低分子肝素对肺腺癌A549 裸鼠VEGF 表达影响

2020-06-30 05:16陈小军
医药前沿 2020年6期
关键词:抑瘤率腺癌肝素

陈小军

(甘肃省人民医院 甘肃 兰州 730000)

肺癌是癌症最常见的恶性肿瘤之一,其生长和转移都需要新生血管的支持,多种信号分子共同参与并调控肿瘤新生血管生成,血管内皮细胞生长因子(VEGF)是目前已知活性最强的血管生成因子,可促进肿瘤血管生成,与肿瘤患者预后密切相关。本研究利用低分子肝素治疗肺腺癌A549 裸鼠模型,旨在明确低分子肝素对肿瘤生长的影响。

1.资料与方法

1.1 一般资料

研究时间为2019 年3 月—9 月,肺腺癌A549 细胞由本实验室保存,胎牛血清、DMEM 培养基、RPMI1640 培养基粉末购自美国Gibco 公司,抗VEGF 抗体购自美国Cell Signaling Techonlogy 公司。Balb/c 裸鼠(雄性,体质量为18±2g)30只由本单位所在实验动物中心提供,动物许可号:SYXK2019-0002。

1.2 肺腺癌A549 裸鼠模型的建立

肺腺癌A549 用含体积份数为10%胎牛血清的RPMI1640 培养基常规培养,传代3 次后,取对数生长期的细胞,制成瘤细胞悬液,细胞计数3×107/ml。取0.2ml 细胞悬液接种于Balb/c小鼠右腋下,以接种后2 ~9d 可在右腋下触摸到肿瘤结节(肿瘤平均直径≥5mm)为建模成功。

1.3 治疗方法

将所有建模成功的裸鼠平分为两组,模型组与肝素组,每组15 只。模型组:不给任何药物治疗。肝素组:饮水内加入肝素500IU/ml,持续应用观察4 周,2 次/周。

1.4 观察指标

(1)在治疗后4 周处死裸鼠,完整地剥离瘤组织,计算抑瘤率,抑瘤率=(模型平均瘤质量-处理组平均瘤质量)/模型组平均瘤质量×100%。(2)取处死大鼠的组织,采用免疫组化法分别检测VEGF 表达水平。制成标本,于4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜,加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液30min,0.01MPBS 清洗5min×3。加入配好的0.3%Triton×100 30min,0.01MKPBS 清洗5min×3。加入用血清稀释液稀释的一抗,4℃存放24-48h;吸去抗体,0.01MKPBS 洗5min×3。加入0.01MKPBS 稀释的的二抗,室温孵育2h。0.01MKPBS 洗5min×3。进行免疫组织化学显色,时间不超过30min,用蒸馏水迅速冲3 次后加入0.01MKPBS 终止反应,梯度酒精脱水、镜下拍照,记录VEGF 相对表达水平。

1.5 统计学方法

2.结果

2.1 抑瘤率对比

所有裸鼠均建模成功,表现为精神差、毛发脱落、活动度减少、皮毛缺少光泽,饲料消耗量减少。治疗4 周后肝素组的抑瘤率均显著高于模型组(P<0.05),见表1。

表1 两组抑瘤率对比(±s,%)

表1 两组抑瘤率对比(±s,%)

组别 只数(n) 抑瘤率肝素组 15 45.11±4.39模型组 15 0.00±0.00 P-<0.05

2.2 VEGF 阳性表达率对比

治疗4 周后肝素组的瘤组织VEGF 阳性表达率显著低于模型组(P<0.05),见表2。

表2 两组瘤组织VEGF 阳性表达率对比(±s,%)

表2 两组瘤组织VEGF 阳性表达率对比(±s,%)

组别 只数(n) VEGF 阳性表达率肝素组 15 0.55±0.04模型组 15 2.87±0.09 P-<0.05

3.讨论

由于各种因素影响,我国肺癌发病人数逐年增加,其病死率在全部恶性肿瘤中上升幅度最大。影响肺癌患者的预后因素比较多,其中一个重要因素为肿瘤转移。是由多种因素参与的复杂过程,涉及到肿瘤新生血管的形成与细胞外基质的降解等。低分子肝素已被广泛用于各种情况下的抗凝治疗,也具有其他广泛的生物学活性,能增强化疗药物效果[1]。低分子肝素可抑制肿瘤细胞在脏器毛细血管的滞留,阻断P-选择素和L-选择素与肿瘤细胞表面的粘蛋白配体的结合,影响内皮细胞释放的组织因子途径抑制剂和肿瘤细胞宿主相互作用,减少转移,且能促进肿瘤细胞凋亡[2]。血管生成的主要机制是血管内皮生长因子的过度表达来实现,新血管的形成是肿瘤转移、浸润的重要条件。作为肿瘤基质和毛细血管网形成的基础,VEGF 是特异性最高的血管生成调控因子,在肺癌组织中有较高的表达。本研究显示治疗4 周后肝素组的瘤组织VEGF 阳性表达率显著低于模型组(P<0.05),表明低分子肝素能影响肿瘤新生血管的形成。低分子肝素能够通过影响血管内皮细胞与VEGF 的结合,增强抗凝血酶的作用,减少肝素酶对细胞外基质的分解,从而对肿瘤新生血管的形成产生抑制作用[3]。

综上,低分子肝素在肺腺癌A549 裸鼠中的应用能抑制VEGF的表达,具有很好的抑瘤效果。

猜你喜欢
抑瘤率腺癌肝素
益气养阴方对宫颈癌大鼠免疫功能及癌组织的影响
肝素在生物体内合成机制研究进展
益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的影响
维拉帕米及艾灸对长春新碱耐药胃癌细胞株SGC7901逆转增效作用
紫檀茋和乙酰紫草素抑制B16F10细胞增殖的协同作用
毛蚶提取物辅助NP化疗的增效减毒作用
HIF-1a和VEGF-A在宫颈腺癌中的表达及临床意义
肝素联合盐酸山莨菪碱治疗糖尿病足的疗效观察
肝素结合蛋白在ST段抬高性急性心肌梗死中的临床意义
GSNO对人肺腺癌A549细胞的作用