结直肠癌患者血清中免疫相关因子的表达水平及临床意义

郭小艳

(陕西省西安市第九医院 肿瘤内科, 陕西 西安, 710054)

结直肠癌(CRC)是临床最为常见的恶性病症之一。2015年，中国CRC的发病率和病死率已位居恶性肿瘤的前5位，并呈现明显上升趋势[1-4]。CRC的发病机制目前尚未完全明确，然而多个研究[5-6]发现, CRC的发生发展与机体慢性炎症反应及免疫功能紊乱或缺陷关系密切。炎症因子是免疫细胞产生的调节机体免疫功能、在细胞间传递信息的活性物质。机体长期亚临床炎症或免疫功能紊乱导致机体内环境紊乱，进而诱发肿瘤[7]。本研究拟通过测定CRC患者外周血自然杀伤细胞(NK细胞)、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-22、IL-8等免疫相关因子水平，探究各指标在CRC临床诊断、病理进程及预后判断中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年5月—2018年8月本院肿瘤内科收治的80例CRC患者(肠癌组)、54例慢性肠炎患者(良性组)及36例健康志愿者(健康组)作为研究对象, 3组入选者均自愿签署知情协议书。肠癌组男55例，女25例，年龄42～75岁，平均(58.58±5.61)岁; 良性组男37例，女17例，年龄45～72岁，平均(58.66±5.59)岁; 健康组男25例，女11例，年龄48～75岁，平均(58.41±5.66)岁。肠癌组患者均经病理学及影像学检查确诊，且未接受手术切除或其他辅助治疗, TNM分期为Ⅰ期17例、Ⅱ期37例、Ⅲ期15例、Ⅳ期11例; 良性组患者则被确诊为慢性肠炎; 健康组志愿者心、肝、脾、肾、肺等脏器无重大疾病，且无家族肿瘤史。3组入选者性别、年龄分布比较，差异无统计学意义(P>0.05), 可行组间对比分析。

1.2 研究方法

入选者均于清晨空腹条件下取肘静脉血样5 mL, 用于外周血NK细胞及T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量测定，并用于血清免疫相关因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8水平测定。外周血NK、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-测定采用流式细胞仪[贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司，型号DxFLEX]; 血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8均采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定，所用试剂盒均购自上海基免实业有限公司，检测过程均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学处理

本研究数据采用SPSS 17.0统计学软件进行处理。3组患者性别、年龄分布行均衡性检验; 3组外周血免疫细胞及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8比较行单因素ANOVA分析; CRC病变程度与外周血免疫细胞及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8相关性采用非参数Kruskal Wallis秩和检验分析。检验因子为α=0.05, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组受试者外周血NK细胞及T淋巴细胞亚群含量比较

3组受试者外周血NK细胞、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。与健康组相比，良性组和肠癌组患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量显著上升，NK细胞、CD3+、CD4+含量显著下降(P<0.05); 与良性组相比，肠癌组CD8+、CD8+CD28-含量显著上升，NK细胞、CD3+、CD4+含量显著下降(P<0.05)。见表1。

表1 3组外周血NK细胞及T淋巴细胞亚群含量比较 %

NK细胞: 自然杀伤细胞。与健康组比较, *P<0.05; 与良性组比较, #P<0.05。

2.2 3组受试者血清免疫相关因子水平比较

3组受试者血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8水平比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。与健康组相比，良性组和肠癌组患者血清TNF-α、IL-22及IL-8水平均显著上升，而血清IL-2和IFN-γ水平显著下降(P<0.05); 与良性组相比，肠癌组TNF-α、IL-22及IL-8水平显著上升，血清IL-2和IFN-γ水平显著下降(P<0.05)。见表2。

表2 3组受试者血清免疫相关因子水平比较 pg/mL

TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL-2: 白细胞介素-2; IFN-γ: 干扰素-γ; IL-22: 白细胞介素-22; IL-8: 白细胞介素-8。

与健康组比较, *P<0.05; 与良性组比较, #P<0.05。

2.3 CRC患者免疫相关指标与临床分期的相关性分析

不同临床分期CRC患者外周血NK细胞与T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8比较，差异具有统计学意义(P<0.05), 从TNMⅠ期到TNMⅣ期，患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量和血清TNF-α、IL-22、IL-8水平呈显著升高趋势, NK细胞、CD3+、CD4+含量和IL-2、IFN-γ水平呈显著下降趋势。见表3、4。

表3 不同临床分期CRC患者外周血NK细胞及T淋巴细胞亚群含量比较 %

NK细胞: 自然杀伤细胞。与TNMⅠ期比较, *P<0.05; 与TNMⅡ期比较, #P<0.05; 与TNMⅢ期比较, △P<0.05。

表4 不同临床分期CRC患者血清免疫相关因子水平比较 pg/mL

TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL-2: 白细胞介素-2; IFN-γ: 干扰素-γ; IL-22: 白细胞介素-22; IL-8: 白细胞介素-8。

与TNMⅠ期比较, *P<0.05; 与TNMⅡ期比较, #P<0.05; 与TNMⅢ期比较, △P<0.05。

3 讨 论

肿瘤的发生发展不仅与细胞内基因异常表达有关，而且与细胞所处微环境密切相关，肿瘤宿主免疫状况则是微环境之一，被认为是恶性肿瘤发生的温床，而T淋巴细胞则属于肿瘤微环境的重要成员。肿瘤细胞逃避免疫监测可对T淋巴细胞的浸润、活化及效应功能等产生强烈抑制作用，从而使患者产生免疫耐受，最终引发无效免疫应答及恶性肿瘤进展。

T细胞依据表面抗原的不同分为CD3+、CD4+、CD8+等，其中CD3+数量代表患者机体总免疫状态; CD4+为辅助性T淋巴细胞，可协助B细胞分泌抗体，辅助机体完成抗肿瘤性免疫应答; CD8+则为抑制机体免疫功能的T淋巴细胞, CD4+/CD8+稳态则是反映机体免疫稳定的重要指标。CD8+T细胞依据是否表达CD28分为细胞毒T细胞和CD8+CD28-调节性T细胞，前者是重要杀伤细胞，后者是具有正负调节功能的免疫细胞。NK细胞是无需MHC即可发挥肿瘤杀伤作用的特殊细胞群体，其在抗肿瘤免疫应答中同样具有重要作用。邱海波等[8]报道显示, CRC患者外周血NK细胞、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量均显著低于健康对照人群; 张泉等[9]报道称, CRC患者CD4+T细胞阳性率仅为32.65%, 显著低于健康人群的90.00%和腺瘤患者的43.75%; 严健等[10]报道显示，与健康对照者相比，肺癌、消化道肿瘤及其他肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量显著下降。这些结果均与本研究结果具有一定相似性，即与健康组相比，良性组和肠癌组患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量显著上升, NK细胞、CD3+、CD4+含量显著下降; 与良性组相比，肠癌组CD8+、CD8+CD28-含量显著上升, NK细胞、CD3+、CD4+含量显著下降。随着肿瘤的不断恶化，外周血T淋巴细胞亚群的变化越明显，表明CRC患者处于细胞免疫功能抑制状态，机体对肿瘤细胞的识别、杀伤能力下降，导致机体免疫稳态失衡，从而造成肿瘤细胞加速生长，病情出现恶化。吴佳茗等[11]报道, CRC患者外周血CD3+细胞表面抗程序性死亡因子-1(PD-1)表达阳性率显著高于健康志愿者，肿瘤组织中阳性率显著高于癌旁正常组织，且越是分化程度低、发生淋巴转移、Huke分期越高的患者外周血中表达阳性率越高。元龙等[12]报道, CRC患者肿瘤组织及外周血中CD4+细胞中PD-1和T细胞免疫球蛋白黏附蛋白结构域相关分析-3(Tim-3)比例明显升高，认为该现象是CRC病情进展的机制之一。

TNF-α、IL-2、IFN-γ是由Th1细胞分泌的免疫相关分子。其中, TNF-α可与细胞膜上相应受体结合，从而引发机体炎症及免疫调节反应，是目前为止发现的肿瘤杀伤力最强的活性因子，特定情况下，其可直接诱导肿瘤细胞凋亡，同时也可通过活化机体caspase信号通路，诱导肿瘤上皮细胞死亡，从而发挥抗肿瘤功效。肿瘤微环境中TNF-α过表达是诸多癌性病变的共同特征，其水平通常与患者预后密切相关。李绪彤等[13]报道, CRC癌变组织中TNF-αmRNA表达显著高于癌旁正常组织，且其表达量与淋巴转移、细胞分化及临床分期均有显著相关性。IL-8是Th2细胞克隆分泌，可抑制Th1细胞对IFN-γ和IL-2的合成和分泌，目前发现，其与支气管原位癌、肺癌等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。IL-2主要由T细胞或T细胞系产生，控制T细胞增殖、凋亡，调控机体免疫反应。文坤明等[14]研究显示, CRC淋巴转移发生与血清IL-2水平呈明显负相关。IFN-γ具有较强的免疫调节功能，能增强抗原递呈细胞功能。肿瘤组织中, IFN可使细胞内mRNA表达水平升高，提高基因翻译转录效率，诱导肿瘤相关抗原表达，从而增强机体对肿瘤细胞的免疫识别杀伤作用。范义湘等[15]报道显示，IFN-γ可通过上调CRC患者细胞系CEA表达，增强肿瘤细胞对标记抗体的摄取。IL-22是主要由CD4+细胞中的Th22细胞分泌的细胞免疫因子，此外Th1、Th17细胞也可产生IL-22。李树斌等[16]报道, CRC患者CD4+细胞中Th22含量显著增加，且晚期患者高于早期患者，而患者血清IL-22含量具有相同变化趋势; Jiang等[17]研究显示，高水平IL-22可通过活化STAT3, 上调STAT3下游效应分子等过程，促进免疫缺陷型小鼠机体内大肠癌细胞生长; 此外, IL-22还可通过活化分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路，促进肿瘤发生发展[18]。

综上所述，机体T淋巴细胞及免疫相关因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8在CRC的发生发展过程中扮演着重要角色，临床可通过检测外周血T淋巴细胞亚群含量及Th细胞分泌性免疫相关因子的变化，实现对CRC的预测、诊断及预后判断，以便在肿瘤初期即可进行有效干预，降低肿瘤患者的临床病死率。