不同基原肾精子药效的比较研究

王 飘，赵思俊，张 蕻，崔宇宏，常雅卉，王春芳

（1.山西中医药大学，山西晋中030619； 2.山西省食品药品检验所，山西 太原030001）

肾精子为猪科动物猪Sus scrofadomestica Brisson或牛科动物黄牛Bos taurusdomesticus Gmelin、水牛 BubalusbubalisLinnaeus的膀胱结石［1］。肾精子在古本草中无记载，始载于《中药材手册拾遗》［2］，记载了肾精子“以牛膀胱结石入药，利水消胀，主治小便不通，肚腹胀满”，简单描述了该药的性状与功效。有文献报道肾精子有利水消肿及通淋的作用，将其单味用药或复方用药治疗前列腺增生症有较好效果［3］。本课题组前期研究初步验证了猪源肾精子有明显抑制前列腺增生的作用，并确定了其药效剂量［4］。在本研究中我们首次进行两种基原肾精子药效的比较，同时验证牛源肾精子治疗前列腺增生的效果，为以后该药质量标准的建立、药理学研究及临床用药奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 试药与试剂 肾精子（猪源肾精子与牛源肾精子均来自文水县胡兰镇贵细药材收购商，由山西省药检所副主任药师罗晋萍鉴定为正品）使用前磨成细粉；丙酸睾酮注射液（上海通用药业股份有限公司，批号131213）、非那雄胺片（规格：5 mg，批号L029346，厂家：杭州默沙东制药有限公司）、前列康普乐安片（规格：0.64 g，批号ZLC1629，厂家：云南白药集团股份有限公司）；羧甲基纤维素钠CMC-Na（批号20160816，厂家：国药集团化学试剂有限公司）、注射用花生油（批号20170910，厂家：山东鲁花集团有限公司）。

1.1.2 仪器 ME204/02电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司）；LEICAeg1150C型包埋机（徕卡）；LEICA-RM2235轮转式切片机（徕卡）；DM6000显微镜（徕卡）。

1.1.3 动物 SPF级成年Sprague Dawley（SD）雄性大鼠 80只，（180±220）g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，质量合格证号0031232。

1.2 方 法

1.2.1 造模与给药 取雄性SD大鼠80只，适应性饲养1 w，除空白组10只大鼠外，其余70只大鼠根据文献去势后皮下注射丙酸睾酮5 mg/（kg·d）复制前列腺增生动物模型，将其分为模型组、猪源肾精子中剂量组20 mg/（kg·d）、低剂量组10 mg/（kg·d）、牛源肾精子中剂量组20 mg/（kg·d）、低剂量组10 mg/（kg·d）、前列康组1.9 g/（kg·d）及非那雄胺组0.5 mg/（kg·d）。空白组皮下注射等量植物油，连续5 w。在造模1 w后，开始灌胃给予相应药物5 mL/（kg·d），模型组和空白组给等量生理盐水，连续 4 w［5-6］。

1.2.2 大鼠体质量及一般情况观察 每日给药前后均观察大鼠的一般状态，每周称1次体质量以调整给药量。

1.2.3 前列腺湿重、体积及脏器指数 实验结束后，解剖大鼠（解剖前12 h禁食不禁水），完整摘取前列腺组织，小心剔除周围脂肪，分别称其湿重，并计算脏器指数［脏器指数=脏器湿重（mg）/体质量（g）×100%］，用排水法测其体积。

1.2.4 前列腺组织的形态学变化 将分离出的前列腺组织固定于中性福尔马林溶液中，经取材、水洗、脱水、浸蜡、石蜡包埋、切片、HE染色、封片后于显微镜下观察其形态变化［7-9］。在每个切片随机取5个高倍视野（×40），每组10个组织切片，共50个视野，采用IPP图像处理软件统计上皮高度和腺腔面积，具体步骤如下：打开IPP软件界面。通过换算像素大小（1360×1024）和校准后大小219.3 μm×165.1 μm 的比例尺为 1∶9，校准软件中的比例尺；打开切片图，用套索工具选择图片中的腺腔，软件自动标红并计算腺腔面积；用直线工具选中上皮最大高度和最小高度，软件自动标记为直线，并计算出长度；IPP软件导出数据于Excell中，用SPSS进行组间分析。

1.3 统计学方法

用SPSS18.0统计软件包对数据进行统计学分析，结果用均数±标准差（x±s）表示，实验数据选用单因素方差分析（One-WayANOVA），组间差异进一步采用Dunnet－t检验分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 大鼠体质量及一般情况

刚完成去势手术时大鼠状态不好，1 w后伤口愈合完好，状态良好。实验过程中空白组大鼠性情较温顺，毛色有光泽，双目有神，生活状态较好，无死亡。模型组大鼠脾气暴躁，毛色不光滑，泛黄枯槁，且有部分皮肤肿胀（由于皮下注射丙酸睾酮所致），垫料潮湿快，无死亡。各组大鼠体质量比较差异无统计学意义。

2.2 肾精子对前列腺体积、湿重及脏器指数的影响

由图1可以看出，与空白组比较，模型组前列腺组织明显增大；与模型组比较，各给药组大鼠前列腺组织有所减小。

与空白组比较，模型组前列腺体积及湿重增大，差异有统计学意义（P＜0.001），表明造模成功；与模型组比较，猪源中剂量组、牛源低剂量组、牛源中剂量组、前列康组及非那雄胺组大鼠前列腺体积及湿重有所减小，差异有统计学意义（P＜0.05）。

与空白组比较，模型组大鼠前列腺脏器指数增大，差异有统计学意义（P＜0.001），表明造模成功；与模型组比较，各给药组大鼠前列腺脏器指数显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。

肾精子各给药组之间前列腺体积、前列腺湿重、前列腺指数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；分别与前列康组及非那雄安组比较，肾精子给药组前列腺体积、前列腺湿重、前列腺指数差异亦无统计学意义（P＞0.05）。说明两种基源肾精子抑制前列腺增生的作用与前列康及非那雄胺相当。结果见图2。

2.3 肾精子对前列腺组织形态学的影响

模型组与空白组比较，大鼠前列腺上皮细胞大量增生、增厚，局部腺泡细胞排列紊乱，增生腺体多数呈乳头状向腔内突出，腺腔面积不规则，间质和腺泡内充满大量分泌物，并且有散在的炎症细胞，表明造模成功。与模型组比较，肾精子猪源低剂量组、中剂量组、牛源低剂量组及中剂量组部分前列腺上皮细胞层数减少，部分乳头状腺体减少，极少数突入腔内。非那雄胺组、前列康组局部组织腺体增生变厚，个别腺泡有扩张，形成乳头状突入腺腔，无明显炎细胞散在，镜下与空白组相近。各给药组与模型组比较，均有明显的抑制前列腺组织增生的作用。病理组织结果见图3，上皮高度及腔面积测量结果见表1。

图1 各组大鼠前列腺组织图

图2 各组大鼠前列腺体积、湿重及脏器指数比较

图3 大鼠前列腺组织病理切片图（HE×100）

3 讨 论

目前良性前列腺增生（BPH）是中老年男性最常见的疾病之一，该病对患者的生活质量有显著影响［10-11］。随着预期寿命的增加，BPH流行率逐渐上升，但是其发病机理还不太清楚。BPH的治疗手段主要有手术治疗或服用5α-还原酶抑制剂及α-受体阻滞剂等，但显示出各种类型的副作用［12-14］。中药疗效确切，毒副作用小，从整体调节及改善病情［15］，因此临床治疗多选用中药保守防治前列腺增生症。本实验通过前列腺增生动物模型对两种基原肾精子药效进行比较，发现二者都可以抑制前列腺增生且疗效指标差异无统计学意义。

表1 前列腺组织上皮高度及腺腔面积

目前由于肾精子来源稀少，各方面的研究几乎处于空白，限制了该药的临床应用。本实验将进一步研究其化学成分，明确药效物质基础，探索其治病机理，不断完善该药各方面研究，为以后更好的应用奠定基础。