黄芪多糖对厌食大鼠胃肠动力及氧自由基表达的影响

叶远玲 王瑞明 胡芳玉 朱满刚

(杭州市中医院急诊科，浙江 杭州 310007)

厌食症是指因心情低落、怕胖而过分拒食、节食，导致体重下降、营养不良甚至不愿意保持最低体重的一种心理障碍性疾病〔1〕。厌食症好发于女性，女性患者占比约为95%，这类患者常在青少年时期出现类似性格倾向〔2〕。厌食症的治疗目前存在较多难题，疾病带来的早亡率依然居高不下，达10%～20%，早亡原因多为营养不良导致的并发症与精神抑郁引起的自杀行为〔3〕。目前，厌食症的治疗手段主要包括手术治疗、西药治疗、精神治疗、中药治疗、心理治疗、推拿等，且以西药治疗与心理治疗为主，二者常联合展开，但效果仍不尽人意〔4,5〕。传统医学认为厌食症是因饮食不节导致的脾失健运、脾胃不和、胃纳失司导致，长时间食欲不振、食量减少〔6〕。厌恶进食等为主要表现，四季皆可发病，病程长，患者若接受有效且合理的治疗一般预后良好，若早期误诊、误治则不愈风险高，严重影响患者日常生活与工作，可见为厌食症患者找到一种安全有效的治疗用药的临床意义〔7〕。黄芪是一种延用多年的中药材，研究证实，黄芪内含有诸多活性成分，如蔗糖、多糖等，这些成分均属于大分子物质，富含铜、硒、锌等诸多微量元素，在这些大分子物质中，与黄芪多糖相关的研究较多，其药理作用宽，具有提高免疫力、抑菌、清除氧自由基、调节肠胃功能之效〔8,9〕。结合厌食症病情表现，考虑可将黄芪多糖用于疾病的治疗中，但目前国内并无此类研究报道。本研究建立厌食大鼠模型，为其使用黄芪多糖治疗，分析黄芪多糖对厌食大鼠胃肠动力与氧自由基表达的影响。

1 材料与方法

1.1实验条件 本实验在浙江中医药大学动物实验研究中心SPF级实验室展开，全部大鼠均在不锈钢鼠笼饲养，且均为单独分开饲养，给予其特制、充足、常规喂养，自由饮水，饲养室温为20～24℃，饲养相对湿度为30%～50%，换气量为10～20次/h，采光均为日光灯明暗交替。实验展开期间全部垫料与饲料均由浙江中医药大学动物中心提供。

1.2实验动物 SPF级健康SD大鼠105只，体重50～70 g，平均(65.14±3.52)g；雌雄各半，均由浙江中医药大学SPF级实验动物中心提供。

1.3实验药品 黄芪多糖，购自天津赛诺制药有限公司，国药准字：Z20040086，规格：250 mg/瓶。多潘立酮混悬液(吗丁啉片)，购自西安杨森制药有限公司，国药准字：H10910003，规格：10 mg/片。江中健胃消食片，购自江中药业股份有限公司，批准文号：H14051011，规格：500 mg/片。

1.4主要试剂 兰州军区陆军总院提供10%水合氯醛，生工生物工程股份有限公司提供抑肽酶，天津市大茂化学试剂厂提供的冰醋酸，天津市德恩化学试剂有限公司提供的氢氧化钠，上海生工生物工程股份有限公司提供的羟甲基纤维素钠，制备营养性半固体糊：取羟甲基纤维素钠16 g置入400 ml蒸馏水内，分别向内加入糖12.8 g、奶粉25.6 g、淀粉12.8 g与50.7 g 10%活性炭粉末，均匀搅拌，配制为300 g约300 ml碳末半固体糊状物，放于4℃冰箱内冷藏，在使用时置入室温下恢复。酶联免疫吸附试剂盒由北京解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。

1.5主要仪器 常熟市天量仪器公司提供电子天平，河南原阳振华公司提供动物手术器械箱及动物固定器，长沙平凡公司提供的台式高速离心机，美国雷杜公司提供全自动酶标仪，长沙湘平科技公司提供电子分析天平，青海海尔电器提供超低温保存箱，澳大利亚Dynamica公司提供冷冻离心机、烧杯、试管、灌胃针等。

1.6方法

1.6.1分组方法 SPF级健康SD大鼠105只，将其中15只作为空白对照组，其他90只作为建模组，空白对照组给予常规饲养与自由饮水，建模组喂养特制饲料、自由饮水；经随机数字表法将建模组分为6组，模型组：不给药；中成药对照组：给予江中健胃消食片；西药对照组：给予吗丁啉；黄芪多糖低剂量组：给予低剂量黄芪多糖；黄芪多糖中剂量组：给予中剂量黄芪多糖；黄芪多糖高剂量组：给予高剂量黄芪多糖。

1.6.2制备模型 使用病因模拟法〔10〕制备模型。制作特制饲料：按照相应比例将新鲜肥肉、白糖、鱼肉松、奶粉、玉米粉、鲜鸡蛋、黄豆粉等混匀，捏为饼状，烘干，放入4℃环境冷却。给予空白对照组常规饲料喂养，其他组均喂养特制饲料，全部大鼠单笼饲养，自由饮水、进食，饲养时间为35 d，每日均需严格记录大鼠体重及摄入量。制备模型成功标准参照文献〔11〕：其他组大鼠摄入量较空白对照组大鼠平均下降20%～30%，或体重较空白对照组降低10%～15%。

1.6.3给药方法与剂量 空白对照组不给药，其他各治疗组，剂量根据人与大鼠表面积比换算为等效剂量：低剂量组、中剂量组、高剂量组分别腹腔注射黄芪多糖100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg，将黄芪多糖注入0.5 ml 0.9%氯化钠注射液腹腔注射；中成药对照组给予0.576 g/kg江中健胃消食片溶剂灌服，西药对照组给予1.03 mg/kg吗丁啉溶剂灌服，1次/d。模型制备成功7 d后给予各组大鼠正常饲料常规喂养，并灌胃给药或腹腔注射，连续给药15 d，给药结束后不禁水但禁食16 h，在第16天给予药物注射或灌服40 min后给予各组2 ml半固体糊灌服，灌服20 min后对其实施脱椎人道处死，进行标本采集。

1.7观察指标

1.7.1胃肠动力 (1)胃动素(MTL)：①血胃动素：处死大鼠前采血，采血前向每管内加入20 μl/ml抑肽酶，由股动脉采集6 ml全血注入抗凝管内摇匀置于4℃冰箱内保存，3 h内经4 000 r/min转速离心10 min，血浆分离，置于-80℃低温冰箱保存待检，参照试剂盒说明书，经放射免疫法检测外周血MTL表达。②下丘脑MTL：取血后将大鼠处死，即刻断头将全脑取出，放入沸腾生理盐水中煮约5 min，将下丘脑分离出，分别使用分析天平称重放入浆管内，向内加入1 ml醋酸，匀浆置入塑料试管置于室温下，低温离心，取上清液，使用放射免疫法检测下丘脑MTL含量。(2)胃内残留率：迅速解剖死去大鼠，结扎取胃，使用滤纸擦拭后称重，沿着胃大弯将胃体剪开，将胃内容物洗去后擦拭干净，称重。将全胃重减去胃净重则为胃内残留物之重，计算胃内残留率，胃内残留率=(全胃重-胃净重)/灌碳末半固体糊重量×100%。(3)小肠推进率：将胃取出后迅速将肠系膜分离，将小肠取出，平铺在白纸上，仔细测量幽门到盲肠部位的全长与幽门到碳末半固体糊前沿距离。小肠推进率=(碳末半固体糊小肠内推进距离/小肠全长)×100%。

1.7.2氧自由基表达 取血于25℃环境下静置30 min，经3 000 r/min离心10 min，取上清液，使用全自动生化分析仪，经酶联免疫吸附试验参照试剂盒说明书检测超氧化物歧化酶(SOD)。

1.8统计学方法 应用SPSS20.0统计学软件进行单因素方差分析、LSD-t检验。

2 结 果

2.1空白对照组与建模组实验期间摄食量比较 摄食第1天两组摄食量比较，差异无统计学意义(P>0.05)；摄食第7、14、21、28、35天，两组摄食量均呈递增趋势，但建模组升高幅度不及空白对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2空白对照组与建模组实验期间体重比较 摄食第1、7、14、21、35天两组体重比较差异无统计学意义(P>0.05)；摄食第28天，建模组大鼠体重明显低于空白对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 空白对照组与建模组实验期间摄食量比较

表2 空白对照组与建模组体重比较

2.3各组胃肠动力相关指标水平比较 模型组胃内残留率最高，后由高至低依次为黄芪多糖低剂量组、中成药对照组、空白对照组、西药对照组、黄芪多糖中剂量组、黄芪多糖高剂量组，组间整体比较差异有统计学意义(P<0.05)，经组间两两比较发现，空白对照组、中成药对照组、黄芪多糖低剂量组组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)；其他组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。7组大鼠中，黄芪多糖高剂量组小肠推进率最高，后由高至低依次为黄芪多糖中剂量组、西药对照组、空白对照组、中成药对照组、模型组，组间整体比较差异有统计学意义(P<0.05)，经组间两两比较发现，空白对照组、中成药对照组、黄芪多糖低剂量组组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)；其他组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 各组胃肠动力相关指标水平比较

与空白对照组比较:1)P<0.05；与模型组比较:2)P<0.05；与中成药对照组比较:3)P<0.05；与西药对照组比较:4)P<0.05；与黄芪多糖低剂量组比较:5)P<0.05；与黄芪多糖中剂量组比较:6)P<0.05，下表同

2.4各组MTL比较 黄芪多糖高剂量组大鼠外周血、下丘脑MTL表达均最高，其次为黄芪多糖中剂量组、西药对照组、空白对照组、中成药对照组、黄芪多糖低剂量组、模型组，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；空白对照组、中成药对照组、黄芪多糖低剂量组3组组间两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

2.5各组SOD水平比较 空白对照组SOD水平最高〔(95.41±8.21)U/ml〕，其次为黄芪多糖高剂量组〔(81.02±1.11)U/ml〕、黄芪多糖中剂量组〔(76.14±1.02)U/ml〕、中成药对照组〔(62.24±3.12)U/ml〕、西药对照组〔(61.96±2.54)U/ml〕、黄芪多糖低剂量组〔(60.95±2.62)U/ml〕、模型组〔(48.91±3.20)U/ml〕，组间比较差异有统计学意义(F=243.507,P<0.001)。中成药对照组、西药对照组、黄芪多糖低剂量组三组组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表4 各组MTL表达比较

3 讨 论

目前为大鼠使用甲状腺素片长时间喂养、向其腹腔或脑室内注射CCK-8等均是致大鼠厌食主要手段，此外，运动限制、饮食等也可建立厌食症大鼠模型。近年来，国内多参照汪受传教授建立的病因模拟法制备大鼠模型，相较于其他模型的建立该方法稳定性更好。本研究参照该方法制作特殊饲料对大鼠进行喂养，模拟老年人群在日常生活中不合理饮食、营养搭配不当的状态，该状态与厌食症中医病因机制基本一致，且在实验开展期间让大鼠自由饮水进食，这同临床实际更相近，得到的数据结果也更具合理性。

厌食症是多发病、常见病，其患病机制复杂多样，以喂养不当、饮食不节较多见，脾胃不和、纳化失职是其主要病机〔12～14〕。针对这一病机推测厌食症治疗全程应保证运脾和胃方法贯穿始终。黄芪是一味常用中药，该药味甘性温，可补气升阳、托毒排脓、固表止汗、生肌〔15〕。在我国药典中有规定，黄芪作为药物使用有两种，包括膜荚黄芪干燥根与豆科植物蒙古黄芪干燥根。近几年随着中医药方面研究的深入，现代药理研究发现，黄芪中除了富含黄酮、黄芪甲苷等具有较强活性的小分子化合物外，大分子化合物如黄芪多糖等也同样具有诸多方面的药用活性，在缓解食欲不振、增强机体免疫力方面均有一定应用价值〔16，17〕。本研究结果显示，黄芪多糖高剂量组大鼠胃肠动力改善效果最佳，且氧自由基表达较其他组大鼠更接近空白对照组，提示黄芪多糖用于厌食大鼠有着理想的增强大鼠胃肠动力之效，大鼠氧自由基表达明显改善。究其原因可能与黄芪多糖抗应激、抗氧化机制有关，该结果也从侧面提示了黄芪多糖对厌食大鼠胃肠损伤的改善效果，尤其是该剂量黄芪多糖的应用更利于提高大鼠食欲，改善其食欲不振的情况，对其胃肠还有一定保护效果〔18，19〕。MTL是一种消化间期激素，属于脑肠肽激素，其主要对胃与肠道的动力产生生理作用，诱发小肠分节运动与胃收缩，还能刺激胃液分泌与胃蛋白酶分泌，帮助食物消化〔20〕。故血中MTL含量可直接用于评估机体胃肠道的功能状态与运动状态。本研究结果显示黄芪多糖高剂量组血中、下丘脑中MTL含量均高于其他组大鼠，提示高剂量黄芪多糖能改善厌食大鼠胃肠功能，帮助胃排空，改善脾虚之证，帮助厌食大鼠食欲提升。

综上所述，黄芪多糖利于促进厌食症大鼠小肠推进与胃排空功能加强与氧自由基表达改善，对提高患者血内、下丘脑内氧化自由基表达有重要应用价值，可能是治疗厌食症的机制之一。