IL-6、STAT3在妊娠期肝内胆汁淤积症产妇胎盘组织中的表达及意义

叶云飞　陈柏秀

[摘要] 目的 研究白細胞介素6（IL-6）和信号传导与转录激活因子3（STAT3）在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）产妇胎盘组织中的表达及二者间的关系。 方法 选取2016年1月～2017年12月于广西科技大学附属柳州市人民医院（以下简称“我院”）产科门诊产检并住院分娩的ICP产妇50例（ICP组），其中重度ICP组25例，轻度ICP组25例;同时取同期于我院分娩的健康产妇30名为对照组，搜集其胎盘组织采用免疫组织化学法检测IL-6及STAT3的表达。 结果 ICP组孕妇胎盘滋养细胞中IL-6和STAT3阳性表达率明显高于对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01），而在ICP轻度组和ICP重度组中两者阳性表达率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;IL-6和STAT3在对照组、ICP轻度组、ICP重度组产妇胎盘滋养细胞中的阳性表达率呈递增趋势;ICP组IL-6与STAT3蛋白的表达呈正相关（r = 0.694，P < 0.01）。 结论 IL-6及STAT3信号通路表达水平与ICP发病程度呈正相关，可作为联合诊断和病情评估的重要指标。

[关键词] 白细胞介素6;信号传导与转录激活因子3;妊娠期肝内胆汁淤积症;胎盘组织

[中图分类号] R714.25          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）06（b）-0068-04

Expression and significance of IL-6 and STAT3 in the maternity placenta tissues with intrahepatic cholestasis of pregnancy

YE Yunfei   CHEN Baixiu

Department of Obstetrics， Liuzhou General Hospital Attached to Guangxi University of Technology， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Liuzhou   545006， China

[Abstract] Objective To study the expression and the correlations of interleukin-6 （IL-6） and signal transducer and activator transcription 3 （STAT3） in the placentas of pregnant women with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP）. Methods A total of 50 pregnant women with ICP and in Obstetrics Clinic of Liuzhou General Hospital Attached to Guangxi University of Technology （“our hospital” for short） from January 2016 to December 2017 was selected as ICP group， including 25 cases of mild ICP group， 25 cases of severe ICP group. At the same time， 30 healthy pregnant women taking prenatal examination in our hospital at the same period were selected in control group. Placentas of the above gravidas were collected and the expression and localization of IL-6 and STAT3 were determined via immunohistochemistry. Results The IL-6 and STAT3 positive cell rate of ICP group were significantly higher than those of control group， the differences were statistically significant （P < 0.01）. There were no significant differences in positive cell rate between mild ICP group and severe ICP group （P > 0.05）. The positive expression rate of IL-6 and STAT3 were gradually increased in placental trophoblast among the control group， mild ICP group and the severe ICP group. There were positive relations between IL-6 and STAT3 expression in ICP group （r = 0.694， P < 0.01）. Conclusion The expression levels of IL-6 and STAT3 are positively correlated with the disease of ICP， which therefore might be used as combined diagnosis and evaluation of the state disease.

[Key words] Interleukin-6; Signal transduction and activator of transcription 3; Intrahepatic cholestasis of pregnancy; Placental tissue

妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP）是一种妊娠特发性疾病，多发生于妊娠中晚期，表现为不明原因皮肤瘙痒、肝功能异常，而产后症状迅速消失，肝功能恢复正常[1]，可导致围生儿发病率及死亡率增加。ICP发病机制尚未明确，但普遍认为其发生是多种因素共同作用引起，包括遗传变异、免疫功能失常、内分泌及环境因素等，而信号通路的相关研究少见报道。本研究通过检测ICP患者胎盘组织中白细胞介素-6/信号传导与转录激活因子3（IL-6/STAT3）通路的表达及变化，从信号通路角度研究与ICP进展的内在联系及相互关系，为进一步探讨ICP的发病机制及防治提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月～2017年12月于广西科技大学附属柳州市人民医院（以下简称“我院”）产科住院分娩、资料完整的50例ICP产妇为研究对象（ICP组），其中ICP轻度组（25例），ICP重度组（25例），同时取我院同期分娩的健康产妇30名为对照组。ICP产妇纳入标准：符合中华医学会妇产科学分会2015年发布的《妊娠期肝内胆汁淤积症诊疗指南（2015）》[2]对ICP的诊断标准。排除标准：胎位异常、多胎妊娠、头盆不称;免疫系统方面疾病、肝胆疾病;具有妊娠期高血压、心脏病及糖尿病等妊娠合并症;有复发性自然流产、死胎、畸胎等不良孕产病史;有长期服用药物及吸烟史。本研究经医院医学伦理委员会审核，参与研究者均知情同意。

1.2 ICP的分度标准

ICP分度标准：①轻度ICP，血清总胆汁酸（TBA）10～40 μmol/L;临床症状：瘙痒为主，无明显其他症状。②重度ICP，TBA≥40 μmol/L;临床症状：瘙痒严重;伴有其他情况：复发性ICP、曾因ICP致围生儿死亡者。

1.3 观察指标及检测方法

比较两组产妇的早产率、羊水粪染率及TBA、谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）水平。搜集两组产妇的胎盘，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）超敏免疫组化试剂盒检测胎盘组织IL-6及STAT3的表达。胎盘娩出后10 min内，避开胎盘钙化灶、梗死区取胎盘母体面组织2块约1 cm×1 cm×1 cm大小，用磷酸盐缓冲液（PBS）漂洗后放入10%甲醛中固定，予以酒精梯度脱水，二甲苯透明后常规石蜡包埋，切成5 μm厚的薄片备用。操作严格按SP法试剂盒步骤进行，兔抗IL-6、STAT3抗体试剂盒（购自上海生工生物工程股份有限公司），阳性对照取已知阳性片，阴性对照用PBS代替一抗，二氨基联苯胺（DAB）染色。

1.4 结果判读方法

IL-6定位在滋养层细胞的胞浆，STAT3定位在滋养层细胞的胞浆和胞核，IL-6、STAT3阳性信号为呈现棕黄色颗粒，按阳性细胞百分率评分：0%～5%为0分，>5%～25%为1分，>25%～75%为2分，>75%为3分。按细胞质或胞核着色程度评分：未着色为0分，浅黄色着色为1分，棕黄色着色为2分，棕褐色着色为3分，将两项得分相乘，<2分判为阴性（-），≥2分为阳性（+）。所有结果经过2位病理科诊断医师采用双盲法进行确认。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，采用Spearman分析IL-6及STAT3表达相关性，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 产妇妊娠资料比较

对照组与ICP组年龄比较差异无统计学意义（t = -0.592，P = 0.556，P > 0.05）。ICP组产妇终止妊娠的孕龄小于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05），ICP重度组产妇终止妊娠的孕龄小于ICP轻度组，差异有统计学意义（P < 0.05）。对照组、ICP轻度组、ICP重度组产妇的早产率、羊水粪染率、TBA、谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）呈上升趋势，对照组与ICP组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。ICP重度组的早产率、羊水粪染率稍高于ICP轻度组，但差异无统计学意义（P > 0.05），ICP重度组的产妇TBA、ALT、AST均高于ICP轻度组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1～2。

2.2 IL-6及STAT3在产妇胎盘组织中阳性表达情况比较

在对照组、ICP轻度组及ICP重度组的胎盘滋养细胞中，IL-6定位在滋养层细胞的胞浆中，见图1（封四）;STAT3定位在滋养层细胞的胞浆和胞核中，见图2（封四）。ICP组的IL-6及STAT3的阳性表达率明显高于对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01），ICP重度组IL-6及STAT3的阳性表达率稍于ICP轻度组，差異无统计学意义（P > 0.05）。IL-6、STAT3在对照组、ICP轻度组、ICP重度组产妇胎盘滋养细胞中的阳性表达率逐渐升高。ICP组中，IL-6与STAT3蛋白的表达呈正相关（r = 0.694，P < 0.01）。见表3～4。

3 讨论

ICP作为妊娠期特发性肝脏疾病，多合并有肝功能异常[3]，表现为血清总胆汁酸水平升高，血清总胆汁酸水平升高损伤细胞膜和线粒体膜，使得生物膜受损程度加重，ALT、AST水平升高进一步可导致TBA水平升高，肝功能损害越重，围生儿不良结局的发生率越高[4]。有此合并症的孕妇较易发生胎儿宫内窘迫、早产、羊水粪染、新生儿窒息等[5]，一旦孕妇诊断ICP，则需每周监测肝功能，了解总胆汁酸指标变化情况，对胎儿监护方法包括计数胎动、胎儿电子监护、血流频谱、胎儿超声，上述方法临床上普遍应用于预测围生儿不良结局[6]，但其作用仍有局限性。目前，无治愈ICP的特效药，药物只是用于改善皮肤瘙痒症状或者ICP的血清生化指标。因此对于ICP早诊断从而加强监护，适时终止妊娠为目前最有效的处理方案[7]。

3.1 IL-6在各组胎盘组织中的定位及表达

IL-6由活化的B细胞、静止的T细胞及单核巨噬细胞等产生，是一种多向性细胞因子，具广泛的生物学活性，比如调节细胞增殖分化、调控免疫防御、炎性反应等[8]。IL-6在妊娠、分娩以及胎儿生长发育中均有重要作用，正常妊娠时，IL-6维持在较低水平，调节胎盘组织的正常功能[9]。研究[10-11]发现ICP患者血清中IL-6的表达明显高于正常妊娠，且随着病情的加重该指标表达显著增强。本研究显示：IL-6定位在滋养层细胞的胞浆，IL-6在对照组、ICP轻度组、ICP重度组产妇胎盘滋养细胞中的阳性表达率呈显著递增趋势，这一结果与上述报道一致。

3.2 STAT3在各组胎盘组织中的定位及表达

STAT3在很多组织中发挥重要功能，是细胞生长过程中的调节者[12-13]。Knofler[14]的研究显示STAT3转录因子的活性与绒毛外滋养细胞的凋亡迁移和侵袭相关。有研究[15]对STAT3靶基因Fga、Fgb、Fgg和Socs3的mRNA表达进行了分析，推测抑制STAT3信号通路可能起到关键的抗炎作用，对抗胆汁淤积。本研究显示：STAT3定位在胎盘滋养层细胞的胞浆和胞核中。STAT3在对照组、ICP轻度组、ICP重度组产妇胎盘滋养细胞中的阳性表达率呈显著递增趋势，提示STAT3可能参与了ICP的发生发展。

3.3 STAT3与IL6的相关性

IL-6是一种多效应的炎症细胞，能调控多种急性期反应蛋白的转录[16]，IL-6可通过JAK-STAT3信号通路[17]发生一系列级联反应，STAT3经磷酸化入核，调控下游靶基因[18]，参与机体的炎症和免疫应答。STAT3为IL-6信号传递中的急性期反应因子，在调节细胞存活、增殖、分化中起着至关重要的作用。针对于STAT3的各种细胞因子的信号通路研究很多，其存在于细胞质中，被细胞因子激活后进入细胞核中，诱导细胞增殖分化，或促使细胞凋亡[19]。王斯南等[20]通过免疫组织化学法评价胆酸对IL-6/STAT3通路的激活情况。结果显示：胆酸可通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路。目前未见有关于IL-6/STAT3信号通路在ICP发病发展中的研究。本研究显示：IL-6与STAT3蛋白的表达于ICP组中呈正相关，IL-6高表达可能激活了STAT3表达，而且随着病情进展，表达水平越高。提示ICP的发生发展可能有IL-6/STAT3信号通路的参与，并有共同促进作用，IL-6、STAT3的表达可能与病情进展及不良妊娠结局有关。因此，可通过监测血清中IL-6及STAT3浓度了解ICP病情严重程度，为临床指导终止妊娠时机提供新的参考指标，而从信号通路水平研究ICP发病原因并为评估该病的发生发展提供了新的思路，但是本研究的样本数有限，仍需大样本、随机试验进一步证实。

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