长(P<0.01)；与空白对照组相比，高剂量组小鼠的入睡只数具有显著差异(P<0.05)，而睡眠潜伏期的小鼠只数具有极显著差异(P<0.01)。研究表明，灵芝酸枣仁胶囊具有改善睡眠作用。

灵芝酸枣仁胶囊；小鼠；改善睡眠

灵芝(Ganodermalucidum)，俗称灵芝草，自古以来就被广泛应用于民间医药，具有潜在的药用价值。近年来，在灵芝中鉴定出400多种化合物，包括多糖、三萜、核苷类、类固醇、脂肪酸、蛋白质和多肽等[1]。其中,灵芝多糖和三萜为其主要活性成分[2,3]，具有免疫调节、抗炎和抗肿瘤等作用，同时对神经衰弱、失眠、厌食、头晕和慢性肝炎等疾病的治疗具有一定的作用[3～6]。

酸枣仁是鼠李科植物酸枣[ZiziphusjujubeMill.var.spinosa(Bunge) Hu ex H.F. Chou]的干燥成熟的种子，具有补肝、宁心、敛活、生津的功效，主要用于虚烦失眠、惊悸多梦，是中医治疗失眠的常用药。现代研究表明，酸枣仁含有皂苷、生物碱、三萜和黄酮等多种生物活性成分，其中，酸枣仁皂苷A和皂苷B为其治疗失眠的主要成分[7]。

睡眠是生存的基本要素，睡眠不足可导致各种功能障碍。有研究表明，全世界有27%的人正遭受失眠的困扰，且这一数值正在不断攀升[8]。目前，睡眠问题已成为医学界普遍关心的问题之一。尽管治疗失眠的化学药物在过去的几年里迅速发展，但由于其毒副作用和可能产生的依赖作用，使得其治疗效果不佳。因此，开发一种纯天然、无毒副作用的镇静催眠类功能食品显得尤为重要。本文以灵芝和酸枣仁为主要原料，经提取，制成灵芝酸枣仁胶囊，灌胃给予30 d，考察其对小鼠睡眠的影响，为灵芝酸枣仁胶囊的应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

清洁级雌性ICR小鼠，体重20±2 g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪)2007-0005号；SPF级实验动物环境设施，合格证号：SYXK(苏)2007-0020。于实验前检疫3 d，饲养条件为温度21±1℃，相对湿度60%±5%,实验期间小鼠自由进食和饮水。灵芝酸枣仁胶囊(GLSZSC)，由浙江方格药业有限公司提供，受试物为该胶囊的内容物，置于阴凉、干燥、通风处保存，保存期24个月。戊巴比妥钠和巴比妥钠均为分析纯，购于上海化学试剂公司。

1.2 分组及给药

成人(60 kg)推荐摄入量为2 700 mg/人·d，相当于45 mg/kg·d。实验设人体推荐摄入量的5倍、 10倍和30倍(即225 mg/kg·d、450 mg/kg·d、1 350 mg/kg·d) 3个组(低、中、高)和空白对照组。各项实验所用动物随机分成4组，每组12只，灵芝酸枣仁胶囊高、中、低剂量组分别灌胃给药，灌胃量20 mL/kg，连续给药30 d，空白对照组灌胃相同体积的蒸馏水。

1.3 一般观察

每天观察动物的毛色、行为及精神状况有无异常；各项实验中各组动物于试验前后称重，以观察动物的体重变化情况。

1.4 直接睡眠实验[9]

末次给药30 min后，观察小鼠的睡眠情况。睡眠以翻正反射消失为指标，即当小鼠置于背卧位时，能够立即翻正身位，如果超过60 s小鼠不能翻正，说明翻正反射消失。小鼠进入睡眠，从翻正反射消失到其恢复的时间为小鼠的睡眠时间。分别观察并计算各给药组与空白对照组小鼠的入睡数、睡眠发生率及睡眠时间。如给药组小鼠的入睡只数及睡眠时间增加且与对照组相比具有显著差异，即判定该项结果为阳性。

1.5 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验[10]

末次给药15 min后，各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg，注射量为0.2 mL/20 g。以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。如给药组小鼠的睡眠时间增加且与对照组相比具有显著差异，即判定该项结果为阳性。

1.6 巴比妥钠阈下剂量催眠实验[10]

末次给药15 min后，各组小鼠腹腔注射巴比妥钠130 mg/kg，注射量为0.2 mL/20 g。以小鼠翻正反射消失60 s以上为入睡标准，观察记录30 min内各组小鼠入睡的只数，并计算入睡率。如给药组小鼠的入睡率增高且与对照组相比具有显著差异，即判定该项结果为阳性。

1.7 巴比妥钠睡眠潜伏期实验[11]

末次给药15 min后，各组小鼠腹腔注射巴比妥钠205 mg/kg，注射量为0.2 mL/20 g。以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试样品能否缩短巴比妥钠睡眠潜伏期。如给药组小鼠的睡眠潜伏期缩短且与对照组相比具有显著差异，即判定该项结果为阳性。

1.8 实验数据统计

2 结果与分析

2.1 灵芝酸枣仁胶囊对小鼠体重的影响

由表1可知，各实验项目组小鼠的初始体重组间和终末体重组间均无显著性差异(P>0.05)，说明灵芝酸枣仁胶囊对小鼠体重增长无明显影响。

2.2 灵芝酸枣仁胶囊对小鼠的直接睡眠的影响

实验组小鼠在给药后，部分小鼠出现安静、活动减少及嗜睡的状态，但均未出现睡眠现象(即没有翻正反射消失小鼠)，而空白对照组小鼠动物全部为清醒状态。说明灵芝酸枣仁胶囊对小鼠无直接睡眠作用，本实验结果为阴性。根据保健食品检验和评价技术规范实施手册的规定，可以进行后续其他作用的评价。

2.3 灵芝酸枣仁胶囊对延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间作用的影响

由表3可知，在戊巴比妥钠(50 mg/kg)催眠作用下，随灵芝酸枣仁胶囊作用剂量的增高，小鼠的睡眠时间逐渐延长，呈一定的剂量依赖关系；与空白对照组相比，灵芝酸枣仁胶囊中剂量组小鼠的睡眠时间显著延长(P<0.05), 而高剂量组小鼠的睡眠时间极显著延长(P<0.01)。说明灵芝酸枣仁胶囊可延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间，实验结果为阳性。

表1 灵芝酸枣仁胶囊对小鼠体重的影响±s)

表2 灵芝酸枣仁胶囊对小鼠的直接睡眠的作用(n=12)

表3 灵芝酸枣仁胶囊对延长戊巴比妥钠睡眠时间的影响(n=12)

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；同列数据的不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

2.4 灵芝酸枣仁胶囊对巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响

由表4可知，在巴比妥钠(130 mg/kg)作用下，各剂量组小鼠入睡只数随灵芝酸枣仁胶囊的剂量增加而增多；与空白对照组相比，灵芝酸枣仁胶囊高剂量组小鼠入睡只数显著增加(P<0.05)，说明灵芝酸枣仁胶囊与阈下剂量巴比妥钠有协同催眠作用，实验结果为阳性。

表4 灵芝酸枣仁胶囊对巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响(n=12)

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

2.5 灵芝酸枣仁胶囊对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响

由表5可知，在巴比妥钠(205 mg/kg)作用下，各剂量组小鼠的睡眠潜伏期随灵芝酸枣仁胶囊剂量增加而降低，呈剂量依赖关系；与空白对照组相比，高剂量组小鼠的睡眠潜伏期极显著地缩短(P<0.01)，说明灵芝酸枣仁胶囊具有缩短巴比妥钠睡眠潜伏期的作用，实验结果为阳性。

表5 灵芝酸枣仁胶囊对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响(n=12)

注：同列数据后不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

3 讨论

灵芝酸枣仁胶囊主要以灵芝和酸枣仁为原料制成。现代药理研究表明，灵芝或酸枣仁单独一味药物提取物均具有镇静催眠或改善睡眠的作用。贾薇等[12]采用直接睡眠试验、延长戊巴比妥钠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验和戊巴比妥钠睡眠潜伏期等试验，研究灵芝多糖对小鼠睡眠的影响，研究发现灵芝多糖可显著提高戊巴比妥钠阈下催眠剂量诱导的小鼠睡眠发生率，并缩短戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期。王旭峰等[13]通过测定给药后小鼠的入睡率、睡眠潜伏期和睡眠时间，研究酸枣仁皂苷对小鼠睡眠的影响，研究发现酸枣仁皂苷可显著提高小鼠的睡眠率、缩短小鼠的睡眠潜伏期和延长小鼠的睡眠时间。可见，灵芝或酸枣仁单一提取物均具有一定的改善睡眠的功能，但是未见将二者的提取物进行再次配比后开展对睡眠方面作用的研究。因此，本文采用直接睡眠、延长戊巴比妥钠睡眠时间、巴比妥钠阈下剂量催眠和巴比妥钠睡眠潜伏期实验研究灵芝酸枣仁胶囊的改善睡眠的作用。研究结果表明，灵芝酸枣仁胶囊对小鼠无直接睡眠作用，而巴比妥钠睡眠潜伏期、延长戊巴比妥钠睡眠时间和对巴比妥钠阈下剂量催眠作用的实验结果均为阳性，根据保健食品功能学评价标准，判定灵芝酸枣仁胶囊具有一定的改善睡眠的功能。

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Study on the Function ofGanodermalucidumSemen Ziziphi Spinosae Capsules on Sleep Improvement

FENG Weiwei1, WU Meiyuan2, DENG Chunmeng1, WANG Yaqian1, MAO Guanghua1, XU Caiquan3, WU Xiangyang1

1.SchoolofEnvironmentandSafetyEngineering,JiangsuUniversity,JiangsuZhenjiang212013,China; 2.CollegeofMedicineandHealth,LishuiUniversity,ZhejiangLishui323000,China; 3.ZhejiangFanggePharmaceuticalLimitedCompany,ZhejiangLishui323800,China

The function ofGanodermalucidumSemen Ziziphi Spinosae Capsules (GLSZSC) on sleep improvement was studied. ICR mice were randomly divided into normal control and GLSZSC (225 mg/kg, 450 mg/kg and 1 350 mg/kg) groups and each group with 12 mice. After giving GLSZSC via gavage for 30 days, the effect on sleep improvement was studied by the experiments of sleep-induced directly, prolonging sleep time induced by pentobarbital sodium and affecting mice barbital sodium, respectively. Compared with normal control group, the GLSZSC did not have directly sleep-induced function, whereas the GLSZSC (450 mg/kg and 1 350 mg/kg) could significantly prolong the sleep time induced by pentobarbital sodium (P<0.01 andP<0.05). The GLSZSC (1 350 mg/ kg) decreased the number of mice in sleep latency induced by barbital sodium (P<0.01) and increased the number of mice in sleep under the threshold hypnogenesis dosage of barbital sodium (P<0.05) obviously. The research showed that GLSZSC had certain effect on improving sleep of mice.

GanodermalucidumSemen Ziziphi Spinosae Capsules; mice; sleep improvement

2017-03-07; 接受日期：2017-05-23

江苏大学高级人才启动基金(15JDG031;15JDG146)资助。

冯伟伟，讲师，博士，研究方向为环境化学与毒理学研究。E-mail:fwwujs@126.com。*通信作者：茆广华，副教授，博士，研究方向为环境化学与毒理学、天然产物研究与开发。E-mail：maoyun82@sina.com

10.19586/j.2095-2341.2017.0012