血清IGF-1、VEGF与类风湿关节炎的相关性研究

王 薇，达展云

（1如东县人民医院风湿科，江苏226400；2南通大学附属医院风湿免疫科）

类风湿关节炎（RA）是造成我国劳动力致残、丧失的主要疾病之一，给社会和家庭带来了沉重的经济负担。RA是一种自身免疫性疾病，临床主要表现为对称性多关节炎，可有多系统多脏器受累，常伴有系统性血管炎的改变。RA致病机制尚未完全清楚，其主要病理改变为滑膜增殖，关节软骨破坏[1-3]。在RA发病过程中，免疫细胞分泌多种细胞因子参与机体免疫反应。Frerich等[4]在采用组织工程构建人工血管时发现，IGF-1可以有效促进多种细胞分泌VEGF，通过增强血管的稳定性促进血管生成和新骨形成，联合使用IGF-1和VEGF时获得的人工血管要明显优于其它组。滑膜血管翳是引起RA关节病变和软骨破坏的主要原因，而滑膜组织中VEGF过度表达是滑膜血管翳形成的主要机制[5-8]。Miotla等[9]认为VEGF与其受体（VEGFR）特异性结合参与RA的发病和病理改变，减少血管翳中VEGF因子的表达可以抑制滑膜血管翳的形成，有可能成为早期治疗RA的途径之一。本研究选择2016年11月—2017年10月南通大学附属医院和如东县人民医院诊治的RA活动期及缓解期患者各30例，探讨IGF-1、VEGF与RA疾病活动度的关系，为寻找新的药物靶点提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 类风湿关节炎患者60例中男性20例，女性40例，平均年龄60.50±14.39岁，平均病程6.12±3.27年。依据DAS28评分将RA患者分为RA活动组（DAS28≥3.2）及 RA 缓解组（DAS28＜2.6）各30例。活动组中男性8例，女性22例，平均年龄60.20±14.56岁；缓解组中男性12例，女性18例，平均年龄60.80±14.46岁；两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。另设健康对照组30例，为如东县人民医院体检中心健康志愿者。RA的诊断参照美国风湿病学会（ACR）和欧洲风湿病防治联合会（EULAR）2009年联合发布的RA分类标准[10]。排除孕妇和哺乳期患者、其他自身免疫性疾病、原发性血液系统疾病、肿瘤、合并感染患者。

1.2 方法

1.2.1 RA常规项目检测：包括血清RF、CCP、CRP、ESR、PLT，抽取受试者清晨空腹静脉血，按临床检验常规方法检测。

1.2.2 ABC-ELISA法测定血清IGF-1、VEGF：采用ELISA法检测。（1）晨起空腹于肘正中静脉采血约5 mL，室温下静置15 min，离心取血清，-20℃冰箱待用。（2）标准品稀释：小试管6支依次编码，各加入稀释液100 μL。取原浓度标准品100 μL加入1号管充分混匀，从中取100 μL加入第2号试管中，充分混匀，依此梯度稀释至6号管，第6支试管作为0号标准品。在酶标包被板上设标准品孔10个，依次加入不同浓度标准品50 μL，每个浓度做2个平行孔。（3）加样：分别设空白孔（不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗体）、待测样品孔。在待测样品孔中先加样品40 μL，然后加生物素标记的抗IGF-1、VEGF 抗体 10 μL。（4）37℃温育 30 min，小心洗涤 5次，拍干。（5）每孔加入酶标试剂 50 μL。（6）重复步骤（4）和（5）。（7）每孔加入 1∶1A+B 显色剂，37℃避光显色15 min，终止反应。（8）测量各孔吸光度（OD值）。

1.3 统计学处理 运用SPSS17.0统计软件进行分析。计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组RA常规项目检测结果 RA活动组、缓解组及健康对照组间血清RF、CCP、CRP、PLT及ESR比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 RA常规项目检测结果

2.2 血清 IGF-1、VEGF 水平与 DAS28、RF、CCP、ESR、CRP相关性 RA活动组、缓解组和健康组血清 IGF-1 含量分别为 141.20±61.31 ng/mL、90.70±31.46 ng/mL、38.00±10.11 ng/mL，血清 VEGF 含量分别 为 515.43±127.46 pg/mL、247.50 ±55.49 pg/mL、165.03±30.73 pg/mL。Pearson相关分析显示，活动组IGF-1 与 DAS28、RF、CCP、ESR、CRP、PLT 均呈正相关，而缓解组 IGF-1 仅与 DAS28、ESR、CRP、PLT 呈正相关，与RF、CCP无关，见表2。活动组VEGF与DAS28、RF、CCP、CRP、PLT 呈正相关，与 ESR 无关，而缓解组 VEGF 与 DAS28、ESR、CRP、PLT 呈正相关，与RF和CCP无关，见表3。

表2 IGF-1与各指标相关性

表3 VEGF与各指标相关性

3 讨 论

长期以来，人们对RA的发病机制已进行了大量深入的研究，已经证明，遗传易感性、感染、环境因素、免疫异常等与RA的发病密切相关。IGF-1是一种重要的调控因子，VEGF是直接作用于血管内皮最强的生长因子，具有促进炎症反应、促进血管内皮细胞增生和新生血管形成的多重作用。RA是造成我国劳动力致残、丧失的主要疾病之一，给社会和家庭带来了沉重的经济负担，及时客观评价RA活动性在临床上非常重要。本研究Pearson相关分析显示，活动组和缓解组 RA患者 IGF-1、VEGF均与DAS28、CRP呈正相关。DAS28是国际上公认的评价RA患者病情活动程度的标准，综合实验室指标和患者肿痛关节数评估RA的活动性。DAS28是评价RA病情活动处于高度或低度状态的最佳标准[11]。CRP尽管不是RA疾病活动性最具特异性的指标，但仍然是目前RA疾病活动的最主要的实验室指标之一[12]，其升高程度与炎症刺激的强度一致。研究显示，血清CRP在RA中明显升高，其浓度与RA活动程度密切相关[13-14]，CRP测定可作为血管炎患者疾病活动程度指数之一[12]。IGF-1、VEGF与DAS28及CRP呈直线相关，说明IGF-1、VEGF在RA中的表达与活动性有关，进行针对性治疗有可能起到延缓病情发展的作用。RA患者血清中可出现RF、CCP等多种自身抗体，主要侵犯血管、关节滑膜等来源于中胚层的器官组织。ESR反映红细胞间的聚集性，RA患者体内炎性因子产生增多，使红细胞易发生缗钱状聚集，导致ESR增快。本研究结果显示，活动期、缓解期IGF-1以及缓解期VEGF均与ESR呈正相关，但活动期VEGF与ESR无关，需要进一步扩大样本量进行研究。