TGF-β1在卵巢浆液性腺癌中的表达及其临床意义

屈晓辉，邓颖辉

(江西省妇幼保健院病理科，南昌 330006)

卵巢癌为妇科常见恶性肿瘤之一，其死亡率位于妇科恶性肿瘤之首[1]，随着年龄的增长，发病率明显增高，严重威胁妇女健康，卵巢癌的预后同临床分期紧密联系，由于各种因素影响，至今缺乏有效的诊断方法，发现的卵巢癌多数已经处于晚期[2]，存活率仍较低，卵巢癌及早诊治能明显提高患者的生存率，因此早期诊断卵巢癌对于患者预后的改善得尤为重要。

转化生长因子 β（transforming growth factor β，TGF-β）是细胞生长抑制因子，可促进细胞外基质形成，促进新生血管形成[2]，调节细胞增殖与分化，在肿瘤的发生发展中起重要作用。TGF-β1是一种分子质量为25KD的多肽，是TGF-β在人体内的主要存在形式。我们从病理学的角度，对TGF-β1进行检测分析，探讨TGF-β1在卵巢浆液性腺癌中的表达及其临床意义，为卵巢癌临床诊断及治疗提供重要参考价值。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选择江西省妇幼保健院2010年至2018年间130例各级卵巢浆液性肿瘤手术标本蜡块（包含卵巢浆液性囊腺瘤40例、卵巢交界性浆液性囊腺瘤40例及卵巢浆液性腺癌50例），以同期卵巢浆液性囊腺瘤标本作为对照，所选病例手术前期未进行任何放化疗，相关临床病理资料完善，病理诊断均明确，排除其他组织学类型。

1.2 试剂 一抗TGF-β1、二抗试剂盒及DAB显色液均购自福建迈新生物有限公司。

1.3 方法

1.3.1 制作组织芯片 设计7×11点阵的芯片，共77个位点，其中7个点做空白定位（如图1、图2）；根据设计将受体蜡块进行打孔，孔径大小与供体组织钻取孔径大小一致；对供体组织HE切片作形态学观察并在供体蜡块上准确标记所需要的靶点；利用打孔仪钻取靶点组织，每个病例同时钻取两块肿瘤组织，并分别转移至两个受体蜡块相应的孔位上，制成所需的阵列蜡块；将制成的阵列蜡块面朝下放入金属包埋盒中，灌蜡并轻压蜡块使组织芯排平，待冷却后放入65℃烤箱内维持45min；最后将蜡块从烤箱内拿出，待其冷却。

1.3.2 免疫组织化学 组织芯片4μm厚切片，采用免疫组化SP法，按产品说明书操作（图3）。

1.3.3 组织学分级 依据2014版WHO分类系统，将卵巢浆液性腺癌分为高级别浆液性腺癌和低级别浆液性腺癌两种。

1.3.4 评估标准 镜下观察TGF-β1的表达情况，计数细胞浆内有黄色或棕黄色颗粒状物的阳性染色细胞数，对TGF-β1蛋白表达进行分析，染色强度根据阳性细胞百分比进行半定量分级：阳性细胞率=0为 0级，＜10%为 1级，10%～50%为 2级，50%～80%为3级，＞80%为4级；结果判断：阳性细胞百分比＜10%为阴性，10%～100%为阳性。

图1

图2

图3

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件进行分析处理，组间差异性比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TGF-β1在各级卵巢浆液性肿瘤中的表达TGF-β1在卵巢各级浆液性肿瘤中均有表达，在卵巢浆液性腺癌组表达阳性率为86.0%，显著高于卵巢交界性浆液性囊腺瘤组（45.0%）和卵巢浆液性囊腺瘤组(17.5%)，差异具有统计学意义（均 P＜0.05)；且卵巢交界性浆液性囊腺瘤组TGF-β1阳性率明显高于卵巢浆液性囊腺瘤组，差异具有统计学意义(P＜0.05)（图 4 及表 1）。

2.2 TGF-β1的表达水平与卵巢浆液性腺癌临床病理参数之间的关系 卵巢浆液性腺癌中，Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者肿瘤TGF-β1的表达阳性率为93.2%，显著高于Ⅰ期患者TGF-β1的表达阳性率33.3%，差异具有统计学意义(P＜0.05)；伴有肿瘤种植/转移患者TGF-β1的表达阳性率为93.0%，显著高于不伴有肿瘤种植/转移患者TGF-β1的表达阳性率42.9%，差异具有统计学意义(P＜0.05)；不同年龄分布和不同组织学分级的患者TGF-β1的表达水平差异无统计学意义。（表2）

3 讨论

肿瘤是在多种因素共同作用下形成的，其发生发展是多种因素影响的复杂过程。卵巢癌以上皮性癌居多，其中卵巢浆液性腺癌是上皮性癌中最常见的病理类型。晚期卵巢癌的治疗原则是以手术为主的综合治疗，即术中尽可能切净肿瘤，为术后化疗打下基础，但对于位于一些重要脏器的转移灶和一些小转移灶，术中处理往往比较棘手。因此，为寻求有效的诊断和治疗方案，卵巢癌发生、发展及转移的机制一直是妇科肿瘤基础与临床研究探索的重点。

表1 TGF-β1在各级卵巢浆液性肿瘤中的表达

图4 TGF-β1在各级卵巢浆液性肿瘤中的表达，SP法：A.卵巢浆液性囊腺瘤；B.卵巢交界性浆液性囊腺瘤；C.卵巢浆液性腺癌

表2 卵巢浆液性腺癌中TGF-β1的表达与临床病理参数的关系

TGF-β(transforming growth factor beta，转化生长因子β)是一种多功能的多肽类细胞因子，哺乳动物组织中存在3种TGF-β亚型：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β1最为重要。几乎体内的所有细胞都能产生TGF-β并存在其受体，参与细胞的分化、增殖、转移、形态的改变以及凋亡等，在机体的免疫调节、细胞生长和分化、肿瘤免疫等发面均起到了重要的作用。人类TGF-β1基因定位于染色体19q3，含有7个外显子，其5ˊ端序列含有5个调控区：1个类增强子活性区，2个负调控区和2个启动子区。

通常TGF-β1对正常上皮细胞发挥生长抑制作用，在恶性肿瘤发展过程中，TGF-β1起着双向调节作用。在肿瘤发生早期，TGF-β1发挥负向调节因子作用抑制肿瘤形成。随着肿瘤的进展，TGF-β1可通过诱导肿瘤周围基质环境改变，促进新生血管生成，促进肿瘤细胞浸润与转移，抑制宿主免疫系统杀伤肿瘤细胞等方式发挥免疫耐受和免疫逃逸，加剧肿瘤生长与形成[8-12]。

本研究结果显示TGF-β1在卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢交界性浆液性囊腺瘤及卵巢浆液性腺癌中均有表达，且在卵巢浆液性腺癌中呈高表达；与卵巢交界性浆液性囊腺瘤及卵巢浆液性囊腺瘤相比，TGF-β1在卵巢浆液性腺癌组织中的表达水平显著升高；与卵巢浆液性囊腺瘤相比，TGF-β1在卵巢交界性浆液性囊腺瘤组织中的表达水平亦显著升高，提示TGF-β1的过表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用。

近年较多文献[3-5]报道TGF-β表达水平的测定对了解乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌等恶性肿瘤进展、判断淋巴结转移状况、术后监测转移或复发及评估预后等诸方面均有较重要意义[15，16]。

上皮间质转化（EMT）是恶性肿瘤转移的先决条件，目前TGF-β1被认为是诱导上皮间质转化的最重要的生长因子。

在本研究中，我们进一步对卵巢浆液性腺癌患者TGF-β1表达水平与卵巢癌的FIGO分期和癌组织的种植/转移的关系进行了分析。结果显示Ⅱ-Ⅳ期卵巢癌患者肿瘤组织中TGF-β1表达水平均高于I期，且卵巢癌组织中TGF-β1的表达水平与肿瘤的种植/转移密切相关，差异有统计学意义；而卵巢癌组织中TGF-β1的表达水平与病人的年龄分布及肿瘤组织学分级无关，提示TGF-β1的显著增加发生在卵巢癌晚期，可能是晚期卵巢癌增加的TGF-β1可诱导肿瘤血管生成，从而促进卵巢癌的发展。

TGF-β1表达水平与肿瘤不同临床分期、肿瘤是否种植/转移相关，表明TGF-β1表达指数对临床分期有一定价值，临床上结合TGF-β1水平的检测，一定程度上可以对卵巢肿瘤的生物学行为进行评估，并判定其危害性，评估肿瘤的预后情况，反映肿瘤细胞目前的活性状态。

此外，在一些实体恶性肿瘤研究[6，7]中发现TGF-β的表达有助于诱导肿瘤细胞发展和耐药性的产生。

综上所述，卵巢癌患者呈现免疫耐受状态，TGF-β1表达水平与卵巢癌的发生、发展及种植/转移密切相关，TGF-β1水平可为卵巢癌的临床诊断、病情监提供重要的参考价值，检测TGF-β表达水平对指导临床治疗可能有重要临床应用价值，并有可能成为卵巢癌控制转移的靶点。