助阳开郁颗粒的急性毒性研究

董晨虹，李钦青，柴金苗，曹晓龙，段秀俊

（山西中医药大学，山西晋中030619）

助阳开郁颗粒由黑顺片、炙甘草、炒黄柏、桂枝、砂仁、牡蛎、蛤粉、茯苓八味药组成，是山西省名中医赵杰医生多年来的临床验方，具有助阳开郁、疏肝健脾等功效，主要用于治疗抑郁症，临床疗效甚佳。为更好地服务患者，欲将其开发为颗粒剂。因处方中含有黑顺片，项目组对助阳开郁颗粒的急性毒性进行了研究，为其临床应用提供一定的参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物与动物 助阳开郁颗粒（批号20180721，实验室自制），娃哈哈纯净水。SPF级昆明种小鼠，1~8 w 龄，雌雄各半，体质量为（18～22）g，购自中国食品药品检定研究院，实验动物生产许可证编号：SCXK（京）2014-0013。

1.1.2 仪器与设备 LT10028B电子天平（常熟市天量仪器有限责任公司）、ZNHW型电热套（上海越众仪器设备有限公司）、Model型真空干燥箱（上海贵测实验设备有限公司）、TD5A-WS湘立离心机（湖南湘立仪器有限公司）、DHG9053型烘箱（上海承标实验仪器有限公司）、一次性使用无菌注射器（圣贝诺上海医疗用品有限公司）、灌胃针（创博环球北京生物科技有限公司）。

1.2 方 法

1.2.1 助阳开郁颗粒混悬液的制备 取助阳开郁颗粒，研磨成细粉，加蒸馏水配制成最大药物浓度1.5 g/mL的混悬液（相当于生药含量7.11 g/mL）。

1.2.2 半数致死量（LD50）的测定［1］取SPF级小鼠40只，雌雄各半，适应性分开饲养7 d后，禁食不禁水12 h。实验前称重，标记，按体质量随机分为对照组和4个给药组，每组8只。对照组以40 mL/kg生理盐水灌胃，给药组分别以10 mL/kg、20 mL/kg、30 mL/kg、40 mL/kg的助阳开郁颗粒混悬液进行灌胃，给药5 h后自由进食进水，连续观察1 w。1 w之内，小鼠全部存活，解剖之后未见各个脏器有明显病变。受给药体积和药液浓度的限制，未能测出本品的半数致死量。故目前认为40 mL/kg的给药剂量即为该制剂的最大耐受量。为了进一步评价制剂安全性，进行了最大耐受量实验的验证实验。

1.2.3 最大耐受量验证实验［2-3］取SPF级昆明小鼠40只，雌雄各半，适应性分开饲养7 d后，按体质量随机分为对照组和给药组，每组20只，禁食不禁水12 h。对照组以40 mL/kg生理盐水灌胃，给药组以40 mL/kg助阳开郁颗粒混悬液灌胃（相当于临床成人用量的153.15倍），给药5 h后自由进食进水，连续观察14 d，记录小鼠有无死亡情况，外观、排泄等有无异常［4］，并定期记录体质量，结果见表1。14 d后进行解剖，观察各组脏器有无病变，取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏进行称重，计算脏器指数。

1.3 统计学方法

采用SPSS20.0软件进行统计分析，计数资料以均值±标准差（x±s）表示，各组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对小鼠一般状况的影响

小鼠灌胃助阳开郁颗粒后观察，给药后动物行为、外观等均未见异常；未观察到动物出现抽搐、麻痹等肌肉活动异常，对外界反应正常；无流涎、流泪等现象；粪便颜色正常，无稀便、便秘、脓血便等；肤色正常，无眼球突出、眼睑下垂、呼吸兴奋或抑制等中毒症状；无动物死亡情况［5-6］。

2.2 小鼠体质量的变化

分别于给药后第1、7、14天测动物体质量，发现给药组小鼠体质量与对照组比较差异无统计学意义。结果见表1。

表1 助阳开郁颗粒急性毒性实验对小鼠体质量的影响 （g，x±s）

2.3 对小鼠脏器的影响

对小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏进行称重，计算脏器指数［7］，给药组小鼠与对照组比较，脏器指数差异无统计学意义。结果见表2。

表2 助阳开郁颗粒急性毒性实验对小鼠脏器指数的影响 （mg/g，x±s）

3 讨 论

半数致死量是药物急性毒性实验评价的一个重要指标［8］，LD50越大，药物的毒性越低。实验按照最大灌胃体积40 mL/kg给予助阳开郁颗粒最稠混悬液，相当给予生药量为284.4 g/kg，黑顺片为22 g/kg，该生药剂量为临床成人用量的153.15倍，小鼠全部存活，且未见明显毒性反应。实验结果说明该制剂临床用药是安全的，为其进一步开发和推广应用提供了实验依据。

未经炮制的药材附子中双酯型生物碱含量普遍很高，单酯型及非酯型生物碱含量低，而炮制品则反之。在炮制过程中剧毒性的双酯型生物碱会变成单酯型及非酯型生物碱，从而降低了附子的毒性。助阳开郁颗粒中用到附子的炮制品黑顺片，为有毒中药，周子渝等［9］报道黑顺片的LD50为44.8 g/kg，在进行该制剂的急性毒性实验时，用到最大给药剂量，相当于黑顺片为22 g/kg，远远未达到文献报道的半数致死剂量。再加上中药复方配伍的增效减毒作用，使该制剂的用药安全系数更大。李冰洁等［10］报道附子与甘草配伍具有一定的减毒作用，助阳开郁颗粒处方中同时含有附子与甘草，这也可能是制剂不呈现毒性的原因之一。