湖北地区老年汉族人群CYP2C19*2、*3位点基因型分析*

宦丽君,王鹏云

华中科技大学同济医学院附属梨园医院检验科,湖北武汉 430077

细胞色素P450-2C19(由CYP2C19基因编码)是细胞色素P450超家族的一种具有高度遗传异质性的同工酶，参与多种临床药物的代谢调控，包括氯吡格雷、伏立康唑、质子泵抑制剂、抗抑郁药、卡里索罗多和地西泮等[1-2]。已鉴定的可造成CYP2C19酶活性改变的单核苷酸多态性(SNP)位点有20多个，其中最常见且已用于临床诊断的为CYP2C19*2(681G>A)和CYP2C19*3(636G>A)这2个SNP位点[3]。CYP2C19基因多态性具有明显的地域、民族差异，可能对其诊断价值产生一定的影响。通过研究CYP2C19基因多态性，了解其基因分布差异，可为开发新药、临床合理用药、减少药物不良反应等提供理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016年7月至2021年4月在本院遵医嘱接受CYP2C19基因多态性临床检测的1 036例患者为研究对象，其中男606例，女430例；年龄60～98岁，平均(74.9±12.3)岁。所有研究对象均为湖北地区常驻汉族居民，相互之间无血缘关系。

1.2方法

1.2.1基因组DNA提取 采用层析柱式血液基因组提取试剂盒，从2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝外周血中提取基因组DNA，具体方法参考产品说明书。

1.2.2基因分型 采用PCR-荧光探针法对2个位点的基因进行分型。PCR反应试剂购于武汉友芝友医疗科技有限公司。反应体系为25.0 μL，包括DNA模板2.0 μL，反应液23.0 μL(含有PCR 缓冲液、dNTPs、特异性引物和探针、内标引物)。PCR反应程序：37 ℃ UNG处理10 min，95 ℃预变性5 min，然后95 ℃ 15 s、62 ℃ 60 s反应40个循环，反应结束时采集荧光信号。反应结束后，根据扩增曲线，划定合适的基线和荧光阈值，得到不同通道Ct值并进行结果判读，确定每份标本各个位点的基因型。

1.2.3基因型的判定 以CYP2C19*2位点为例，ROX通道为内标基因，所有检测中ROX通道Ct值≤38。FAM通道Ct值≤36，VIC通道Ct值>36或无Ct值，即表示为GG野生型；FAM、VIC通道Ct值均≤36，则为GA杂合突变型(慢代谢杂合型)；而VIC通道Ct值≤36，FAM通道Ct值>36或无Ct值，即表示为AA纯合突变型(慢代谢纯合型)。

1.3统计学处理 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理及统计分析。计数资料以例数和百分率表示，各基因型频率在不同性别、地区、民族间的比较采用χ2检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1湖北地区老年汉族人群CYP2C19基因等位基因频率和基因型频率分布 基因分型结果显示，*2位点等位基因G和A的频率分别为68.05%和31.95%。*3位点等位基因G的频率为94.88%，等位基因A的频率为5.12%。见表1。

表1 CYP2C19 基因*2和*3位点等位基因频率和基因型频率分布[n(%)]

2.2不同性别湖北老年汉族人群CYP2C19*2、*3基因型比较 1 036例湖北地区老年汉族人中，CYP2C19*2和*3位点基因型野生型占40.35%，*2和*3的等位基因频率分别为31.95%、5.12%。606例男性中，*2和*3位点的等位基因频率分别为32.34%和5.28%；430例女性中，*2和*3位点的等位基因频率分别为31.40%和4.88%。各基因型在男女群体间的分布比较，差异无统计学意义(χ2=2.56，P=0.77)。见表2。

表2 不同性别 CYP2C19 基因*2 和*3位点基因型和等位基因频率分布[n(%)]

2.3不同地区汉族人群 CYP2C19*2、*3基因型比较 本研究结果与文献报道的中国其他9个地区汉族人群基因型比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同地区汉族人群 CYP2C19 基因*2 和*3位点基因型分布比较[n(%)]

2.4不同民族人群CYP2C19*2、*3基因型比较 将本研究及上述中国其他9个地区汉族人群数据分析，与其他民族人群基因型比较分析，其中*2等位基因频率在回族人群中最高，为49.39%，在哈萨克族人群中发生率最低，为15.42%；*3等位基因频率在撒拉族人群中最高，为13.64%，在藏族人群中发生率最低，为1.16%。傣族、畲族、黎族及藏族这4个民族人群的CYP2C19基因型分布与汉族人群比较，差异无统计学意义(P>0.05)。维吾尔族、回族、蒙古族、侗族、撒拉族和哈萨克族这6个民族人群中的CYP2C19基因型分布与汉族人群比较，差异有统计学意义(P<0.05)。不同民族 CYP2C19 基因*2 和*3位点基因型分布比较,见表4。

表4 不同民族 CYP2C19 基因*2 和*3位点基因型分布比较[n(%)]

3 讨 论

CYP2C19酶活性的个体间差异可导致药物反应、药物活性或解毒的显著差异，因此了解影响CYP2C19酶活性的遗传因素非常重要。本研究分析了1 036例湖北地区老年汉族人CYP2C19*2和*3位点基因型，野生型占40.35%，*2和*3的等位基因频率分别为31.95%和5.12%，*2 和 *3等位基因携带率与日本、韩国、菲律宾等东亚及东南亚人群携带率接近[20]，而明显高于非洲黑种人和欧洲白种人[21]，从而也证实了CYP2C19的基因多态性分布具有种族和地域差异。

本研究发现，湖北地区老年汉族人群CYP2C19*2、*3基因型分布与云南等9个地区汉族人群比较，差异无统计学意义(P>0.05)。傣族、畲族、黎族及藏族这4个民族人群的CYP2C19基因型分布与汉族人群比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而维吾尔族、回族、蒙古族、侗族、撒拉族和哈萨克族这6个民族人群的CYP2C19基因型分布与汉族人群比较，差异有统计学意义(P<0.05)。我国是一个多民族国家，不同民族间文化、饮食，尤其是遗传背景具有一定差异，所以各民族间CYP2C19基因多态性基因频率分布也存在一定差异。其中，回族人群*2等位基因频率最高，野生型*1/*1 的频率在11个民族中最低(19.51%)；哈萨克族人群野生型和 *3位点纯合型突变的发生率均最高，而*2位点纯合突变发生率为11个民族中最低；撒拉族人群*2/*3基因型发生率最高(11.11%)。此外，个别民族出现某些基因型缺失的情况，如维吾尔族、蒙古族、黎族、侗族、撒拉族人群中均未检测到*3/*3 基因型，而藏族人群中未检测到*3/*3 和*2/*3基因型，可能由于个别基因位点突变率低，也与环境和遗传因素相关。

综上所述，CYP2C19*2、*3位点基因型在我国不同地域、民族人群差异较大，通过对CYP2C19*2、*3位点基因型分型，可预测个体药物代谢速度，进而对特定药物治疗进行个体化指导，也为研制新药提供基础，促进个性化医疗的发展。