前列腺癌组织中Nrf2、c-Myc蛋白表达变化及意义

郝斌，苗志刚，袁媛，季德才

(沧州市中心医院，河北沧州061000)

前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤。在美国，前列腺癌发病率居男性恶性肿瘤的第1位[1]。近年来随着人口老龄化、饮食习惯及生活方式的改变，我国前列腺癌的发病率呈现持续快速增长趋势[2，3]。前列腺癌早期症状隐匿，临床发现多属于中晚期，5年生存率低，预后较差。凋亡抑制蛋白核转录因子E2相关因子2(Nrf2)及c-Myc基因在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。本研究探讨二者在前列腺肿瘤发病过程中的作用，从而为探索前列腺癌新的诊断及防治方法提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2007年6月～2013年3月于本院手术治疗的前列腺癌患者42例，年龄47～82(61.23±7.43)岁，均为腺癌，术前均未行放化疗；依据Gleason评分标准[4]分为高分化9例、中分化23例、低分化10例；淋巴结转移29例、无淋巴结转移13例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期25例；排除有前列腺癌家族史、前列腺癌术后复发者。选择同期手术治疗的前列腺增生患者50例，年龄48～65(58.13±4.81)岁。术中取前列腺癌组织及前列腺增生患者的正常组织，均经病理检查证实。前列腺癌患者与前列腺增生患者年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 前列腺癌组织及正常组织中Nrf2、c-Myc蛋白表达检测 采用免疫组化SP法。标本均经甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。按照免疫组化SP法说明书进行操作。采用10 mmol/L的柠檬酸抗原修复液(pH值6.0)高温修复3 min，以PBS代替一抗作为阴性对照。Nrf2、c-Myc阳性染色为棕黄色，Nrf2主要定位于细胞质和胞核，c-Myc主要定位于细胞核。结果判断：着色强度无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞百分比0为0分，0<阳性细胞百分数≤25%为1分，25%<阳性细胞百分数≤50%为2分，50%<阳性细胞百分数≤75%为3分，75%<阳性细胞百分数≤100%为4分。以上两项评分乘积>3为阳性，≤3为阴性[5]。Nrf2、c-Myc兔抗人单克隆抗体购自Santa Cruz生物技术公司，工作浓度1∶1 000；免疫组化二抗试剂盒、DAB染色剂购自泰科兰博(北京)生物技术有限公司。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料以例数表示，比较应用χ2检验；相关性采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 前列腺癌组织及正常组织中Nrf2、c-Myc蛋白表达比较 前列腺癌组织及正常组织中Nrf2蛋白阳性表达率分别为78.57%(33/42)、8.00%(4/50)，比较差异有统计学意义(P<0.05)；前列腺癌组织及正常组织中c-Myc蛋白阳性表达率分别为90.48%(38/42)、12.00%(6/50)，比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 Nrf2、c-Myc蛋白阳性表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系 Nrf2及c-Myc蛋白阳性表达率与浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期有关(P均<0.05)，与前列腺癌患者年龄、肿瘤大小及分化程度无关(P均>0.05)。见表1。

表1 Nrf2、c-Myc蛋白表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系(例)

2.3 前列腺癌组织中Nrf2与c-Myc蛋白表达的相关性 前列腺癌组织中c-Myc及Nrf2蛋白表达均阳性30例。对二者免疫组织化学染色积分进行分析，结果显示呈正相关(r=0.418，P<0.05)。

3 讨论

前列腺癌是欧美国家男性最常见的恶性肿瘤，其病死率位列癌症第2位[6]。流行病学研究显示，随着人们生活方式的改变、人口老龄化及诊断技术的提高，我国前列腺癌发病率的年度变化百分比从1988～1994年的2.1%上升至1994～2002年的13.4%。前列腺癌已严重威胁我国男性健康[7,8]。然而，目前对于前列腺癌发病及进展机制仍不完全清楚，亟需深入探索。

Nrf2介导的细胞适应性氧化应激是重要的抗氧化防御系统，对于抗致癌因素的氧化损伤起重要的作用。但是该信号通路的持续激活又进一步促使肿瘤的发生及耐药性的增加。研究结果显示，Nrf2在正常前列腺组织中无表达或低表达，在前列腺癌组织中高表达，且与肿瘤的淋巴结转移和临床分期相关[9，10]。本研究结果显示，前列腺癌组织中Nrf2蛋白阳性表达率高于正常前列腺组织，其高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期密切相关。提示Nrf2可能为前列腺癌特异性表达的一种分子生物学标志物，可作为前列腺癌早期诊断和预后评判的指标。

c-Myc作为一种癌基因，可使肿瘤细胞无限增殖、永生化，在肿瘤细胞增殖、分化、凋亡及代谢等过程中发挥重要作用[11，12]。c-Myc编码为一类丝氨酸/苏氨酸的磷酸化蛋白质，具有与DNA结合的功能。c-Myc蛋白具有促进细胞增殖和诱导细胞凋亡的双重功能。c-Myc基因表达失调和过度在肿瘤发生的各阶段起关键作用[13]。研究发现，c-Myc在肺癌、胃癌及乳腺癌等多种恶性肿瘤组织中高表达，通过调节基因组10%～15%基因的异常表达影响肿瘤进程[14，15]。本研究发现与前列腺正常组织相比，c-Myc蛋白在前列腺癌组织中呈现高表达，且其高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期密切相关。通过进一步分析，c-Myc与Nrf2在前列腺癌组织中的阳性表达呈正相关。提示二者共同促进了前列腺癌的发生发展。

综上所述，前列腺癌组织中Nrf2、c-Myc蛋白呈高表达。Nrf2、c-Myc蛋白异常表达与前列腺癌的侵袭转移密切相关，进一步分析表明二者的表达呈协同效应，提示二者共同促进前列腺癌的发生发展。

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