罗堆多吉颗粒提取与纯化工艺优化研究*

泽仁拉姆 央卓玛 袁瑞瑛 卓玛东智 王聚乐 周毛措

西藏大学 西藏拉萨 850000

罗堆多吉颗粒由罗堆多吉（藏党参）、甘松、木香、宽筋藤、齿苞黄堇（陆额）、藏荆芥等藏药组成，是藏医治疗痛风性关节炎的经验方[1]，其可明显改善症状，具有标本兼治的特点[2，3]。为了提高本复方使用的有效性和便利性，本文根据复方有效成分性质，采用正交试验法对其醇提水沉工艺进行研究，为后期生产提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

JT1003D分析天平（上海力辰邦西仪器有限公司）；SXKW 调温型电热套（北京永光明医疗仪器有限公司）；RE-52AA 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Agilent 1220 Infinity液相色谱系统（安捷伦科技，美国）。

1.2 材料

木犀草素、甘松新酮对照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-20102418、MUST-20110606）；甲醇、乙腈为色谱纯，超纯水，其余试剂均为分析纯；实验所用药材均购自西藏凌云生物科技开发有限公司。

2 方法与结果

2.1 木犀草素与甘松新酮的含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取木犀草素5.80mg、甘松新酮5.10mg，溶于甲醇中，使木犀草素浓度为0.58mg/mL，甘松新酮浓度为0.51mg/mL，混合即得对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

称取复方药材适量，加入10 倍70%乙醇回流提取两次，每次2h，过滤，浓缩即得。

2.1.3 色谱条件

HPLC 条件：流速：0.8ml/min；检测波长250nm；进样量：20μl；Thermo Hypersil GOLD C18 液相色谱柱(250x4.6mm，5μm)；流动相=乙腈(B)：水(A)，0～10min，5-15%(B)，10～15min 15～30%(B)15～25min，30～65%(B)，25～35min，65-75%(B)。

2.1.4 方法学考察

2.1.4.1 线性关系考察

以对照品浓度(μg/ml)为横坐标，以对照品峰面积为纵坐标，可得木犀草素在18.125～580μg/ml 范围内线性关系良好，回归方程为：y=17.087x+1.5087，R2=0.9997。甘松新酮在15.94～510μg/ml 范围内线性关系良好，回归方程为：y=16.145x+6.014，R2=0.9996。

2.1.4.2 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液适量，重复进样6 次，记录峰面积。结果显示木犀草素RSD 为 0.73%，甘松新酮RSD 为 0.86%，表明仪器精密度良好。

2.1.4.3 重复性试验

取供试液连续测定6 次，记录木犀草素和甘松新酮峰面积的RSD 值分别为1.90%和1.10%，表明该方法重复性良好。

2.1.4.4 稳定性试验

分别于0、2、4、8、12、24 h 吸取适量供试液，进样，测得木犀草素和甘松新酮峰面积的RSD 值分别为0.94%和0.22%。表明供试液在24h 内性质稳定。

2.1.4.5 加样回收试验

木犀草素和甘松新酮的平均加样回收率为98.06%和100.41%，RSD 值分别为0.98%和1.05%。

2.2 正交试验优化醇提工艺

2.2.1 醇提工艺设计[4-7]

考察乙醇浓度(%)、料液比、时间(h)对木犀草素、甘松新酮含有量及浸膏率的影响，设计如表1 所示。

表1 醇提工艺因素水平

2.2.2 醇提工艺正交试验结果分析

见图1，正交试验结果见表2，方差分析见表3。

图1 罗堆多吉颗粒醇提工艺HPLC 色谱图

表2 醇提工艺正交试验结果

表3 醇提工艺方差分析

2.3 正交试验优化水沉工艺

2.3.1 水沉工艺设计[8-10]见 表4

表4 水沉工艺因素水平

2.3.2 水沉工艺正交试验结果及统计分析

HPLC 色谱图见图2，正交试验结果见表5，方差分析见表6

图2 罗堆多吉颗粒醇提水沉工艺HPLC 色谱图

表5 水沉工艺正交试验结果

表6 水沉工艺方差分析

2.4 醇提水沉工艺验证见表7

表7 提取工艺验证结果

3 结论

本文在单因素试验的基础上，采用正交设计对罗堆多吉颗粒的提取纯化工艺进行优化。以主要有效成分木犀草素、甘松新酮以及浸膏得率为指标，筛选了罗堆多吉颗粒最佳醇提工艺为8 倍量80%乙醇，提取2 次，每次2h；最佳水沉工艺为加水量40 倍，药液相对密度1.1，静置时间16h。